伯氏疟原虫ANKA株感染小鼠的T细胞、NK细胞及细胞因子变化     

张义伟  苏紫薇  李其龙  陈冉  姜宁 《畜牧兽医学报》2022,53(11):4008-4018

旨在系统分析伯氏疟原虫感染引起宿主T细胞、NK细胞、Tim-3表达及细胞因子的变化。选取64只雌性C57BL/6小鼠随机分为8组,每组8只,分别于感染后0、4、7、9、11、13、16和19 d获取小鼠脾及外周血免疫细胞,利用流式细胞术检测小鼠主要免疫细胞亚群及免疫检查点分子Tim-3表达水平的变化;同时检测血清中细胞因子的变化。结果表明,感染疟原虫后,小鼠脾CD3⁺CD4⁺ T细胞、CD3⁺CD8⁺ T细胞及NK细胞的比例均逐渐降低（P<0.01）,且伴随着3种细胞Tim-3表达量的升高（P<0.01）。小鼠外周血CD3⁺CD4⁺ T细胞的比例呈先降低后升高趋势,CD3⁺CD8⁺ T细胞的比例呈先升高后降低趋势（P<0.05）;小鼠外周血CD3^-NK1.1⁺细胞的比例呈先降低后升高趋势,但感染末期,其比例仍低于未感染组（P<0.05）。Tim-3分子在外周血CD3⁺CD4⁺ T细胞、CD3⁺CD8⁺ T细胞及CD3^-NK1.1⁺细胞的表达均显著升高（P<0.05）。感染疟原虫后,小鼠血清中促炎细胞因子IL-2的分泌量均显著高于未感染组（P<0.05）;促炎细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-6在血清中分泌均呈先升高后降低趋势（P<0.05）;具有免疫抑制作用的细胞因子IL-10呈逐渐升高趋势,且感染后期急剧升高（P<0.001）。以上结果表明,感染疟原虫后,小鼠的特异性免疫反应发挥了一定的杀伤作用,但由于Tim-3免疫检查点分子及一些发挥免疫抑制作用的细胞因子（IL-10）的过度表达,有利于疟原虫逃避宿主的免疫捕杀作用。该研究提示了从宿主免疫抑制角度研究疟原虫感染的重要性。  相似文献   

新疆野生荒漠肉苁蓉醇提物调节小鼠DCs成熟对Th1/Th2的免疫增强作用     

杨秀梅  杨雨  王丹阳  张爱莲 《畜牧兽医学报》2021,52(3):820-830

旨在探讨新疆野生荒漠肉苁蓉醇提物（ethanol extracts of wild Cistanche deserticola,EEWCD）调节Th1/Th2免疫反应的特点及初步的作用机制。采用卵清白蛋白（ovalbumin,OVA）为抗原,研究EEWCD对小鼠体液免疫,细胞免疫,细胞因子分泌,树突状细胞（dendritic cells,DCs）的成熟和调节性T细胞（regulatory T cell,Treg）等的影响。EEWCD低、中、高剂量（分别记作L、M、H）分别与OVA混合,ICR小鼠随机分为0.9% NaCl、EEWCD、OVA、OVA-EEWCD-L、OVA-EEWCD-M、OVA-EEWCD-H和OVA-铝佐剂免疫组。皮下免疫2次,间隔2周。小鼠免疫后,ELISA法检测抗体滴度及分型,MTT检测脾细胞增殖水平,FACS检测CD4⁺ IL-4、CD4⁺IFN-γ和CD8⁺ IFN-γ的水平,以及DCs表面分子与Treg表达水平。结果显示,EEWCD提高了OVA特异性IgG抗体2~3倍;在初次免疫后21 d显著促进IgG₁和IgG_2a的表达水平（P<0.05）;显著促进OVA特异性脾细胞增殖以及T/B细胞的活化（P<0.05）;显著促进CD4⁺ IL-4、CD4⁺ IFN-γ和CD8⁺ IFN-γ的分泌（P<0.05）。同时,EEWCD也显著促进了DCs的CD40、CD80、CD86和MHCⅡ的表达（P<0.05）,下调了Treg的水平（P<0.05）。EEWCD-M为最佳剂量。监测免疫后小鼠行为及体重,小鼠行为没有异常,且同一时间点各组体重之间差异不显著（P>0.05）。综上表明,EEWCD能够促进OVA特异性的Th₁/Th₂免疫反应,尤其促进Th₁型反应,具有良好的免疫调节活性,其作用机制可能为通过激活DCs的成熟,促进IL-4和IFN-γ的分泌,降低Treg的水平调节Th₁/Th₂免疫反应的动态平衡。  相似文献   

新疆栽培与野生一枝蒿粗多糖对口蹄疫疫苗免疫小鼠的佐剂活性比较     

如孜万古丽·依马木  张爱莲  翁翔  肖鹏  曹辉  吴道澄 《畜牧兽医学报》2022,53(11):4089-4096

基于总物质量和多糖含量比较栽培/野生一枝蒿粗多糖（cultivated/wild Artemisia rupestris L.crude polysaccharides,CARCP/WARCP）作为口蹄疫灭活疫苗（foot-and-mouth disease inactivated vaccine,FMDV）佐剂对小鼠抗体水平及T细胞亚群的影响,探究CARCP/WARCP的佐剂活性和安全性。CARCP/WARCP配伍FMDV肌肉途径免疫ICR小鼠,检测免疫后小鼠血清中FMDV特异性抗体及分型,脾中T细胞亚群比例,血清中IgE水平,观察临床症状和注射部位反应以及小鼠体重。结果显示,总物质量一致时,CARCP1/WARCP1均能极显著提高FMDV特异性IgG、IgG_2a反应（P<0.01）,极显著促进脾T细胞CD3⁺CD4⁺、CD4⁺CD44⁺、CD8⁺CD44⁺CD62L⁺百分比（P<0.05）,显著提高IgG₁、IgG_2a/IgG₁比值,显著促进CD3⁺CD8⁺、CD8⁺CD44⁺、CD8⁺CD44⁺CD62L^-比例（P<0.05）,且除28 d IgG和IgG₁指标外,CARCP1的佐剂活性显著高于WARCP1（P<0.05）。多糖含量一致时,与FMDV相比,CARCP2/WARCP2均极显著增强了28 d IgG水平、IgG_2a/IgG₁比值（P<0.01）,显著提高了21 d IgG、28 d IgG_2a及CD4⁺CD44⁺（P<0.05）,且CARCP2/WARCP2之间差异不显著（P>0.05）。CARCP/WARCP没有引起小鼠脱毛等临床症状,也没有产生肉芽肿、肿胀等注射部位不良反应;CARCP/WARCP免疫后各组小鼠体重之间差异不显著（P>0.05）;各组小鼠血清均没有检测到IgE抗体（P>0.05）;这些结果表明CARCP/WARCP有一定的安全性。综上,当总物质量一致时,CARCP/WARCP均能增强FMDV免疫小鼠体液和细胞免疫反应,且CARCP的佐剂活性优于WARCP;多糖含量一致时,CARCP/WARCP作为FMDV佐剂的免疫增强效果相当,是安全佐剂候选物。  相似文献   

芹菜发酵液对小鼠溃疡性结肠炎的保护作用研究     

赵冬  曹金虎  金慧琴  单衍可  刘晓明  刘斐 《中国畜牧兽医》2021,48(11):3975-3984

本试验旨在研究发酵前后芹菜汁的主要功能成分变化和芹菜发酵液对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠溃疡性结肠炎（UC）的防治及免疫调节作用。选取50只4周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组及低、中、高浓度芹菜发酵液组,每组10只。按10 μL/g BW的剂量标准给空白组和模型组小鼠灌胃无菌生理盐水,其他组小鼠则灌胃不同浓度的芹菜发酵液,持续7 d。从第8天开始,除空白组自由饮用无菌水外,其余组连续7 d自由饮用3% DSS溶液;在此过程,每日称量体重,进行疾病活动指数（DAI）评分。在第14天,通过摘眼球取血法获得全血,随后脱颈处死小鼠,解剖取出结肠组织测量长度并通过苏木素-伊红（HE）染色法制作病理切片,进行病理学分析。以流式细胞仪分选技术检测外周血中CD4⁺/CD8⁺T淋巴细胞比值,以酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、γ-干扰素（IFN-γ）和IL-10的含量。结果表明：①芹菜汁经发酵后,总酸、总糖、总多酚、类黄酮、维生素C和超氧化物歧化酶（SOD）等多种活性成分的含量均显著增加（P<0.05）。②与模型组相比,芹菜发酵液高浓度组能减少DSS引起的小鼠体重损失（P<0.01）、结肠缩短（P<0.01）和DAI降低（P<0.05）。③组织病理学分析结果表明,各发酵液组的UC症状均得到不同程度改善,肠腺结构相对完整,杯状细胞轻微减少,仅有少量淋巴细胞和中性粒细胞浸入。④流式细胞仪分析结果显示,相较于模型组,发酵液组全血CD4⁺/CD8⁺T淋巴细胞比值极显著升高（P<0.01）。⑤ELISA检测结果显示,与模型组相比,芹菜发酵液组的IL-6、TNF-α和IFN-γ含量极显著下调（P<0.01）,IL-10的含量极显著上调（P<0.01）。综上,芹菜汁经发酵后主要功能活性成分均得到显著提高,并且发酵芹菜液对DSS诱导的小鼠UC具有一定的防治和免疫调节作用,其作用机制可能与维持外周血中CD4⁺与CD8⁺T淋巴细胞平衡,以及抑制促炎症因子（TNF-α、IL-6和IFN-γ）表达,促进抗炎症因子（IL-10）表达有关。  相似文献   

新型滴鼻灭活鹦鹉热衣原体疫苗的免疫效力评价     

陈思宇  隋卓君  王占新  李强  陈艺  王飞  陈爽  刘心怡  严专强  何诚 《中国畜牧兽医》2022,49(5):1951-1959

【目的】 探究由霍乱弧菌菌影(Vibrio cholerae ghosts,VCG)和纳米壳聚糖凝胶(Gel)组合制作的一种新型灭活衣原体疫苗复合佐剂是否可增强鹦鹉热衣原体原体(elementary body,EB)灭活抗原诱导动物机体产生的免疫应答。【方法】 将60只7日龄SPF鸡随机分为4个组,分别为:EB＋VCG＋Gel组、EB＋VCG 组、Gel组和EB组。通过滴鼻途径免疫鸡群,免疫2次,每次间隔14 d,免疫后检测鸡血清中IgG抗体水平、淋巴细胞增殖指数、CD4^＋/CD8^＋T 细胞比例、细胞因子(白介素-4(IL-4)、IL-10、IL-12和干扰素-γ(IFN-γ))含量及攻毒后鸡喉头排菌量和肺脏的病理损伤程度。【结果】 与Gel和EB组相比,EB＋VCG＋Gel和EB＋VCG组IgG 抗体水平、淋巴细胞增殖指数、IFN-γ含量和CD4^＋/CD8^＋T细胞比值显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01)。此外,与Gel和EB组相比,攻毒后第12天,EB＋VCG＋Gel组喉头排菌量极显著降低(P<0.01),攻毒后第7天,肺脏损伤评分极显著降低(P<0.01)。【结论】 壳聚糖凝胶、VCG、灭活衣原体 EB 组合构成的新型滴鼻衣原体疫苗经鼻腔接种动物后可刺激动物机体产生良好的体液免疫和细胞免疫应答,阻断鹦鹉热衣原体经呼吸道途径传播,防止鹦鹉热衣原体从动物向人群传播。  相似文献   

口服猪A组轮状病毒Vp4基因工程乳酸菌对BALB/c小鼠的免疫保护作用     

叶丽萍  郝凤奇  王春凤  杨桂连 《中国兽医学报》2010,30(7)

将轮状病毒pW425et-Vp4乳酸菌重组质粒口服免疫BALB/c小鼠,免疫后不同时间眼球采血脱臼处死,收集小鼠血清、脾细胞及肠道内容物,用ELISA方法检测血清IgG水平,用试剂盒检测肠黏膜SIgA水平,以流式细胞仪检测CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群和CD19+B细胞亚群的变化情况,最后进行攻毒试验。结果显示,pW425et-Vp4基因工程乳酸菌口服免疫小鼠血清IgG及肠黏膜SIgA水平较对照组有明显差异,且S/N2.0,CD4+/CD8+比值显著高于对照组,且比值大于2:1;表明猪A组轮状病毒Vp4基因工程乳酸菌重组表达质粒可以增强小鼠机体免疫保护能力。  相似文献   

猪轮状病毒VP4基因重组腺病毒的构建及抗体水平评价     

肖莉  牛小杰  刘庆庆  王月丽  陈创夫  易继海 《中国畜牧兽医》2023,50(1):260-269

【目的】构建猪轮状病毒（Porcine rotavirus,PoRV）流行株PoRV G9P[23]型的VP4基因重组腺病毒,为开发PoRV候选基因工程疫苗奠定基础。【方法】参考GenBank中流行株PoRV G9P[23]型的VP4基因序列（登录号：MH898990.1）合成PoRV VP4基因,将得到的目的基因与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV进行重组,转化大肠杆菌Top10感受态细胞,构建腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-VP4;腺病毒穿梭载体经过Pme Ⅰ内切酶线性化处理后与含有腺病毒骨架pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞进行同源重组获得重组质粒pAd-VP4,对重组质粒进行Pac Ⅰ酶切鉴定,并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。将重组质粒转染HEK293A细胞获得重组腺病毒rAd-VP4,对该重组腺病毒进行扩大培养并测定重组腺病毒的半数组织培养感染剂量（TCID₅₀）;通过RT-PCR检测其体外表达情况,Western blotting检测其反应原性;将制备的重组腺病毒用不同病毒滴度和不同免疫次数对小鼠进行腹腔免疫,收集血清通过ELISA法测定IgG抗体水平。【结果】RT-PCR扩增出1条大小为2 343 bp的rAd-VP4重组腺病毒条带,测序结果正确,表明重组腺病毒rAd-VP4构建成功,测得rAd-VP4病毒滴度为10^6.5 TCID₅₀,Western blotting结果表明,重组腺病毒rAd-VP4在蛋白水平上得到了正确表达,蛋白的分子质量约为87 ku。小鼠IgG抗体检测结果表明,在用10^6.5 TCID₅₀ rAd-VP4免疫后的第35和42天,小鼠血清中的IgG抗体水平显著高于10^5.3 TCID₅₀ TGE-PED-PRV三联活疫苗IgG抗体水平（P<0.05）;10^6.5 TCID₅₀ rAd-VP4在免疫后第35和42天产生的抗体水平显著高于10^5.5和10^4.5 TCID₅₀ rAd-VP4（P<0.05）,而10^5.5 TCID₅₀ rAd-VP4在免疫后第28天产生的抗体水平显著高于10^6.5和10^4.5 TCID₅₀ rAd-VP4（P<0.05）。10^6.5 TCID₅₀ rAd-VP4的2次免疫和3次免疫产生的IgG抗体在不同免疫时间均差异不显著（P>0.05）。【结论】本研究成功构建了重组腺病毒rAd-VP4,其病毒滴度为10^6.5 TCID₅₀。10^6.5和10^5.5 TCID₅₀ rAd-VP4分别在第42和28天产生较高的IgG抗体水平,2次免疫和3次免疫对产生IgG抗体水平均无显著影响。试验结果可为开发PoRV重组腺病毒候选疫苗提供参考。  相似文献   

鸡传染性支气管炎病毒QX基因型S1蛋白重组乳酸菌的构建及小鼠免疫应答     

王栎婷  曹祁峰  王雪  李冰 《中国兽医学报》2023,(1):49-54+60

为探究鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白重组乳酸菌对小鼠免疫应答情况,本研究将IBV CH/LN/2019毒株的S1基因进行密码子优化,构建重组质粒pNZ8149-S1,电转至乳酸乳球菌NZ3900中,应用Western blot及间接免疫荧光试验评价重组乳酸乳球菌表达水平,免疫SPF小鼠,通过间接ELISA方法分析小鼠特异性抗体、CD4⁺、CD8⁺和细胞因子(IL-4和IFN-γ)分泌情况;结果显示,成功构建重组乳酸乳球菌pNZ8149-S1/NZ3900并表达目的蛋白;小鼠免疫试验结果显示,免疫组小鼠IgG抗体水平均高于pNZ8149/NZ3900、NZ3900和PBS组(P<0.05);特异性sIgA抗体水平显著高于对照组(P<0.01);此外,重组乳酸乳球菌能诱导小鼠产生较高水平的IL-4和IFN-γ(P<0.05)。结果表明,重组乳酸乳球菌pNZ8149-S1/NZ3900可以有效刺激小鼠机体产生体液免疫和细胞免疫,为IBV新型口服疫苗的研制提供了理论参考。  相似文献   

表达乳铁蛋白肽的猪源罗伊氏乳酸杆菌对断乳仔猪抗霍乱沙门菌感染的效果分析     

王雪莹  高亢  蔡吉垚  张森豪  解伟纯  王晓娜  崔文  姜艳平  周晗  王丽  乔薪瑗  徐义刚  李一经  唐丽杰 《畜牧兽医学报》2021,52(10):2874-2886

旨在分析表达牛乳铁蛋白肽的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌pPG-LFCA-E/LR-CO21作为饲用微生态制剂对仔猪促生长与抵抗猪霍乱沙门菌感染的作用。将该重组菌连续饲喂28日龄断乳仔猪21 d,并设立空菌组、对照组以及抗生素组。第21天时对断乳仔猪连续口服感染猪霍乱沙门菌3 d,并设置7 d的观察期;仔猪感染后采集试验组与对照组血清、肠黏液及肠组织。检测结果显示重组菌组仔猪平均日增重与免疫器官指数均显著提高（P<0.05）,料重比极显著降低（P<0.01）。感染猪霍乱沙门菌后,相对于对照组,重组菌组仔猪日增重提高,腹泻率降低;重组菌组仔猪血液中IgG以及肠黏液中IL-4、sIgA的量极显著提高（P<0.01）,IL-2、IL-12、IL-6的量显著降低（P<0.05）;重组菌组仔猪肠道紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1的基因转录水平和TLR4、Myd88和MLCK的基因转录水平极显著提高（P<0.01）,仔猪肠道内猪霍乱沙门菌的数量极显著降低（P<0.01）;重组菌组与抗生素组无明显差异（P>0.05）。以上结果表明,表达牛乳铁蛋白肽的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌pPG-LFCA-E/LR-CO21可以提高断乳仔猪的生长性能、促进肠道形态发育、增强肠道屏障功能,并且在一定程度上可以保护仔猪免受猪霍乱沙门菌的感染,表明重组菌作为微生态制剂替代断乳仔猪的饲用抗生素具有一定的应用前景。  相似文献   

猪圆环病毒Ⅱ型体外诱导3D4/2细胞炎症模型的建立     

赵怡  张文  陈家骥  宋漫玲  陈奇  谢小东  胡庭俊 《中国畜牧兽医》2022,49(12):4920-4927

【目的】通过对猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）体外感染3D4/2细胞浓度、时间与细胞炎症水平进行探讨,建立PCV2体外感染3D4/2细胞炎症反应模型,以期为后期药物调控PCV2诱发3D4/2细胞炎症反应的研究奠定基础。【方法】将3D4/2细胞分为对照组及10⁰、10^-1、10^-2和10^-3 PCV2感染组,每组3个重复。对照组用DMEM培养,各PCV2感染组用不同稀释倍数PCV2液培养,2 h后均更换为含5%胎牛血清（FBS）的DMEM维持液进行培养,培养4、8、12和24 h后分别收集细胞及细胞上清液。采用Griess法检测一氧化氮（NO）水平,DCFH-DA荧光探针法检测活性氧（ROS）水平,酶标法检测还原型谷胱甘肽（GSH）水平,分光光度法检测黄嘌呤氧化酶（XOD）和髓过氧化物酶（MPO）活性,ELISA法测定白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-10、γ干扰素（IFN-γ）、IL-8、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）以及环氧合酶1（COX-1）和COX-2的分泌水平。【结果】10⁰至10^-3 PCV2作用4、8、12和24 h均能够成功感染3D4/2细胞。与对照组相比,10⁰ PCV2在感染3D4/2细胞4、8、12、24 h后ROS水平均极显著升高（P<0.01）,10^-1至10^-3 PCV2感染3D4/2细胞8、12、24 h后ROS水平显著或极显著升高（P<0.05;P<0.01）;10⁰至10^-3 PCV2感染3D4/2细胞8、12、24 h后,细胞内NO浓度及MPO活性显著提高（P<0.05）,细胞上清液中的IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10、IFN-γ、IL-8和MCP-1水平及COX-1活性均显著或极显著升高（P<0.05;P<0.01）,其中10⁰ PCV2感染3D4/2细胞后,各炎症因子水平上升最显著,且随着时间的延长,NO浓度逐渐升高,XOD活性逐渐降低。【结论】PCV2可诱导3D4/2细胞炎症反应,且10⁰ PCV2体外感染3D4/2细胞4~12 h是建立炎症模型的最佳条件。  相似文献   

Analysis of Immune Response Induced by Recombinant Lactobacillus reuteri Expressing Cap Protein of Porcine Circovirus Type 2 in Mice     

WANG Shubo  XU Yigang  CHEN Qiuyan  MEI Zhuyuan  CUI Wen  JIANG Yanping  ZHOU Han  WANG Li  QIAO Xinyuan  LI Yijing  TANG Lijie 《畜牧兽医学报》1956,51(9):2238-2249

The purpose of this study was to construct a recombinant Lactobacillus reuteri (L. reuteri) expressing the cap protein of porcine circovirus type 2 (PCV2) and evaluate its effect on immune response in mice. The cap protein gene of PCV2b strain isolated and stored in the laboratory was amplified by PCR. A recombinant strain pPG-T7 g10-PPT-cap / L. reuteri expressing the cap protein was constructed using L. reuteri of pig origin as the host strain and explored the immune effect of BALB/c mice with recombinant bacteria orogastrically. Indirect ELISA was used to determine the level of antigen-specific IgG antibodies in the serum of mice after immunization, the levels of antigen-specific sIgA antibodies in stool, nasal wash, reproductive tract wash, and intestinal mucus, and the levels of various cytokines in mouse serum; MTT method was used to detect mouse spleen lymphocyte proliferation levels; flow cytometry (FCM) was used to detect the levels of CD4⁺ T cells and CD8⁺ T cells in mouse spleen lymphocytes; fluorescence quantitative PCR was used to detect the viral load of organs in challenged mice after immunization. The results showed that the serum levels of IgG antibodies in the mice of the oral immune recombinant strain group (OIG) were significantly higher than those in the control group (P<0.01); the levels of sIgA antibodies in the stool, nasal wash, reproductive tract wash, and intestinal mucus of the mice in OIG were significantly higher than those in the control group (P<0.01); Compared with the control group, the levels of cytokines in the serum of OIG were as follows: The levels of IFN-γ, IL-2, IL-4, IL-12 increased, the levels of IL-10 decreased, and the levels of IFN-α did not change significantly; Incubation of PCV2 and mouse spleen lymphocytes in vitro showed that the proliferation stimulating index of spleen lymphocytes in OIG was significantly higher than that of the control group (P<0.01); FCM results showed that CD4⁺ T cells and CD8⁺ T cells were higher than those of the control group; the results of fluorescent quantitative PCR showed that compared with the control group, the viral load in the OIG was significantly lower than that of the control group. In summary, the recombinant L. reuteri expressing the PCV2 cap protein were successfully constructed, and the constructed recombinant L. reuteri can stimulate mice to produce humoral and cellular immune responses after oragastrical immunization, and can exert a certain immune protection effect.  相似文献   

Effect of Lactobacillus reuteri on the Expression Profile of miRNAs in the Jejunum of Piglets     

SUN Qian  WANG Qi  HUANG Jinxiu  QI Renli  YANG Feiyun  WANG Ruisheng  LAN Yunxian 《畜牧兽医学报》1956,51(9):2156-2164

This study was conducted to investigate the effect of Lactobacillus reuteri on the expression of miRNAs in the jejunum of piglets. Six litters of healthy 1-day-old York×Rongchang piglets were selected and randomly divided into the two group,3 litters per group(n=27). The two groups were control group (daily orally adminitrated with 0.1% sterile peptone solution per piglet),and the LR group (daily orally administrated with 1.0×10¹⁰ CFU of L. reuteri per piglet), respectively. At 10 and 20 days of age, six piglets per group were selected for slaughter, respectively, and the jejunum samples were collected. After RNA extraction, the library was constructed and the miRNA expression profile of the jejunum was detected by Solexa high-throughput sequencing technology. Bioinformatics technology was used to conduct target genes prediction and functional analysis. The results showed that: 1) A total of 8 libraries were constructed and a total of 187 103 840 clean reads were obtained, of which the 22 nt length sequence accounted for the largest proportion; 2) Three hundred and fifty-four and 352 known miRNAs were respectively identified at 10 and 20 days of age, of which 329 miRNAs were co-expressed; 3) Differentially expressed (DE) miRNAs in the jejunum were found after L. reuteri administration, 7 and 9 DE miRNAs were obtained at 10 and 20 days of age,respectively. Notably, ssc-miR-218 was expressed differentially at two ages. 4) KEGG pathway analysis and target gene prediction on the differentially expressed miRNAs revealed that 10 221 target genes were enriched in 293 biological pathways, of which 66 were significantly enriched (P<0.05), including the MAPK signaling pathway and PI3K-Akt signaling pathway, which were known to regulate intestinal development and immune. 5) Six miRNAs were selected to validate the sequencing results by qRT-PCR, the qRT-PCR expression results corresponded well with those from the sequencing. The results indicates that L. reuteri may regulate intestinal health related pathways by influencing the expression of jejunal miRNAs.  相似文献   

四甲基吡嗪对獭兔单增李斯特菌感染和天然免疫的影响     

郑江平  刘宁  白雪瑞  张飞可 《中国畜牧兽医》2020,47(5):1531-1538

本试验通过研究四甲基吡嗪（TMP）对单增李斯特菌感染獭兔载菌量、溶血素、促炎因子（TNF-α、IL-1β和IFN-γ）、免疫器官指数和天然抗体的影响,旨在探讨TMP对单增李斯特菌的抑菌作用。选择断奶獭兔180只随机分为5组,每组6个重复,每个重复6只。对照组饲喂基础日粮,其他4组在基础日粮中分别添加0、50、100、150 mg/kg TMP。饲养试验第1天,4个试验组獭兔每只灌服1 mL（10⁷ CFU）单增李斯特菌株,对照组灌服无菌株的培养液,饲养试验持续14 d。结果表明,TMP降低了獭兔肝脏、脾脏和淋巴结的单增李斯特菌载菌量（P<0.05）。盲肠食糜、肝脏、脾脏和淋巴结载菌量均呈线性下降（P<0.05）。添加TMP使獭兔李斯特菌溶血素和促炎因子（TNF-α和IL-1β）显著降低（P<0.05）,14 d时,李斯特菌溶血素呈线性下降（P<0.05）,促炎因子（TNF-α和IL-1β）均呈现线性和平方下降（P<0.05）。胸腺指数、脾脏指数、血清IgA和IgG在单增李斯特菌感染后下降,随TMP添加量增加而增加,但只有饲喂至7 d时的脾脏指数呈线性上升（P<0.05）。说明日粮中添加TMP可以降低单增李斯特菌感染獭兔组织载菌量,减少单增李斯特菌的毒力,对提升免疫器官指数和天然抗体有积极作用。  相似文献   

罗伊氏乳杆菌对仔猪空肠miRNAs表达谱的影响     

孙倩  王琪  黄金秀  齐仁立  杨飞云  王瑞生  兰云贤 《畜牧兽医学报》2020,51(9):2156-2164

试验旨在研究罗伊氏乳杆菌对仔猪空肠miRNAs表达的影响。选用1日龄健康约克×荣昌仔猪6窝,随机分为两组,每组3窝（共27头）。即对照组（每天每头灌喂0.1%的无菌蛋白胨溶液）,LR组（每天每头灌喂活菌总数为1.0×10¹⁰CFU的罗伊氏乳杆菌）,分别在10和20日龄,每组选取6头进行屠宰,采集空肠样品。通过Solexa高通量测序技术检测空肠miRNA的表达谱,利用生物信息学技术进行靶基因预测和功能分析。结果显示：1）试验构建了8个文库,共获得187 103 840条纯净reads序列,其中22 nt长度序列占的比例最大;2）10和20日龄分别鉴定出354和352个已知的miRNAs,其中有329个miRNAs共表达;3）灌喂罗伊氏乳杆菌组仔猪空肠miRNA差异表达,10和20日龄分别获得7和9个差异显著的miRNAs,ssc-miR-218在两个日龄中都差异表达;4）对差异表达的miRNAs进行靶基因预测和KEGG通路分析,发现有10 221个靶基因富集到293条通路上,有66条通路显著富集（P<0.05）,包括与肠道发育及免疫调控相关的MAPK和PI3K-Akt信号通路;5）随机挑选6个差异表达miRNAs进行荧光定量PCR验证,验证结果与测序结果基本一致。本研究表明,罗伊氏乳杆菌可能通过影响空肠miRNAs表达来调控有关肠道健康的信号通路。  相似文献   

猪附红细胞体eno基因重组蛋白的制备及免疫效果研究     

闫宗斌  伍生军  杨静  闫可心  相思宇  许应天  薛书江  柴方红 《中国畜牧兽医》2020,47(7):2231-2238

为了研究猪附红细胞体eno基因重组蛋白的免疫效果,本试验将猪附红细胞体eno基因与pET-15b载体进行连接,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。对表达菌株进行诱导表达、纯化,利用纯化后的猪附红细胞体eno重组蛋白（命名为rMseno）对小鼠进行免疫,从而评价该重组蛋白在小鼠体内产生的免疫应答水平。试验将20只4周龄的雄性昆明小鼠随机分为A、B、C、D 4个组。免疫A组接种纯化后的重组蛋白rMseno;免疫B组接种经IPTG诱导表达后的重组菌E.coli-Mseno;对照C组接种等量PBS;对照D组接种未经过诱导表达的重组菌E.coli-Mseno。通过ELISA检测方法分别测定血清中抗猪附红细胞体特异抗体水平及γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素4（IL-4）细胞因子水平,最后通过脾脏淋巴细胞增殖试验来反映小鼠体内T淋巴细胞的增殖情况。结果显示,构建的重组pET-15b-eno质粒目的基因片段大小为1 632 bp,与预期大小相同;纯化的重组蛋白rMseno大小为61 ku,并能够被鼠抗猪附红细胞体血清所识别;免疫A组和免疫B组小鼠血清中抗猪附红细胞体特异抗体水平,IFN-γ、IL-4细胞因子水平以及T淋巴细胞增殖指数均显著或极显著高于对照组（P<0.05;P<0.01）。结果表明,猪附红细胞体eno基因重组蛋白能够诱导小鼠产生较高的体液免疫水平以及细胞免疫应答水平。  相似文献   

大肠杆菌对奶牛子宫内膜上皮细胞炎性损伤的研究     

李博通  王仕宇  刘佳玮  张玮琪  倪耀娣  刘明超 《中国畜牧兽医》2021,48(7):2627-2634

试验旨在研究大肠杆菌（E.coli）对奶牛子宫内膜上皮细胞（bovine endometrial epithelial cells,BEECs）的体外炎性损伤,探究大肠杆菌引发炎性反应的最佳浓度、作用时间及机制。首先,用不同浓度的大肠杆菌（5×10⁴、5×10⁵、1×10⁶、2.5×10⁶、5×10⁶ CFU/mL）诱导刺激细胞3、6和9 h,通过倒置显微镜观察细胞形态、CCK-8法测D_{450 nm}值,检测大肠杆菌对细胞活性的影响;其次,用不同浓度的大肠杆菌（5×10⁴、5×10⁵ CFU/mL）处理细胞3、6和9 h,用ELISA方法检测细胞上清液中白介素-1β（IL-1β）、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的分泌量;最后,用不同浓度的大肠杆菌（5×10⁴、5×10⁵ CFU/mL）处理细胞6和9 h,用Western blotting检测核因子κB抑制蛋白α（IκBα）和p65蛋白的磷酸化水平。结果显示,与对照组相比,大肠杆菌感染细胞9 h后,1×10⁶、2.5×10⁶和5×10⁶ CFU/mL大肠杆菌组细胞活性均极显著降低（P<0.01）,5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌组显著降低（P<0.05）;大肠杆菌感染细胞9 h后,5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌组IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α极显著升高（P<0.01）;大肠杆菌感染细胞6 h后,5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌组IκBα、p65蛋白磷酸化水平和IL-6均极显著升高（P<0.01）,5×10⁴ CFU/mL大肠杆菌组IκBα和p65蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.05）。结果表明,大肠杆菌可以刺激奶牛子宫内膜上皮细胞产生炎性反应,且当细胞与5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌作用6 h或与5×10⁴ CFU/mL大肠杆菌作用9 h为最佳。  相似文献   

白细胞介素-10对口蹄疫病毒感染小鼠T细胞增殖及其表达TNF-α、IFN-γ和IL-2的影响     

郭紫晶  陈飞  张志雄  柏玲  张志东  李彦敏 《畜牧兽医学报》2023,54(2):694-705

白细胞介素-10(IL-10)增高是口蹄疫病毒(FMDV)感染过程中显著特征之一。本研究旨在探讨IL-10对FMDV感染小鼠外周血T细胞增殖及其表达效应功能相关细胞因子的影响。采用CCK-8和流式细胞术分别检测小鼠外周血T细胞增殖和T细胞表达效应功能相关细胞因子(TNF-α、IFN-γ和IL-2)。结果显示,与对照小鼠相比,FMDV感染小鼠(感染12、24、36和48 h)外周血T细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖均显著下降(P<0.05或P<0.01);FMDV感染小鼠的外周血CD4⁺T细胞表达TNF-α和IL-2均显著下降(均P<0.01),CD8⁺T细胞表达TNF-α、IFN-γ和IL-2也显著下降(P<0.01或P<0.000 1)。体内阻断IL-10/IL-10R信号或者敲除IL-10均能显著恢复FMDV感染小鼠外周血T细胞的增殖(P<0.05或P<0.01),但不影响CD4⁺和CD8⁺T细胞表达TNF-α、IFN-γ和IL-2。本研究首次揭示FMDV能抑...  相似文献