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1.
为探讨肌肉生长抑制素(MSTN)对猪前体脂肪细胞增殖和成脂分化的影响,本研究以原代培养的断奶猪前体脂肪细胞为研究对象,分别以0 ng/mL(对照组)、25、50和100 ng/mL的MSTN重组蛋白处理细胞,采用油红O染色和提取法定量分析细胞内脂肪生成和成脂分化程度,使用荧光定量PCR和Western blot分析脂肪细胞分化标志基因过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)、脂肪合成关键酶脂肪酸合成酶(FAS)和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的表达,探讨MSTN调控猪前体脂肪细胞成脂分化可能的分子机制。结果显示,处理48 h后,与对照组细胞相比,25和50 ng/mL MSTN处理对细胞增殖活力无显著影响,而100 ng/mL MSTN可显著提高猪前体脂肪细胞增殖活力。油红O染色及提取结果表明,MSTN呈剂量依赖性抑制猪前体脂肪细胞的成脂分化。进一步研究表明,与0 ng/mL MSTN组细胞相比,100 ng/mL MSTN处理组细胞中MSTN表达量显著升高,而PPAR-γ、FAS和ACC的mRNA和蛋白表达均显著降低。研究表明,MSTN抑制猪前体脂肪细胞的成脂分化,效果呈剂量依赖性,此抑制作用可能是通过抑制PPAR-γ的表达,进而抑制脂肪的合成来实现的。 相似文献
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为研究不同生物素水平对3T3-L1脂肪细胞脂肪分解及相关基因表达的影响,本试验利用三联诱导法将3T3-L1细胞经诱导分化为3T3-L1脂肪细胞。当3T3-L1脂肪细胞密集后分别采用0(对照组)、0.2、0.5、1.0μmol/L生物素处理,分别在12、24与48h时检测细胞上清液中甘油释放量、脂肪甘油三酯水解酶(ATGL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)、脂滴包被蛋白A(perilipin A)及脂肪分化相关蛋白(ADRP)相对表达量。结果显示,在12h时,1.0μmol/L组甘油释放量、ATGL基因mRNA相对表达量均极显著低于对照组(P0.01),0.5、1.0μmol/L组HSL基因mRNA相对表达量显著低于对照组(P0.05),1.0μmol/L组perilipin A、ADRP基因mRNA相对表达量均极显著高于对照组与0.2μmol/L组(P0.01);在24h时,各试验组甘油释放量、1.0μmol/L组ATGL基因mRNA相对表达量均极显著低于对照组(P0.01),0.5、1.0μmol/L组perilipin A基因mRNA相对表达量极显著高于对照组与0.2μmol/L组(P0.01);1.0μmol/L组ADRP基因mRNA相对表达量极显著高于其他组(P0.01);在48h时,1.0μmol/L组甘油释放量、ATGL基因mRNA相对表达量均极显著或显著低于对照组(P0.01;P0.05),1.0μmol/L组perilipin A基因mRNA相对表达量显著高于对照组与0.2μmol/L组(P0.05),0.5、1.0μmol/L组ADRP基因mRNA相对表达量极显著高于对照组(P0.01)。综上所述,生物素可通过促进perilipin A与ADRP表达,同时抑制ATGL与HSL表达,达到抑制脂肪分解的效果,且浓度为1.0μmol/L时效果最佳。 相似文献
3.
旨在探讨细胞外信号调节激酶1/2-过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(ERK1/2-PPAR-γ)信号通路在肌肉生长抑制素(MSTN)抑制猪皮下脂肪前体细胞(PSPAs)成脂分化中的作用。PSPAs在诱导分化培养液(DIM)处理同时,随机分3组：对照组(0 ng/mL MSTN)、100 ng/mL MSTN组(100 ng/mL MSTN)以及ERK1/2特异性抑制剂PD98059和100 ng/mL MSTN联合组(PD98059+100 ng/mL MSTN)。采用细胞计数试剂盒-8 (CCK-8)检测细胞增殖活力,油红O染色法及甘油三酯(TG)定量分析成脂分化,使用荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、CCAAT/增强子结合蛋白-α(C/EBP-α)、脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、细胞外信号调节激酶(ERK)及其磷酸化ERK(p-ERK)表达。结果表明：细胞增殖活力在3组间无显著性差异(P>0.05)。与对照组相比,100 ng/mL MSTN处理48 h后细胞内脂滴沉积量、油红O阳... 相似文献
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TNF-α对猪脂肪细胞脂肪分解及其相关基因转录表达的影响 总被引：1，自引：1，他引：0
为探讨TNF-α对猪脂肪细胞脂肪分解的调控作用及其机制,用1、10、100 ng·m-1种剂量TNF-α作用体外培养的猪原代脂肪细胞24 h,及10 ng·mL-1TNF-α处理脂肪细胞1、6、12、24、48 h.使用甘油试剂盒,检测细胞甘油的释放量,RT-PCR检测ATGL、TGH-2、HSL、LPL、MGL和perilipinA表达量变化.结果表明,TNF-α以浓度和时间依赖性的方式促进猪原代脂肪细胞甘油的释放(P<0.05);同时下调ATGL、TGH-2、HSL、LPL、MGL和perilipin A mRNA表达量.说明:TNF-α主要通过下调perilipin A的表达,降低其对脂滴的保护作用,增加脂肪分解酶和脂滴的接触,促进了猪脂肪细胞的脂解作用. 相似文献
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为研究不同生物素水平对3T3-L1脂肪细胞脂肪分解及相关基因表达的影响，本试验利用三联诱导法将3T3-L1细胞经诱导分化为3T3-L1脂肪细胞。当3T3-L1脂肪细胞密集后分别采用0（对照组）、0.2、0.5、1.0 μmol/L生物素处理，分别在12、24与48 h时检测细胞上清液中甘油释放量、脂肪甘油三酯水解酶（ATGL）、激素敏感性脂肪酶（HSL）、脂滴包被蛋白A （perilipin A）及脂肪分化相关蛋白（ADRP）相对表达量。结果显示，在12 h时，1.0 μmol/L组甘油释放量、ATGL基因mRNA相对表达量均极显著低于对照组（P<0.01），0.5、1.0 μmol/L组HSL基因mRNA相对表达量显著低于对照组（P<0.05），1.0 μmol/L组perilipin A、ADRP基因mRNA相对表达量均极显著高于对照组与0.2 μmol/L组（P<0.01）；在24 h时，各试验组甘油释放量、1.0 μmol/L组ATGL基因mRNA相对表达量均极显著低于对照组（P<0.01），0.5、1.0 μmol/L组perilipin A基因mRNA相对表达量极显著高于对照组与0.2 μmol/L组（P<0.01）；1.0 μmol/L组ADRP基因mRNA相对表达量极显著高于其他组（P<0.01）；在48 h时，1.0 μmol/L组甘油释放量、ATGL基因mRNA相对表达量均极显著或显著低于对照组（P<0.01；P<0.05），1.0 μmol/L组perilipin A基因mRNA相对表达量显著高于对照组与0.2 μmol/L组（P<0.05），0.5、1.0 μmol/L组ADRP基因mRNA相对表达量极显著高于对照组（P<0.01）。综上所述，生物素可通过促进perilipin A与ADRP表达，同时抑制ATGL与HSL表达，达到抑制脂肪分解的效果，且浓度为1.0 μmol/L时效果最佳。 相似文献
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为了研究白细胞介素(Interleukin,IL)-6对猪脂肪细胞脂肪分解的影响及其分子机制,分化的猪脂肪细胞用不同浓度的IL-6(0、25、50、75、100 ng·mL-1)处理24或48 h.通过测定培养液中的甘油浓度检测脂肪细胞的脂解率;采用形态学观察检测脂肪细胞中甘油三酯积聚量的变化;分别用RT-PCR和Western blot检测脂肪细胞中perilipin A、PPAR γ2(Peroxisome proliferato-activated receptor-gamma2)、HSL(Hormone-sensitive lipase)和AT-GL(Adipose triglyceride lipase)的mRNA及蛋白表达.结果显示,IL-6以剂量和时间依赖性的方式刺激猪脂肪细胞的脂肪分解,同时PPAR γ2和perilipin A的mRNA及蛋白表达被显著下调;HSL的mRNA表达达著上调,但其蛋白表达水平并未发生显著改变;ATGL的mRNA和蛋白表达均未发生显著改变.上述研究结果表明,IL-6通过抑制PPAR γ2及其靶基因perilipin A的表达直接刺激猪脂肪细胞的脂肪分解. 相似文献
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INS、GLN和LP对体外培养牛脂肪细胞内HSL、LP的mRNA丰度的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
为了阐明胰岛素（INS）、胰高血糖素（GLN）和瘦蛋白（LP）对牛脂肪细胞内激素敏感酯酶（HSL）、LP的mRNA表达的调控作用，本试验采用体外原代培养牛脂肪细胞的培养液中添加不同浓度的胰岛素（0、5、10、20、50、100mmol／L）、胰高血糖素（O、25、100、200、500、1000pg／mL）和瘦蛋白（O、2．5、5、10、50、100ng／mL），培养12h后，应用建立的实时荧光定量PCR（FQ-PCR）方法检测牛脂肪细胞内HSL、LP的mRNA丰度。结果表明：胰岛素对牛脂肪细胞内HSL的mRNA表达呈现剂量依赖性抑制作用，对LP的mRNA表达呈现剂量依赖性促进作用。胰高血糖素对牛脂肪细胞内HSL的mRNA表达呈现剂量依赖性促进作用，对牛脂肪细胞内LP的mRNA表达无作用。瘦蛋白对牛脂肪细胞内HSL的mRNA表达先呈现剂量依赖性促进作用，后呈现抑制作用。但对牛脂肪细胞内LP的mRNA表达呈现剂量依赖性抑制作用。 相似文献
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《畜牧与兽医》2017,(11):42-46
为了探讨姜黄素对猪脂肪间充质干细胞脂肪合成和分解相关基因mRNA表达的影响,从断奶仔猪皮下脂肪分离得到间充质干细胞,增殖培养,诱导分化,并在分化的同时进行姜黄素处理。试验分对照组(诱导分化液+姜黄素溶解试剂DMSO)和处理组(诱导分化液+10μmol/L姜黄素),分化48 h后收集细胞,进行后续检测。结果表明:10μmol/L姜黄素处理能显著降低猪脂肪细胞甘油三酯的含量,而对细胞增殖能力没有明显影响。荧光定量PCR结果显示,脂肪分化过程中的两个重要转录因子过氧化物酶增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)和CCAAT增强子结合蛋白-β(C/EBP-β),脂肪合成过程中两个关键酶脂肪酸合成酶(FAS)和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)mRNA表达在10μmol/L姜黄素处理组均显著下降,而脂肪分解基因激素敏感脂肪酶(HSL)和脂肪组织三酰甘油水解酶(ATGL)mRNA表达以及酶活在10μmol/L姜黄素处理组均显著升高。结果提示姜黄素降低猪脂肪间充质干细胞脂肪沉积,有可能是通过抑制脂肪合成和增强脂肪分解两个过程来实现的,为姜黄素作为减少猪脂肪沉积的饲料添加剂的应用提供了理论支持。 相似文献
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《中国兽医学报》2019,(8):1604-1608
通过PCR方法扩增奶牛脂肪分化相关蛋白(adipose differentiation-related protein,ADRP)基因的编码区,构建Lenti-ADRP慢病毒重组载体,包装成病毒后感染奶牛乳腺上皮细胞,通过嘌呤霉素筛选获得超表达ADRP细胞株,采用Real-time PCR和Western blot分析细胞株中ADRP基因和蛋白的表达情况;采用尼罗红对脂滴染色,分析ADRP超表达对细胞脂滴的影响。结果显示,克隆的ADRP基因CDS区序列大约1 353 bp,成功构建重组的ADRP慢病毒载体,用5 mg/L嘌呤霉素筛选得到ADRP超表达乳腺上皮细胞株;与对照组细胞相比,超表达细胞株的ADRP基因mRNA水平增加632倍(P0.001),蛋白表达也有所增加;检测脂滴的荧光值发现,ADRP超表达显著增加了细胞脂滴含量(P0.01)。结果表明,超表达ADRP可促进乳腺上皮细胞的脂滴合成。 相似文献
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本研究以猪脂肪间充质干细胞(AMSCs)为材料,通过LiCl对AMSCs细胞中Wnt/β-catenin信号通路第二信使β-联蛋白(β-catenin)的稳定作用,探讨体外激活Wnt/β-catenin信号通路对猪AMSCs向脂肪细胞分化的作用及其初步机制。应用细胞免疫化学染色鉴定AMSCs细胞表面分子CD44和CD105的表达;油红O染色法检测AMSCs成脂分化潜能;采用半定量RT-PCR及Westernblot等技术分析Wnt/β-catenin通路各因子及脂肪细胞分化转录因子的表达。结果显示,猪AMSCs表达CD44和CD105,并具有多向分化潜能;25mmol·L-1的LiCl处理AMSCs后,细胞中β-catenin蛋白表达明显增强;激活Wnt/β-catenin信号通路后,猪AMSCs在成脂诱导剂作用下向脂肪细胞分化的数目减少、细胞内甘油三酯含量降低,脂肪细胞分化转录因子C/EBPα和PPARγ的表达受到抑制。以上结果表明,激活Wnt/β-catenin信号通路能明显抑制猪AMSCs向脂肪细胞分化,其抑制作用可能是通过下调脂肪细胞分化转录因子PPARγ和C/EBPα的表达来实现的。 相似文献
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为了比较猪脂肪甘油酸脂酶(ATGL)基因在脂肪型猪(梅山猪)和瘦肉型猪(大白猪)皮下脂肪组织中的表达差异及不同组织中转录表达的差异,试验利用半定量RT-PCR法探讨其在猪组织中的表达特性。结果表明:猪ATGL基因在4月龄脂肪型猪脂肪组织中的表达显著低于瘦肉型猪(P<0.05);猪ATGL基因在脂肪组织和心脏组织中有高丰度表达,在肌肉组织中的表达丰度较低,在肠组织中的表达丰度极低,而在其他组织中不表达;猪与小鼠ATGL基因的表达特性相似,推测猪ATGL基因可能在脂肪细胞脂质水解过程中具有重要的调控作用。 相似文献
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为了研究葛根素(puerarin)对3T3-L1前体脂肪细胞分化的影响,探索其在成脂分化过程中的潜在作用机制,试验在脂肪形成过程中将0、10、50μmol/L葛根素加入到诱导分化培养基中诱导分化,分别通过油红O染色法及甘油三酯酶法检测葛根素对3T3-L1脂肪细胞的脂滴积累、甘油三酯的影响;采用实时荧光定量PCR检测脂肪细胞中CCAAT-增强子结合蛋白α(C/EBPα)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的mRNA表达量,Western blotting检测脂肪形成相关转录因子及Akt信号通路的蛋白水平的表达量。结果表明,10μmol/L葛根素极显著增加了成熟脂肪细胞中脂滴和甘油三酯(TG)的积聚,极显著促进了脂肪形成相关转录因子C/EBPα和PPARγ的mRNA和蛋白水平的表达量(P0.01)。进一步研究发现,与对照组相比,葛根素的刺激可增强Akt信号通路Ser473蛋白的磷酸化表达水平,表明葛根素对成脂分化过程的促进作用很大程度上是通过Akt信号通路的磷酸化来实现的。综上所述,葛根素能够促进3T3-L1前体脂肪细胞的分化,改善胰岛素敏感性,其作用机制与激活Akt信号通路Ser473位点的磷酸化水平有关。本试验结果可为研究胰岛素的效应机制提供新见解,为胰岛素抵抗相关疾病的治疗提供新思路。 相似文献
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旨在研究柠檬苦素(Limonin, LM)对高脂饲料诱导的小鼠肾损伤的保护作用。选用体重21～23 g雄性C57BL/6小鼠25只，随机分为5组(n=5):对照组、LM组、高脂组、高脂+低剂量LM组(60 mg·(kg·d)-1)和高脂+高剂量LM组(120 mg·(kg·d)-1)。12周后称量各组小鼠体重；使用自动生化分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN);使用试剂盒检测肾组织TG、TC;通过苏木精-伊红(HE)、糖原(PAS)染色观察肾组织病理组织学变化；通过免疫组织化学检测肾中脂肪酸合成酶(FAS)、甾醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)蛋白含量；通过蛋白免疫印迹检测AMP活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化的AMPK(P-AMPK)、FAS、SREBP1、ATGL、HSL及肾损伤分子1(KIM1)的表达；通过分子对接检验LM、阿卡地新(AICA Riboside, AICAR)以及多索吗啡... 相似文献
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鹅Perilipin基因部分片段的克隆、不同品种及填饲对组织mRNA表达水平的影响 总被引：3，自引：0，他引：3
本研究旨在克隆鹅围脂滴蛋白(Perilipin)基因,并探讨填饲对其在四川白鹅和朗德鹅肝脏中表达的影响,为从脂滴角度研究鹅肥肝分子机理提供依据。试验选取12只朗德鹅和12只四川白鹅为研究对象,通过RT-PCR方法扩增鹅Perilipin基因部分序列,采用实时定量技术研究了该基因在皮脂、腹脂、肝脏等10个组织中的表达情况,最后检测填饲后两品种鹅肝脏总脂质含量、甘油三酯(TG)水平、肝质量以及Perilipin基因表达变化。结果表明:获得的鹅Perilipin基因序列与原鸡的同源性最高,与哺乳动物的同源性也达到70%以上;从组织表达上看,该基因主要表达于腹脂和皮脂,而在其他组织几乎不表达;填饲引起鹅肝脏Perilipin mRNA表达丰度的极显著增加(P0.01),且与肝质量、肝内TG和总脂质呈显著正相关;此外,填饲导致其在朗德鹅肝脏中的表达丰度显著高于四川白鹅(P0.05)。结果提示:填饲会引起Perilipin mRNA在鹅肝脏中表达丰度的极显著增加(P0.01),且其增加幅度存在着品种间差异(P0.05)。 相似文献
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利用半定量RT-PCR法分析比较了甘油三酯水解酶(Triacylglycerol hydrolase,TGH)和激素敏感脂酶(Hormone-sensitive lipase,HSL)基因在不同猪种、不同发育阶段及不同部位脂肪组织中转录表达的差异,探讨其在猪脂肪组织的表达规律。结果显示,脂肪型个体TGHmRNA表达丰度显著低于瘦肉型和杂交型个体,成年猪较初生仔猪低,皮下、腹膜和内脏脂肪组织中TGH表达量依次递增;其变化规律与HSL相同。此外,对分离培养的原代前体脂肪细胞通过诱导分化和油红O染色区分分化状态,分析TGHmRNA表达的时序变化,发现TGH在前脂肪细胞中不转录表达,诱导分化后开始表达,且在诱导分化第4天表达量最高,分化第10天表达量下降,达到峰值的时间较HSL早。结果表明,TGH的表达与个体肥胖程度、年龄、脂肪组织部位以及脂肪细胞分化程度相关,同时,在脂肪细胞分化过程中,TGH表达峰值早于HSL,提示TGH在脂肪细胞发育过程中可能较早承担基础脂解作用。 相似文献