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鱼和虾类经常接触异常的水温、低溶氧量的水体、或高或低的盐度等不利生存的环境,在这些逆境胁迫下,生物有机体会特异开放一些基因的表达或提高某些特定蛋白的表达丰度,以度过难关。这些基因和蛋白质包括14—3—3基因、抗冻蛋白、热激蛋白和Na／K—ATPase酶等。同时,这些基因和产物对于人类研究生命的起源和进化、改良经济水生生物的品质及环境监测等都具有重要意义。 相似文献
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海洋湖沼是一个巨大的天然产物宝库，人类向其索取赖于生存繁衍的食物有着几千年的历史，但真正提出“向海洋要药”、用科学的方法研究开发海洋天然产物始于本世纪的60年代。80年代后期，由于新药、特药的需求量增大，研究技术特别是基因工程技术的突飞猛进，使得研究开发海洋天然产物出现新的热潮，成为当今世界科学研究的焦点。 相似文献
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生物技术又称生物工程，它是指应用生命科学和工程技术，在个体、细胞和分子水平上对生物进行定向设计，对生物材料加工获得产物，从而为人类提供产品和服务的新型的跨学科技术。包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程四大技术体系。 相似文献
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取含有小鼠重金属螯合蛋白（mMT)基因启动子及人生长激素（hGH)基因的鱼样品，以Qiagene核酸纯化技术对鱼组织DNA进行纯化。常规PCR检测显示，mMT启动基因和hGH基因的PCR产物分别为240bp和130bp，与设计相符。PCR产物的核酸测序结果证实其扩增产物具特异性。地高辛-PCR（Dig-PCR)标记反应显示，2个基因均产生1条Dig标记的特异产物带。Dig-PCR-ELISA检测敏感性试验显示，对mMT启动子和hGH基因的检测敏感性可达10^-3，与常规PCR结合琼脂糖胶电泳检测方法相比，检测敏感性可提高至100-1000倍。试验证明，针对mMT和hGH基因所建立的Dig-PCR-ELISA技术特异可靠。 相似文献
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Rab家族基因在囊泡的形成、转运、黏附、锚定和融合等各个阶段发挥重要作用。在已有的马氏珠母贝RabcDNA片段的基础上,采用RACE方法克隆了该基因的全长。cDNA长度2519bp,编码区长618bp,编码206个氨基酸。编码的蛋白质序列分析表明,该基因具有Rab家族的全部保守结构,与人类等其他生物的Rab7亚家族的同源性最高。RT-PCR结果显示,该基因在马氏珠母贝的鳃、足和胃组织中没有扩增产物,在卵、感染和未感染凿贝才女虫Polydora ciliata的马氏珠母贝的肝脏和血液中均检测到了与预期大小相符的扩增产物,存在组织差异性表达。 相似文献
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海洋，是生命的起源，也是人类赖以生存和发展的广阔天地。占地球总面积７０％以上的海洋，蕴藏着极为丰富的生物资源、矿物资源和油气资源，随着人类的进步和科学技术的发展，海洋将为人类提供越来越多的资源和宝贵财富。由于海洋是全球生命支持系统的一个基本组成，极其丰富的海洋渔业资源是人类生存和发展的主要支撑条件。我国几十年来一直把开发和利用海洋渔业资源作为一项重大国策来抓。对此，笔者认为：一、主要影响因素据统计，２０００年我国水产品总产量为４２７８．９９万吨。其中，海水养殖１０６１．２８万吨，内陆养殖为１５１… 相似文献
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斑节对虾Sox基因HMG盒的PCR扩增及SSCP分析 总被引：4，自引：0，他引：4
SRY基因是人类及哺乳动物睾丸决定因子的最佳候选基因,HMG盒是SRY基因编码蛋白质的唯一功能区,在性别决定中极其重要且高度保守,许多进化程度上明显不同的物种中都能检测出SRY基因的HMG盒,即Sox基因。斑节对虾是一种重要经济虾类,其性别决定机制研究薄弱,至今未找到性染色体。本研究根据人的SRY基因的HMG盒保守区的核苷酸序列,设计了1对兼并引物,通过PCR扩增出斑节对虾的Sox基因,并对扩增产物进行SSCP分析。结果表明,斑节对虾雌雄个体均存在Sox基因,从雌雄个体中均扩增出约350bp和220bp两条基因片段,推测其中350bp片段含内含子,SSCP结果显示斑节对虾内存在Sox基因家族的不同成员,且雌雄存在差异最后我们讨论了对虾性别决定可能的机制。 相似文献
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Kuchijirosho is a fatal disease of commercially cultured fugu, Takifugu rubripes. The transmissible nature of kuchijirosho strongly suggests that an infectious pathogen is the causative agent. Because it is filtrable, the agent is thought to be a virus; however, it has not yet been identified. The lack of a permissive cell line for the putative kuchijirosho-causing agent (KCA) has hindered research on the identification of this pathogen. We inoculated brain extract prepared from kuchijirosho-affected fugu onto an established fugu cell line, fugu eye, and observed that cytopathic effect appeared 7 days after inoculation. Injection of the culture medium of infected fugu eye cells into fugu resulted in the onset of kuchijirosho, indicating that fugu eye cells are able to proliferate KCA. An infectious fraction separated by sodium iottalamate density gradient centrifugation showed a density of 1.15 g mL(-1) equivalent to that of KCA derived from affected fugu brain. To determine whether the genome of KCA is RNA or DNA based, nucleotide synthesis inhibitors were applied to inoculated fugu eye cell line to influence the production of KCA. 5-Fluorouracil but not IUdR showed a concentration-dependent inhibition of KCA yield. These results suggest that KCA is an RNA virus. 相似文献
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C‐F Low B Syarul Nataqain H‐Y Chee M Z H Rozaini M Najiah 《Journal of fish diseases》2017,40(11):1489-1496
Progressive research has been recently made in dissecting the molecular biology of Betanodavirus life cycle, the causative pathogen of viral encephalopathy and retinopathy in economic important marine fish species. Establishment of betanodavirus infectious clone allows the manipulation of virus genome for functional genomic study, which elucidates the biological event of the viral life cycle at molecular level. The betanodavirus strategizes its replication by expressing anti‐apoptosis/antinecrotic proteins to maintain the cell viability during early infection. Subsequently utilizes and controls the biological machinery of the infected cells for viral genome replication. Towards the late phase of infection, mass production of capsid protein for virion assembly induces the activation of host apoptosis pathway. It eventually leads to the cell lysis and death, which the lysis of cell contributes to the accomplishment of viral shedding that completes a viral life cycle. The recent efforts to dissect the entire betanodavirus life cycle are currently reviewed. 相似文献
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对虾白斑综合征病毒蛋白质组的研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
白斑综合征病毒WSSV(White Spot Syndrome Virus,WSSV)是引起对虾大规模死亡的主要病毒性病原,且该病毒感染的宿主广泛。自WSSV基因组全序列公布以来,国内外的学者对WSSV的研究热点转移到该病毒基因产物功能的相关研究上面来。弄清WSSV感染机理是有效防治病毒的基础,而对其感染机理的阐释则主要是搞清病毒各蛋白在感染中的作用,这些是WSSV蛋白质组学的研究内容之一。分析WSSV蛋白同时可以在分子水平上为研究海洋和陆地生物病毒的进化趋势提供有力的基础。 相似文献
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斑马鱼(Danio rerio)早期胚胎发育囊胚时期是胚胎发育过程的关键时期,利用i TRAQ蛋白质质谱分析技术,检测斑马鱼早期胚胎发育过程中囊胚sphere时期的蛋白质表达情况,并分析该时期表达的蛋白质的相应功能和参与调控的生物过程。以野生型斑马鱼发育至sphere时期即4 hpf的胚胎为样本,利用i TRAQ标记与LC-MS/MS串联质谱技术,结合数据库比对,对该时期表达的蛋白质进行定性和定量的鉴定分析。检测结果共鉴定到的总蛋白数为1 178个,利用生物信息学进行功能分析,发现这些蛋白广泛参与了细胞信号传递、细胞运动和细胞骨架构建、细胞增殖、细胞分化、物质合成与代谢等各项重要的生命活动过程。研究表明,利用i TRAQ标记的方法可以对4hpf时期的斑马鱼胚胎中的蛋白质进行有效的分离和鉴定,并初步建立了斑马鱼早期发育关键阶段sphere时期的蛋白质组表达图谱,以期为斑马鱼胚胎发育过程中蛋白质组学和调控机制的研究提供参考。 相似文献
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A. Shahsavarani Z.C. Thomas J.S. Ballantyne P.A. Wright 《Fish physiology and biochemistry》2001,24(4):321-326
We have developed and validated a novel technique that allows for a relatively quick and efficient isolation of embryonic
tissue from the yolk in the rainbow trout, Oncorhynchus mykiss. After removal of the chorion, the yolk is first dissolved in an imidazole-KCl buffer and separated from the embryo proper
and yolk sac (tissues) by centrifugation. SDS gel was used to identify proteins of 165, 48, 35 and 10 kDa unique to the embryonic
tissue and a 6 kDa protein unique to the yolk. Using protein analysis and enzyme activity measurements (lactate dehydrogenase
and glutamate dehydrogenase) of each fraction, we have determined that cross contamination is less than 10%. This new method
will facilitate biochemical studies of the embryo and yolk that were previously very time consuming.
This revised version was published online in August 2006 with corrections to the Cover Date. 相似文献
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在病毒感染宿主细胞过程中,病毒利用宿主细胞骨架如微丝、微管等完成进入、运输和释放等过程。为分离鉴定石斑鱼虹彩病毒SGIV囊膜蛋白,实验应用去污剂溶解病毒囊膜,然后结合1-D-SDS-PAGE切胶分离和LC-MS/MS质谱鉴定两种方法进行检测,除了病毒编码的囊膜蛋白外,还发现7种宿主细胞来源的蛋白,包括细胞骨架微丝肌动蛋白actin等,由此推测这些宿主蛋白是与病毒纯化过程中共纯化获得。鉴于actin在病毒感染中发挥着重要的作用,进一步通过蛋白印迹、免疫电镜实验验证了actin与病毒共纯化,揭示actin是一种来源于宿主细胞并包装到病毒颗粒表面的宿主蛋白,且由于特异性作用黏附于病毒粒子表面,在分离病毒囊膜时与囊膜蛋白共纯化。此外,荧光显微镜观察发现,在病毒感染晚期,细胞变圆,细胞微丝actin蛋白和SGIV病毒共定位于细胞膜,提示actin与病毒释放相关。同时电镜观察也表明,病毒在感染细胞中释放时获得由宿主细胞质膜衍生而来的囊膜,由此推测actin可能在病毒释放时特异性包裹于SGIV病毒表面。研究表明,actin参与石斑鱼虹彩病毒SGIV的释放过程。 相似文献
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鲤疱疹病毒Ⅱ型主要免疫原性蛋白的鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
为了鉴定CyHV-2的主要免疫原性蛋白,本研究用分离的CyHV-2-YC-1分离株(下简称CyHV-2)感染异育银鲫尾鳍细胞系(GiCF),用蔗糖密度梯度超速离心法对细胞感染液中的CyHV-2进行纯化,纯化后的CyHV-2病毒免疫小鼠制备抗CyHV-2多克隆抗体。纯化的病毒颗粒经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和考马斯亮蓝染色后,用抗CyHV-2多克隆抗体进行Western blotting分析和质谱鉴定。结果显示,透射电镜下观察发现50%～66%的蔗糖梯度多见完整囊膜包裹的CyHV-2病毒颗粒,也有少量囊膜破损的病毒颗粒。Western blotting结果显示,抗CyHV-2多克隆抗体与多种病毒蛋白具有特异性免疫反应,质谱鉴定显示,其中8种主要免疫原性蛋白分别是ORF92、ORF115、ORF25、ORF57、ORF66、ORF72、ORF131和ORF132。研究表明,通过蔗糖密度梯度超速离心法提纯CyHV-2病毒颗粒后,本研究制备的抗CyHV-2多克隆抗体能够特异性识别CyHV-2病毒的主要免疫原性蛋白。本研究将为CyHV-2免疫学检测方法的建立以及疫苗的研制提供更多的候选抗原。 相似文献
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《Aquaculture (Amsterdam, Netherlands)》1986,54(4):313-319
A simple inexpensive method of determining level of ploidy in fish using silver-stained cell preparations is evaluated. The method involves determining the maximum number of nucleoli per cell on silver-stained slides. Any tissue can be used since whole cells, rather than chromosomes are required for analysis. Since the amount of tissue needed to make slides is very small, samples may be obtained from fish about 7–8 cm long without sacrificing the animal. Results from three salmonid species (rainbow trout, chinook salmon and coho salmon) showed that haploid individuals had one nucleolus/cell, diploid individuals had one or two nucleoli/cell and triploid individuals had 1, 2 or 3 nucleoli/cell. The fraction of cells with three nucleoli/cell was higher in triploid embryos (averaging 75%) than in gill tissue from triploid fish of 6 months or 2 years of age (averaging 43% and 36%, respectively). However, no cells with three nucleoli were ever found in diploid individuals, making identification of triploids unambiguous. This method should be applicable to most fish species since the majority of those examined have been shown to have only one chromosome with a nucleolar organizer region (NOR) per haploid genome. 相似文献