重金属镉螯合物人工抗原的合成与鉴定     

张云显  刘发央  杨慧  赵丽  李鹏  李霞 《安徽农业科学》2009,37(14)

[目的]合成并鉴定重金属镉螯合物抗原。[方法]以乙二胺四乙酸(EDTA)或二乙烯三胺五乙酸(DTPA)为双功能螯合剂,合成了半抗原,并将半抗原与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)或卵清蛋白(OVA)偶联制备完全抗原,对其进行浓度测定、紫外分光光度计扫描、SDS-PAGE电泳定性鉴定和石墨炉原子吸收光谱法检测。[结果]利用二喹啉甲酸(BCA)法检测分离纯化后的的Cd-DTPA-OVA、Cd-EDTA-KLH、DTPA-OVA和EDTA-KLH中蛋白的实际浓度依次为1.862±0.038、5.121±0.024、25.155±0.014和8.459±0.018mg/m l,紫外扫描和电泳鉴定证明,抗原合成成功;用吸收光谱法检测的上述抗原中的镉离子含量依次为34.6±0.3、96.5±0.5、0和0μg/m l,表明半抗原确实偶联到蛋白质上,进一步证明抗原合成成功。[结论]该研究为重金属螯合物单克隆抗体的制备和建立快速检测方法奠定基础。  相似文献   

重金属锌螯合物人工抗原的合成与鉴定     

刘丹  赵丽  刘荣堂  李霞  杨慧  张云显 《安徽农业科学》2009,37(8):3369-3371

[目的]合成并鉴定重金属锌螯合物抗原,为制备重金属锌螯合物抗原特异性单克隆抗体和建立快速检测方法奠定基础。[方法]用二喹啉甲酸（BCA）法测定抗原浓度,利用SDS—PAGE电泳定性鉴定半抗原、抗原、KLH和OVA,用石．墨炉原子吸收光谱法检测抗原中Zn^2＋离子的含量。[结果]利用BCA法检测得分离纯化后的Zn-DTPA-OVA、Zn—DTPA—KLH、DTPA—OVA、DTPA-KLH中蛋白的实际浓度依次为：25．155±0．038、4．195±0．014、9．242±0．015、6．609±0．025mg／ml。最佳反应备件是A液中含有的Zn^2＋物质的量是B液中舍有的DTPA物质的量的5倍;螯合剂物质的量与蛋白中赖氨酸物质的量的比例为2：1。通过石墨炉原子吸收光谱法检测得Zn—DTPA—OVA、Zn-DTPA-KLH、DTPA-OVA、DTPA—KLH、HEPES中全Zn^2＋的含量依次为：295．0±0．3、49．5±0．5、0、0、0μg／ml。[结论]抗原合成是成功的。  相似文献   

秦巴山区橡子和橡子淀粉中单宁及矿质元素含量的测定     

冉晓刚  江海  陈文强 《江苏农业科学》2011,39(6)

采用紫外分光光度法、火焰原子吸收法、石墨炉原子吸收法分别测定了秦巴山区橡子及其橡子淀粉中的单宁、常规元素和重金属元素铅、砷、镉含量.结果表明,橡子中的单宁含量远高于橡子淀粉中的含量,橡子淀粉中的Fe、Cu、Pb、As含量比橡子中含量高,且橡子淀粉经过加工后,其中的单宁脱除明显而金属元素含量变化增减不一.  相似文献   

苦皮藤素Ⅴ人工抗原的合成与鉴定   总被引：2，自引：0，他引：2  

杨润亚  祁志军  吴文君 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2004,32(6):64-68

采用琥珀酸酐法合成了苦皮藤素 的衍生物苦皮藤素 -半琥珀酸酯(CA-SG),在此基础上,分别采用混合酸酐法和碳化二亚胺法合成了苦皮藤素 的人工抗原(CA-BSA,CA-BSA2),采用紫外分光光度计法、SDS-PAGE及PAGE电泳法对合成的人工抗原进行了定性鉴定,结果均表明人工抗原合成成功。根据半抗原、人工抗原及其载体在240nm处的紫外吸光值,计算出2种人工抗原中半抗原与载体的分子结合比率分别为11.6和10.7。  相似文献   

苦皮藤素人工抗原的合成与鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

杨润亚  祁志军  吴文君 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2004,(6)

采用琥珀酸酐法合成了苦皮藤素 的衍生物苦皮藤素 -半琥珀酸酯(CA-SG),在此基础上,分别采用混合酸酐法和碳化二亚胺法合成了苦皮藤素 的人工抗原(CA-BSA,CA-BSA2),采用紫外分光光度计法、SDS-PAGE及PAGE电泳法对合成的人工抗原进行了定性鉴定,结果均表明人工抗原合成成功。根据半抗原、人工抗原及其载体在240nm处的紫外吸光值,计算出2种人工抗原中半抗原与载体的分子结合比率分别为11.6和10.7。  相似文献   

碳二亚胺法制备阿莫西林人工抗原及其鉴定     

刘庆堂  王磊  职爱民  滕蔓  胡骁飞  孙亚宁  宋春美  王寅彪  张改平 《河南农业科学》2012,41(3):142-145

合成、鉴定了阿莫西林(amoxicillin,AMO)人工抗原,并通过动物免疫法生产了亲和力高、特异性好的鼠源AMO多克隆抗血清。采用碳二亚胺(EDC)法将AMO分别与载体蛋白BSA和OVA偶联,合成完全免疫抗原AMO-BSA和检测抗原AMO-OVA,经紫外分光光度法和SDS-PAGE以及动物免疫进行鉴定。结果表明,偶联后的紫外吸收峰与BSA和AMO相比都发生了一定的位移,AMO-BSA在276nm处出现最大吸收峰,BSA的泳动速度大于AMO-BSA。免疫后获得的3只小鼠多抗血清,通过间接竞争ELISA测定,效价可达1×10-4以上,1号小鼠半数抑制浓度(IC50)为573.75ng/mL,敏感性较好。AMO完全人工抗原的合成以及鼠源多克隆抗体血清的制备,为AMO单克隆抗体的制备奠定了基础。  相似文献   

微波消解-石墨炉原子吸收分光光度法测定饲料中的镉     

谭旭信  杜红鸽  张发旺  舒畅  朱红继  李灵平 《中国农业科技导报》2009,11(Z1):3-5

建立了微波消解-石墨炉原子吸收分光光度法测定饲料中镉的方法。样品用硝酸和过氧化氢进行微波消解,用石墨炉原子吸收分光光度计测定。镉在1.0~10.0 ng/mL浓度范围内有良好的线性关系,相关系数R=0.999 7。实验结果表明微波消解与湿法消解、干灰化消解法测定结果无显著差异,回收率分别为77.5％、79.0％和80.5％。该方法简便、快速,能大大减少样品处理时间,提高工作效率。  相似文献   

重金属镉在锦鲤各组织中的富集     

陈再忠  沈芾  孔令富  黄华婷  彭玲珏 《江苏农业科学》2011,39(6)

以锦鲤为对象,研究了重金属镉在锦鲤各组织中的富集情况.试验设置6个浓度梯度,包括5个处理组和1个空白对照组,每组设置3个水平.试验采用静水法,通过人工曝气提供充足的氧气.将锦鲤暴露在含有不同浓度镉离子的试验液中72 h,解剖取样,采用干法灰化法于马弗炉500℃处理样品,然后用石墨炉原子吸收分光光度计分别测定锦鲤组织样本的吸光值,通过标准曲线分别确定锦鲤组织中重金属镉的含量,并进行分析比较.研究结果表明,锦鲤组织中镉含量的变化规律为:暴露浓度在0～8 mg/L的浓度范围内,锦鲤鳃、肝脏、肌肉中镉的含量随着试验液中镉离子浓度的升高而增加;当暴露浓度超过8 mg/L,试验液中镉离子浓度继续升高,锦鲤鳃、肝脏、肌肉中镉含量不再增加反而下降.同一暴露浓度下锦鲤3种组织中的镉含量及锦鲤各组织对镉的富集能力均为肝脏＞鳃＞肌肉.  相似文献   

桔青霉素人工抗原合成及偶联比测定     

李娇  钟理  田世民  金涌  崔艳芬  任香夫  祁淑红  刘畅 《安徽农业科学》2010,38(36)

[目的]建立一种快速准确测定人工抗原偶联比的方法。[方法]通过载体蛋白BSA合成桔青霉素人工抗原,用SDS-PAGE电泳法、紫外吸收法、质谱法对其进行鉴定。[结果]经过3种方法的鉴定,桔青霉素人工抗原偶联成功,紫外吸收法测得其偶联比为8.4,质谱法测得其偶联比为6。[结论]对3种供试方法比较发现,质谱法能够快速鉴定人工抗原而且能够准确测定人工抗原的偶联比。该研究为桔青霉素克隆抗体的制备及建立桔青霉素的酶联免疫检测方法奠定了基础。  相似文献   

抗重金属Cd~(2+)单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其免疫学特性鉴定     

王亚楠  王淑云  张海棠  王自良 《西北农业学报》2014,23(11):24-29

旨在制备抗Cd2+高效价、敏感、特异的单克隆抗体(Cd2+mAb)。用异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE)鳌合Cd2+合成Cd-ITCBE半抗原、异硫氰酯法制备免疫抗原Cd-ITCBE-BSA和包被抗原CdITCBE-OVA,紫外分光光度法(UV)、SDS-PAGE和电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)进行鉴定;用Cd-ITCBE-BSA免疫Balb/C小鼠细胞融合技术建立抗Cd2+的单克隆抗体(Cd2+mAb)杂交瘤细胞株、体内诱生腹水法制备Cd2+mAb并鉴定其免疫学特性。结果表明,人工抗原偶联成功,Cd-ITCBE-BSA和CdITCBE-OVA中载体蛋白与Cd2+的质量浓度分别为7.1g/L、191.7mg/L和6.7g/L、130.1mg/L;筛选出1A3、2B7、2E10、4F3 4株杂交瘤细胞,其中2E10株间接ELISA效价细胞培养上清为1∶(1.28×103),腹水为1∶(5.12×105),同种型为IgG1/κ,亲和常数(Ka)为7.58×108 L/moL,对Cd2+的半数抑制质量浓度(IC50)为16.3μg/L,与Hg2+的交叉反应率(CR%)为18.6%,与其他化合物无交叉反应。  相似文献