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1.
重组溶葡萄球菌酶对奶牛乳房炎和子宫内膜炎常见病原菌的体外杀菌试验 总被引：1，自引：1，他引：1
从患乳房炎和子宫内膜炎奶牛的奶或子宫黏液中分离菌株,鉴定后选取金黄色葡萄球菌105株、表皮葡萄球菌20株、大肠埃希氏菌20株、链球菌38株(其中停乳链球菌8株,无乳链球菌30株)和牛源多杀巴氏杆菌5株,在体外用重组溶葡萄球菌酶、苯唑西林、氨苄西林、庆大霉素按照微量肉汤稀释法进行了杀菌试验。结果表明,重组溶葡萄球菌酶对奶牛乳房炎和子宫内膜炎分离的金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌具有良好抑杀效果,对链球菌(包括无乳链球菌和停乳链球菌)和牛源多杀巴氏杆菌具有一定的抑杀效果,对大肠杆菌作用较差;苯唑西林、氨苄西林、庆大霉素都有一定量的耐药菌株产生,而重组溶葡萄球菌酶对苯唑西林、氨苄西林、庆大霉素耐药菌株同样具有良好抑杀效果。 相似文献
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本试验对由患慢性奶牛乳房炎奶样中分离出的1株疑似金黄色葡萄球菌小菌落突变株(SCVs)进行形态观察、金黄色葡萄球菌相关保守基因片段(nuc、nucA、16S rDNA) 多重PCR扩增鉴定、药敏试验、生理生化特性研究及补偿试验。结果显示分离出1株金黄色葡萄球菌SCVs,该菌含有金黄色葡萄球菌菌种特异性基因nuc和nucA;与金黄色葡萄球菌质控菌株ATCC 25923的抑菌圈大小明显不同;菌落形态主要表现为菌落细小、生长缓慢、溶血能力下降;凝固酶活性下降;耐盐能力降低;革兰氏染色为革兰氏阳性球菌,呈葡萄状排列;补偿试验鉴定该金黄色葡萄球菌SCVs为胸腺嘧啶依赖型。结果表明成功分离鉴定出1株胸腺嘧啶依赖型金黄色葡萄球菌SCVs,为由金黄色葡萄球菌SCVs引起的奶牛慢性乳房炎的预防和控制及其致病机制的研究奠定前期基础。 相似文献
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作者针对临床及亚临床乳房炎奶牛乳汁中金黄色葡萄球菌分离株的毒素基因进行检测和脉冲场凝胶电泳(PFGE)基因分型,比较2种类型乳房炎金黄色葡萄球菌分离株的差异.无菌法采集奶样,采用国际标准方法从中分离金黄色葡萄球菌,用多重PCR方法扩增nuc基因和mecA基因以确证金黄色葡萄球菌(SA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA).进一步用PCR方法检测SA的各种毒素基因(SEs、ETs、TSST 1和PVL基因等).利用限制性内切酶Sma Ⅰ对SA基因组DNA进行酶切和PFGE分析,最后利用BioNumerics软件进行聚类分析.结果:19.3％(23/119)的临床乳房炎奶样和14.8％(26/176)的亚临床乳房炎奶样确定为金黄色葡萄球菌阳性样品,分别从中分离鉴定出43株和26株金黄色葡萄球菌,其中临床乳房炎分离株中有5株为mecA基因阳性.临床乳房炎奶牛奶样中检测到SA的SEA、SEB、SED、SEJ和PVL毒素基因,检出率分别为3.8％(1株)、11.5％(3株)、19.2％(5株)、7.7％(2株)和31.2％(10株);亚临床乳房炎奶牛乳样中仅检测到SA的SEA和PVL毒力基因,检出率分别为7.0％(3株)和84.1％(37株).表明临床与亚临床乳房炎奶牛乳汁中SA菌株携带的毒素基因不一样,SEs可能是临床乳房炎菌株的重要致病基因,PVL可能是亚临床乳房炎菌株的重要致病基因.69株SA使用Sma Ⅰ酶切分型后,可分为7个大簇、50个基因型,来源相同的SA分型后大部分位于同一簇内.临床乳房炎奶牛乳汁中检测到MRSA菌株,PVL基因在亚临床乳房炎中的检出率为临床乳房炎的2.7倍.PFGE方法能较好的区分临床乳房炎和亚临床乳房炎的SA分离菌株. 相似文献
4.
本研究旨在了解甘肃地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的耐药性和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的感染情况,为奶牛乳房炎的防制提供理论依据。采用KB纸片扩散法,检测17株金黄色葡萄球菌对8种不同抗菌药物的敏感性;再用琼脂稀释法检测了苯唑西林、万古霉素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MICs);头孢西丁纸片扩散法和PCR扩增特异性mecA耐药基因对所有受试菌株进行全面的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测。结果表明,菌株对青霉素、磺胺异恶唑具有较强抗性,而对环丙沙星、头孢唑啉、万古霉素和苯唑西林全敏感;头孢西丁纸片扩散法未能检测出表型为MRSA的阳性菌株,而PCR方法却检测出8株mecA基因阳性菌株,且这些菌株的苯唑西林MIC均小于2 μg/mL。菌株的耐药情况较严重,对甲氧西林敏感而携带mecA基因的菌株高频存在于被调查地区的奶牛场中。 相似文献
5.
《中国兽医杂志》2014,(11)
为了阐明奶牛乳房炎源性金黄色葡萄球菌在青霉素压力作用下的表型变化,本试验对1株mec A基因缺失的金黄色葡萄球菌在体外进行亚抑菌浓度的青霉素诱导,利用K-B纸片法和电镜技术观察不同诱导代次金黄色葡萄球菌的表型特征,并用菌落计数法分析耐药亚群生长曲线。试验结果显示,随着诱导代次的增加,金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗菌药物即青霉素和苯唑西林的耐药性逐渐增强,对各浓度β-内酰胺类抗菌药物的耐药亚群比例升高;表型观察发现金黄色葡萄球菌诱导菌菌体变小,胞质浓缩,细胞壁疏松和增厚,有的胞浆内出现空泡。研究表明,金黄色葡萄球菌在亚抑菌浓度青霉素的体外作用下,发生了表型和生长曲线的适应性改变。这为金黄色葡萄球菌耐药机制的研究奠定了基础,并为临床上奶牛乳房炎的防治提供了依据。 相似文献
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为分析奶牛乳房炎中分离的金黄色葡萄球菌(S.aureus)四环素耐药机制,本研究以K-B法和常量肉汤法测定最低抑菌浓度(MIC)值,并对26株奶牛乳房炎S.aureus进行四环素耐药表型检测及加入利血平后的MIC值检测;以PCR检测四环素耐药基因tetM、tetO、tetL和tetK,对扩增产物进行序列分析。检测结果表明:26株菌株中,7株对四环素耐药,19株敏感;利血平能显著降低部分耐药株对四环素的MIC值;在7株耐药菌株中,1株检测出tetM基因,6株检测出tetK基因,没有检测到tetL和tetO基因;tetK基因与S.aureus质粒pT181同源性为100%,tetM基因与转座子Tn916序列同源性为99.9%。实验研究表明,26株奶牛乳房炎S.aureus四环素耐药表型与耐药基因相符,耐药机制以外排蛋白介导为主,并在国内牛源S.aureus中首次检测到tetK基因。 相似文献
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金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳房炎的最主要病原菌之一。然而,在治疗奶牛乳房炎的过程中由于抗生素滥用,造成乳汁中药物残留及耐药菌株增多。近年来,尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检出率逐年呈上升趋势,成为危害人畜健康的重要致病菌之一。同时也给奶牛乳房炎的治疗带来巨大的挑战。论文对牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方法、流行病学、致病性及致病因子、耐药机制、预防与治疗措施及未来发展前景及展望进行了综述,希望为深入研究MRSA,减少其耐药性,研制有效的药物和疫苗起到参考作用。 相似文献
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为调查我国奶牛乳房炎奶样中金黄色葡萄球菌的药物敏感性情况,以便为该病的临床用药提供参考,本试验采用纸片扩散法对从北京、山西、内蒙古、新疆、浙江5省区奶牛乳房炎奶样中分离的148株金黄色葡萄球菌进行了抗菌药物敏感性检测。北京、山西、内蒙古分离株的临床药敏试验显示,所有菌株对头孢西丁、多西环素、四环素敏感或中介,对红霉素、克林霉素、青霉素、复方新诺明严重耐药,对氯霉素、环丙沙星和庆大霉素的敏感性有地域性差异,66%～100%的菌株同时对3种以上的抗菌药物耐药;新疆86株分离株和浙江20株分离株的临床药敏试验显示,所有菌株除对红霉素、克林霉素、青霉素、复方新诺明耐药外,对多西环素和四环素完全耐药,86%以上的分离株对5种以上抗菌药物耐药,同时还发现头孢西丁耐药株。调查结果显示,5省区乳房炎奶样中的金黄色葡萄球菌除对头孢类(头孢西丁)敏感外,对其他类型抗菌药物均存在一定程度的耐药,尤其对大环内酯类(红霉素)、林可胺类(克林霉素)、青霉素类(青霉素)、磺胺类(复方新诺明)抗菌药物严重耐药,对3～5种以上不同类型抗菌药物的多重耐药也较为普遍。调查表明,牛源性金黄色葡萄球菌耐药性的广泛存在将对金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎的抗菌药物治疗形成严重挑战。 相似文献
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从患乳房炎和子宫内膜炎奶牛的奶或子宫黏液中分离菌株后经鉴定选取金黄色葡萄球菌105株、表皮葡萄球菌20株、大肠埃希氏菌20株、链球菌38株（其中停乳链球菌8株，无乳链球菌30株）和牛多杀性巴氏杆菌5株。在体外用重组溶葡萄球菌酶、苯唑西林、氨苄西林、庆大霉素按照微量肉汤稀释法进行抑杀菌实验。结果表明：重组溶葡萄球菌酶对奶牛乳房炎和子宫内膜炎分离的金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌（包括耐药菌株和敏感菌株）具有良好抑杀效果，对链球菌（包括无乳链球菌和停乳链球菌）和牛多杀性巴氏杆菌具有一定的抑杀效果，对大肠杆菌作用较差；苯唑西林、氨苄西林、庆大霉素都有一定量的耐药菌株产生，而重组溶葡萄球菌酶对苯唑西林、氨苄西林、庆大霉素耐药菌株同样具有良好抑杀效果。 相似文献
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von Eiff C Proctor RA Peters G 《Berliner und Münchener tier?rztliche Wochenschrift》2000,113(9):321-325
In prospective studies, Staphylococcus aureus small-colony variants (SCVs) have been linked to persistent and recurrent infections. SCVs are a naturally occurring subpopulation often defective in electron transport which may be identified in the microbiological laboratory as nonpigmented, nonhemolytic, slow-growing pinpoint colonies after incubation on rabbit blood agar. In addition, the often relatively unstable SCVs demonstrate a number of other characteristics that are atypical for S. aureus including reduced alpha-toxin production and delayed coagulase activity. A site-directed hemB mutant with a stable SCV phenotype provided strong evidence for the link between these electron transport defective strains and persistent infections. The hemB mutant was phagocytized by cultured endothelial cells, but did not lyse these cells, because the mutant produced very little alpha-toxin. Thus, SCVs can hide within the host cell, then revert to the highly virulent rapidly growing form and lyse the host cell, once the host immune response has abated and antibiotic therapy is completed. The intracellular position shields SCVs from host defenses and decreases exposure to antibiotics. This review discusses what is known of the biology of SCVs and describes the recovery and significance of Staphylococcus SCVs in clinical specimen. 相似文献
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为了克隆奶牛乳房炎金黄色(葡萄球菌裂解性噬菌体裂解酶Lys IMEP5基因,分析其生物信息学特性,以本实验室分离的奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌裂解性噬菌体v B_Sau S_IMEP5为材料,根据其全基因组学信息,获取裂解酶基因序列,应用Primer 5.0设计特异性引物。采用PCR方法扩增并克隆Lys IMEP5基因,通过BLAST进行序列比对分析,利用在线软件对蛋白结构进行预测。成功克隆到裂解酶Lys IMEP5基因,测序结果通过DNAMAN比对与原序列完全匹配,无任何基因突变,同源性分析显示,与已报道的金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶相似性最高为83.1%;裂解酶Lys IMEP5基因序列全长1371 bp,共编码456个氨基酸,为亲水性蛋白,分子质量为51.717 k Da,理论等电点为9.70;Lys IMEP5同时存在CHAP片段和Amidase-3片段;该蛋白无跨膜区,无信号肽,以无规则卷曲为主。从奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌裂解性噬菌体中成功克隆出Lys IMEP5基因,通过对该蛋白的结构预测分析为后续克隆表达及开发新型绿色抑菌剂奠定了基础。 相似文献
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Aslantaş Ö Öztürk F Ceylan A 《The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science》2011,73(12):1645-1648
Macrolide and lincosamide (ML) resistance and the related resistance genes of staphylococci were assessed from cases of bovine subclinical mastitis. Of the 104 Staphylococcus aureus and 62 coagulase negative staphylococcus (CoNS) isolates, 26 (25%) and 12 (19.4%) were resistant to ML, respectively. While constitutive ML resistance phenotype accounted for 15.4% (16/104) of S. aureus and 8.1% (5/62) of CoNS, inducible ML resistance phenotype accounted for 2.9% (3/104) of S. aureus and 3.2% (2/62) of CoNS. Among erythromycin-resistant isolates, single or various combination of different resistance genes were detected. The results of this study showed that ML resistance was prevalent among staphylococci from subclinical bovine mastitis cases in Hatay, Turkey. Therefore, a continuous surveillance is necessary to minimise the spread of antimicrobial-resistant staphylococci. 相似文献
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Detection of the enterotoxins A, B, and C genes in Staphylococcus aureus from goat and bovine mastitis in Brazilian dairy herds 总被引：2，自引：0，他引：2
To determine the distribution of genes that encode enterotoxins A, B and C, 36 strains of Staphylococcus aureus isolated from goat mastitis and 64 isolated from bovine mastitis were analyzed by Multiplex PCR. Of the total strains studied, 37 (37%) were detected to have some of the SEs genes. From the bovine mastitis strains, 4 (6.3%) co-amplified the sea and seb genes and 2 (3.1%) were positive for the sec gene. From the goat mastitis strains, 31 (86%) tested positive to the Multiplex, and the sec gene was detected in all of them. The production of SE was detected in all strains harboring the corresponding gene. The results demonstrated that S. aureus isolated from goat mastitis had a higher enterotoxigenic potential than those isolated from bovine mastitis. Additionally, the presence of the sec gene in the majority of goat mastitis strains suggests a possible involvement of SEC in goat mastitis pathogenesis. 相似文献
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甘肃地区牛源金黄色葡萄球菌分子鉴定及RAPD分型 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究目的是分离鉴定引起甘肃地区奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌,掌握其基因型情况。利用16S、23SrRNA保守序列PCR扩增对乳房炎奶样中的金黄色葡萄球菌进行鉴定,并进行RAPD基因分型。结果表明,310份奶样中共分离出金黄色葡萄球菌100株,RAPD结果显示这100株金黄色葡萄球菌均可得到清晰的RAPD指纹图谱,扩增产物在2～7条带之间,具有多种带型组成。通过聚类分析100株菌产生11个基因型,其中Ⅰ型4株,Ⅱ型4株,Ⅲ型10株,Ⅳ型13株,Ⅴ型7株,Ⅵ型24株,Ⅶ型16株,Ⅷ型6株,Ⅸ型4株,Ⅹ型10株,Ⅺ型2株。Ⅵ型为该地区的流行优势菌群,不同牛场各基因型菌株分布有明显差异。本研究说明牛场的环境与养殖条件对病原菌流行传播有明显的影响,这一结果对地区性奶牛乳房炎的防治提供了可靠的理论依据。 相似文献
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奶牛乳房炎是一种常见疾病,对动物福利和奶牛场的经济效益产生不利影响.患有乳房炎的奶牛,尤其是金葡菌乳房炎的奶牛,其牛奶产量和品质大幅下降,严重的还会导致奶牛丧失生产能力.目前,奶牛乳房炎相关的研究已成为畜牧业的重点课题.本文综述和分析了近几年奶牛乳房炎及奶牛金葡菌乳房炎的主要研究领域和现状,主要对其抗病遗传育种在转录组... 相似文献
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Ochoa-Zarzosa A Loeza-Angeles H Sagrero-Cisneros E Villagómez-Gómez E Lara-Zárate L López-Meza JE 《Veterinary microbiology》2008,127(3-4):425-430
Bovine mastitis is mainly caused by Staphylococcus aureus and antimicrobial therapy, commonly used for its control, has resulted in an increase in the frequency of resistant staphylococci in recent years. Thus, alternative therapies are desirable and the antimicrobial peptides represent attractive control agents. In this work, we expressed the antimicrobial peptide thionin Thi2.1 cDNA from Arabidopsis thaliana in the bovine endothelial cell line BVE-E6E7 and evaluated its activity against bovine mastitis S. aureus isolates. A polyclonal population from BVE-E6E7 cells transfected with the pThi2.1 construct was obtained and thionin Thi2.1 expression was confirmed by RT-PCR. From this population, eight stably transfected cell clones were obtained and their conditioned media (CM) were evaluated against the S. aureus ATCC 27543 strain. Clones showed high antibacterial activity (>95%) relative to the activity of the polyclonal population. The C8 clone showed the highest antibacterial activity (>99%) and its CM was evaluated against eleven bovine mastitis S. aureus isolates. A 2.5microg aliquot of total protein from the C8 clone's CM inhibited the growth of S. aureus isolates (>40%) relative to the CM from BVE-E6E7 cells used as control. Growth inhibition of S. aureus isolates was dose-dependent, showing a total inhibition at concentrations higher than 3.12microg/ml. These results suggest that thionin Thi2.1 antimicrobial peptide could be use in the treatment of bovine mastitis. 相似文献