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对惠州市冬种马铃薯卷叶病发病情况进行调查研究,建立了马铃薯卷叶病毒(PLRV)RT-PCR检测技术。结果表明,马铃薯卷叶病发病率为3.0%～29.7%。比较LiCl、异硫氰酸胍和试剂盒3种方法提取马铃薯卷叶病毒总RNA,以异硫氰酸胍和试剂盒提取效果较好,LiCl次之;根据卷叶病毒外壳蛋白基因序列设计引物,从感染马铃薯卷叶病毒的马铃薯叶片中提取出病毒RNA,合成cDNA并运用RT-PCR技术进行体外扩增,得到一条长度约336bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致,而健康叶片RNA扩增未得到任何产物。应用RT-PCR技术对马铃薯试管苗和种薯进行了卷叶病毒检测。 相似文献
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为了确立一种适合于芸芥柱头总RNA的提取方法,以芸芥柱头为材料,在常规异硫氰酸胍法的基础上提取和纯化总RNA.结果表明.采用常规异硫氰酸胍法提取的芸芥柱头总RNA,28 S RNA和18S RNA条带的亮度之比接近于1:1,而不是所要求的2:1,产生了明显的降解.改进异硫氰酸胍法提取的芸芥柱头总RNA,28S RNA和18S RNA条带的亮度之比接近于2:1,提取的RNA完整性好,但存在痕量DNA污染.用DNase降解痕量DNA,发现DNA去除较干净,且RNA没有发生降解,可作为反转录底物进行第一链cDNA合成.确立了一种适合于芸芥柱头总RNA的提取与纯化方法,为芸芥自交亲和基因的克隆及功能分析奠定了基础. 相似文献
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2种大豆总RNA提取方法的改良 总被引：3，自引：0，他引：3
对大豆总RNA的提取方法T rizo l法和异硫氰酸胍法进行了改良,比较了改良前后2种方法的提取效果。结果表明,2种改良方法提取的大豆总RNA质量较高、完整性较好,完全可以满足后续研究要求,RNA产率均超过220μg/g。改良T rizo l法适用于大豆根、茎、叶及生长点总RNA的提取,而改良异硫氰酸胍法适用于大豆根、茎及生长点总RNA的提取。 相似文献
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以5种鲜切花为材料,分别采用Trizol法、异硫氰酸胍法、改良十六烷基三甲基溴化铵（Cetyltrimethyl ammonium bromide,CTAB）法和RNA plant试剂盒法提取总RNA,并运用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测比较RNA的完整性和纯度.结果表明,Trizol法和异硫氰酸胍法对百合（Lilium longiflorum）、非洲菊（Gerbera jamesonii）和香石竹（Dianthus caryophyllus）鲜切花RNA的提取效果较好,但不适于月季（Rosa hybrid）和姜花（Hedychium coronarium）的RNA提取.改良CTAB法和RNA plant试剂盒法对鲜切花RNA的提取具有普遍适用性,提取的RNA完整性好、纯度高、不易降解.其中改良CTAB法还具有成本低、提取量大等优点,是提取月季、百合、白姜花、非洲菊和香石竹鲜切花组织RNA的较理想方法. 相似文献
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牡丹根系RNA提取方法的比较研究 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】探索牡丹根系RNA提取的最佳方法。【方法】以牡丹(Paeonia suffruticosa)'凤丹'5a生实生苗的根系为材料,首次比较研究了改良Trizol法、改良CTAB法、改良异硫氰酸胍法及Column Plant RNAout试剂盒法提取RNA的效果。【结果】改良Trizol法及改良异硫氰酸胍法均不能从牡丹根系中提取出高质量RNA。而改良CTAB法及试剂盒法提取RNA的电泳结果可见清晰完整的28S rRNA1、8S rRNA及5S rRNA条带,其中28S rRNA与18S rRNA的亮度比约为2∶1;浓度及纯度检测表明这2种方法提取的RNA纯度较高,且改良CTAB法提取的RNA浓度(269.50μg.g-1)是试剂盒法(82.14μg.g-1)的3倍。【结论】结合RNA的提取质量和成本,改良CTAB法更适宜于牡丹根系RNA的提取。 相似文献
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文冠果花药总RNA提取方法研究 总被引：27，自引：4，他引：27
以文冠果花药为材料 ,利用TRIZOL试剂快速提取法、异硫氰酸胍法和CTAB法提取花药总RNA .通过RNA产率、纯度、电泳图谱和mRNA差异显示等分析来确立适于文冠果花药RNA分离的方法 .研究结果表明 ,CTAB法提取的RNA呈现出 2 8SrRNA、18SrRNA和 5SrRNA三条较清晰的条带 ,很少有降解 ,其A2 6 0 A2 80 值可达 1 94 4 ,A2 6 0 A2 30 值为2 16 5 ,具有很高的纯度 .另 2种方法获得的RNA纯度较低 ,降解严重 ,有较多小分子和盐存在 ;RNA无明显条带出现 ,而是以小分子RNA弥散状分布 .使用差异显示法分析发现 ,用CTAB法提取的花药总RNA可得到理想的扩增条带 . 相似文献
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为找到较好的白背飞虱RNA提取方法用于大规模带毒率检测、SRBSDV的早期监测及科学防控提供参考,采用Trizol试剂盒法、改良Trizol法、改良CTAB-LiCl法、改良异硫氰酸胍法和NaOH粗提法5种方法提取单头白背飞虱的总RNA,进行检测比较其提取速率和稳定性。结果表明:采用Trizol试剂盒法、改良Trizol法、改良CTAB-LiCl法、改良异硫氰酸胍法和NaOH粗提法5种方法提取单头白背飞虱的总RNA浓度分别为113.08ng/μL、222.43ng/μL、57.68ng/μL、102.16ng/μL和31.06ng/μL,改良Trizol法和改良CTAB-LiCl法提取的RNA纯度较高。5种方法提取的RNA均能用于SRBSDV的检测,其中改良Trizol法RT-PCR扩增的灵敏度最高,稀释梯度为10-4,NaOH粗提法灵敏度最差,稀释梯度仅为10-1,其余3种均能达到10-3。改良Trizol法提取的虫体RNA较完整且扩增效果稳定,但试剂价格较昂贵,不适合做大量样品提取;NaOH粗提法的灵敏度虽相对较低,但由于操作简便,经济快速,更适合用于大量样品的检测。 相似文献
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根据马铃薯X病毒的外壳蛋白基因序列 ,设计合成了 1对寡核苷酸引物 ,从感染PVX的马铃薯病叶组织中提取出病毒的RNA ,进行cDNA合成和PCR扩增 ,得到一条长度约为0 .72kb的特异性PCR扩增产物 ,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致。在基因水平上为PVX的检测提供了一种快速、灵敏、简便的新方法 ,为PVX的防治提供了有效手段。 相似文献
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马铃薯Y病毒的RT—PCR检测 总被引：29，自引：0，他引：29
通过两种方法提取了烟草病叶中PVY病毒的RNA,然后针对PVY~N的CP基因序列,设计合成了一对特异性引物,运用反转录PCR技术对提取的PVY－RNA进行了体外扩增,结果得到与预期大小相一致的780bp片段,而对照未得到任何产物,从而建立了运用RT－PCR手段检测植物中PVY的又一有效途径,并运用此方法对东北三省部分地区马铃薯种薯中PVY的带毒情况进行了检测。 相似文献
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双重RT-PCR法快速检测多种马铃薯病毒的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
为建立快速、简便、灵敏度高、特异性强的RT-PCR检测马铃薯病毒技术,依据马铃薯X病毒、马铃薯S病毒、马铃薯A病毒以及马铃薯卷叶病毒的基因组RNA保守序列设计特异性引物对,从反转录和PCR等方面优化双重RT-PCR反应条件,同步扩增出上述四4种病毒,分别得到620(PVX)、435(PVS)、300(PVA)、222 bp(PLRV)大小的扩增片段。结果表明,反转录反应中引物浓度比例、dNTPs浓度和PCR反应中Mg2+浓度对双重RT-PCR检测多种马铃薯病毒的影响较大。优化的双重RT-PCR反应体系可以同步快速检测田间自然感染的马铃薯病毒,此方法还适合检测马铃薯脱毒种薯及试管苗,对马铃薯病毒病早期监测有一定的作用。 相似文献
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依据马铃薯病毒PVS、PVX、PLRV、PVA的CP保守序列设计特异性引物,从马铃薯病叶组织中提取出病毒总RNA,进行cDNA合成和PCR扩增,得到了与预期片段长度一致的PCR特异扩增产物,建立了能够同步检测PVS、PVX、PLRV、PVA的RT-PCR多重检测体系。该方法对PVS、PVX、PLRV、PVA扩增出的靶带大小分别为435、625、222、300 bp,凝胶电泳易辨别区分。研究结果表明,该方法特异性好、灵敏度高、快速简便,为马铃薯病毒的高效检测提供了有效手段。 相似文献
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马铃薯卷叶病毒的RT-PCR快速检测 总被引：7，自引：1，他引：7
根据马铃薯卷叶病毒的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物。从感染马铃薯卷叶病毒(PLRV)的马铃薯叶片中提取出病毒RNA,进行cDNA合成并运用RT-PCR技术进行体外扩增,得到一条长度约627bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致,而对照未得到任何产物。从而建立了快速灵敏的PLRV检测方法,为PLRV的防治及检测提供了有效手段。 相似文献
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大麦黄矮病毒运动蛋白在烟草中的瞬时表达(摘要)(英文) 总被引：4，自引：0，他引：4
[目的]快速鉴定运动蛋白基因在烟草中的瞬时表达,进一步研究该外源基因的功能。[方法]将大麦黄矮病毒的运动蛋白基因定向克隆到马铃薯X病毒载体上,得到重组的马铃薯X病毒,电击转化农杆菌后,利用农杆菌渗透注射技术注射到本生烟草的叶片中,逐日跟踪观察病毒对烟草的侵染状况。[结果]重组的PVX病毒载体进行PCR鉴定和双酶切鉴定(BamHI+XhoI),均得到了462bp的基因片段,证明外源片段BYDV-MP确实克隆到了PVX病毒载体GR107上。将含有重组的PVX病毒载体GR107-MP和空的PVX病毒载体GR107的农杆菌渗透缓冲液注射到5～6叶期的烟草幼苗后,第7天观察,重组病毒载体侵染的烟草系统叶有病毒侵染症状,而对照组未有此现象。对2组实验进行逐日跟踪观察,重组病毒载体侵染的烟草有较严重的病毒侵染症状和叶片卷曲现象,后期引起注射叶及系统叶坏死。而空病毒载体侵染的烟草只有轻微的病毒侵染症状,并能够恢复健康。对侵染的烟草进行RT-PCR检测,结果表明外源基因BYDV-MP在烟草体内进行了正常的转录和表达。[结论]BYDV-MP蛋白促进了PVX的系统侵染速度,加重了系统侵染的病毒症状,是病毒病症的决定因子;利用PVX表达载体表达异源MP的方法是可行的。 相似文献
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花生子叶RNA提取方法比较与分析 总被引：1，自引：0，他引：1
以HY22组培苗为材料,比较改良胍酸酚抽提法、改良CTAB法及离心柱式试剂盒法提取RNA的效果,以筛选出适合花生子叶RNA提取的方法。结果表明：试剂盒法由于样品在通过离心柱时会出现阻塞现象,易使RNA提取结果受到较大影响,而改进后的胍酸酚抽提法与改良CTAB法则能避免该情况且更节约成本;经紫外分光光度法与电泳检测,改进后的两种方法的RNA提取效果均较好;RT—PCR结果表明,提取的总RNA可直接用于分子克隆和基因表达分析等分子生物学实验。 相似文献