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为建立一种批量检测罗非鱼无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)的快速敏感的原位杂交方法,本研究依据罗非鱼无乳链球菌cfb基因序列,选取其132-599 bp之间的序列为靶序列,采用PCR法制备了特异性地高辛标记的DNA探针DIG-cfb(Digoxigenin-labelled cfb probe,430 bp),同时对所制备的探针进行了测序鉴定及特异性和敏感性检测。结果表明,探针测序序列与实际Gen Bank序列相符,所制备的DIG-cfb探针与无乳链球菌基因组杂交呈阳性,与患病罗非鱼的其他细菌病原(嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、类志贺邻单胞菌以及海豚链球菌)基因组,以及与无乳链球菌亲缘关系较近的链球菌其他种(牛源链球菌、变异链球菌),斑点反应则均为阴性,d NTP对照组也为阴性,表明该方法特异性强;该方法可实现对批量样品的快速检测,具有较高的灵敏度,可检测无乳链球菌基因组的下限为1.5 ng/μL DNA。对采集于广东、海南及广西等不同地点的无乳链球菌样品,均可获得较明显的斑点反应圈,对患链球菌病的罗非鱼肝、脑组织基因组也可特异的检测出无乳链球菌。表明本研究建立的DIG-cfb原位杂交法对无乳链球菌基因组的检测具有快速、特异、敏感等特点,适合罗非鱼无乳链球菌的批量检测。 相似文献
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为了进一步分析热激蛋白在温度锻炼诱导的交叉适应性形成过程中的保护功能,本文以葡萄（Vitis vinifera L. cv. Jingxiu）幼苗为试材,采用胶体金免疫电镜定位技术,定位观察了HSP70在葡萄叶片中的亚细胞分布情况。结果表明,低温锻炼预处理可增强其在高温胁迫条件下的表达水平,细胞核和叶绿体中代表HSP70的免疫金颗粒密度比相应的对照细胞明显增多,尤其是胁迫处理3h时。与低温锻炼相似,高温锻炼预处理增强了葡萄叶片在高温胁迫下细胞核和叶绿体中HSP70的表达量。这一结果为HSP70参与温度锻炼诱导的交叉适应性提供了更直观的细胞学证据。 相似文献
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罗非鱼无乳链球菌鉴定及基于cfb和16S rRNA基因同源性分析 总被引：2，自引：2，他引：0
为进一步阐明不同宿主不同地区无乳链球菌之间的关系,本研究从细菌形态学、生理生化、16S rRNA和cfb基因等方面,鉴定了2009—2011年广东、海南等地区的25株罗非鱼链球菌病原。同时结合全球不同宿主来源的84株链球菌16S rRNA 基因序列,利用 Modeltest 3.7、MEGA 3.0、MrBayes 3.0 b4进行综合系统发育分析。结果表明：2009—2011年罗非鱼链球菌病原均为无乳链球菌且它们在进化上聚为一个支系,说明2009—2011年广东、海南等地区罗非鱼无乳链球菌病原具有相同的起源。此外,罗非鱼无乳链球菌与法国人源、美国人源、牛源以及日本猪源等无乳链球菌均以高支持率(100)聚在一个支系,说明全球不同宿主来源的无乳链球菌亦具有相同的进化起源,同时也证明了中国罗非鱼无乳链球菌的潜在人畜共患性,这是国内首次对不同宿主无乳链球菌进行系统发育研究。 相似文献
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甲状腺素及胰高血糖素对高温条件下体外培养奶牛乳腺上皮细胞热休克蛋白表达的影响 总被引：4，自引：0，他引：4
为阐明甲状腺素及胰高血糖素对高温体外培养奶牛乳腺上皮细胞内热休克蛋白(HSPs)mRNA转录和蛋白表达的影响。本试验对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞添加不同浓度的甲状腺素、胰高血糖素,分别于42℃培养12 h。采用RT-qPCR方法检测细胞内HSF-1、HSP27、HSP70和HSP90的mRNA表达丰度,ELISA方法检测HSP27、HSP70和HSP90的蛋白质表达。各浓度的甲状腺素、胰高血糖素均能显著降低高温条件下奶牛乳腺上皮细胞中HSP27、HSP70和HSP90 mRNA表达丰度(P0.05);各浓度的胰高血糖素能极显著的降低高温条件下HSP27、HSP70和HSP90的蛋白表达(P0.01),同时各浓度甲状腺素也能极显著的降低HSP27、HSP70的蛋白表达(P0.01),而仅0.01,0.1,2μmol/L的甲状腺素能极显著的降低HSP90的蛋白表达(P0.01)。结果提示,甲状腺素及胰高血糖素能明显降低高温条件下HSPs mRNA的转录和蛋白的表达水平。 相似文献
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奶牛HSP 70表达量与温湿指数的相关性研究 总被引：3，自引：1，他引：2
利用免疫学和分子生物学手段研究荷斯坦牛和娟-荷F1牛,在环境温湿指数(THI)影响下,血液淋巴细胞热应激蛋白70(HSP 70)的表达情况,旨在探索HSP 70表达量与THI相关性以及不同品种差异性。结果表明：(1)荷斯坦成乳牛在热应激和非热应激条件下均可表达HSP 70,严重热应激期(THI 93.5±2.1)HSP 70表达量分别是中度热应激期(THI 76.7±2.6)1.9倍(P<0.01)和非热应激期(THI 56.5±1.7)6.9倍(P<0.01),中度热应激期HSP 70表达量是非热应激期3.6倍(P<0.05),HSP 70表达量与THI呈强度正相关(R=0.91)(P<0.01),THI每上升1个单位,HSP 70表达量增加2172 OD/mm2;(2)在严重热应(THI 95.3)条件下,娟-荷F1成乳牛HSP 70表达量极显著高于荷斯坦牛(P<0.01)。
关键词：奶牛;热应激蛋白;温湿指数;相关性 相似文献
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研究中国荷斯坦牛HSP70-1基因与奶牛耐热性之间的关系.根据NCBI登陆号为AY149618(19 526 bp)的HSP70-1基因序列设计9对引物分段扩增该基因全长,并用PCR-SSCP、PCR-RFLP和CRS-RFLP相结合的方法寻找中国荷斯坦牛HSP70-1基因编码区的多态位点,分析山东省3个现代化牛场产奶牛127头,并以直肠温度和红细胞钾离子浓度为荷斯坦牛的耐热指标,用SAS 软件最小二乘分析一般线性模型分析试验牛HSP70-1基因型与耐热指标的相关性.发现1 623 bp处发生G→A→C的复等位突变位点,2 409 bp处发生G→A的突变;χ2检验结果表明在试验牛群中两位点均未达到Hardy-Weinberg平衡;2409位点基因型与两个耐热指标相关性不显著(P＞0.05),1623位点基因型与热应激时期中国荷斯坦牛的直肠温度相关性显著(P＜0.05),GA基因型个体显著低于CC和GG基因型个体,GA基因型为耐热基因型.HSP70-1基因可用作中国荷斯坦牛选育耐热牛群的分子遗传标记. 相似文献
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热休克蛋白也称热激蛋白(heat shock protein, HSP),是植物在受到生长环境中不利的生长因子胁迫时产生的一种用于抗逆的防御蛋白,其中在生物体中分布最普遍的一种热激蛋白是热休克蛋白70 (heat shock protein 70, HSP70)。为全面、深入地了解芸薹属HSP70基因家族的信息,本研究对芸薹属的3个物种(白菜,甘蓝和甘蓝型油菜)进行了生物信息学分析,首先在BRAD数据库中对芸薹属的3个物种进行HSP70基因数目的鉴定,分别在白菜和甘蓝中鉴定出了2个HSP70,在甘蓝型油菜中鉴定出了4个HSP70。将鉴定出来的这8个HSP70基因进行生物信息学分析(系统发生关系,基因结构,保守基序,染色体定位和同源性等),结果显示,芸薹属HSP70基因结构相似,在核酸和蛋白水平均具有高度保守性,进化过程中基本种之间以及天然杂交种与基本种之间均保持着极高的同源性,进化树以及其他生物信息学分析结果还表明甘蓝型油菜的HSP70位点与白菜、甘蓝的HSP70位点符合"禹氏三角"理论,但是根据3个物种的HSP70基因数量及对应关系等分析结果可推测白菜、甘蓝、甘蓝型油菜3个物种的HSP70位点与三倍化理论不完全一致,此结果可反映芸薹属的这3个物种在进化过程中其HSP70基因在数量或结构上发生过变化,致使其不满足三倍化学说。 相似文献
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为探究虎杖粗提物和白藜芦醇对注射无乳链球菌红罗非鱼肝脏酶活的影响，在本实验中将红罗非鱼随机分为24组，12组投喂基础日粮，为不加药组，另外12组投喂添加了虎杖粗提物和白藜芦醇的基础日粮，为加药组。在加药组与不加药组中各选取3小组鱼分别注射3个浓度梯度的无乳链球菌菌液，同时设置不注射菌液的对照组，连续观察21 d并记录死亡数量。21 d后检测活鱼肝脏组织中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)和溶菌酶(LZM)的活性。结果显示，当受到低浓度(7×103CFU/mL)无乳链球菌胁迫时，虎杖粗提物和白藜芦醇可通过增强红罗非鱼鱼体的抗氧化能力来降低链球菌对机体的损害；当受到高浓度(7×105CFU/mL)无乳链球菌胁迫时，虎杖粗提物和白藜芦醇则通过诱导肝脏中磷酸酶的活性来提高鱼体的抗病力。同时，虎杖粗提物和白藜芦醇在投喂12 d后可使注射无乳链球菌红罗非鱼的死亡率不再增加。该实验表明高、低浓度无乳链球菌胁迫时，虎杖粗提物和白藜芦醇可降低链球菌对鱼体的损害，且控制死亡率。 相似文献
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LU Hai-Qin CHEN Li CHEN Lei ZHANG Ying-Chuan WEN Jing YI Bin TU Jing-Xing FU Ting-Dong SHEN Jin-Xiong 《作物学报》2020,46(10):1474-1484
HSP70(heat shock protein 70)参与植物热胁迫应答,增强植物耐热性,但目前油菜中尚无miRNA调控HSP70基因的报道。本研究novel-miR311是利用高通量技术在甘蓝型油菜茎尖中筛选出的新miRNA。novel-miR311存在于油菜而不存在于拟南芥中, 5'-RACE技术证实其2个靶基因属热应激同源蛋白基因HSC70-1 (HSP70家族),在甘蓝型油菜体内被剪切。构建novel-miR311超表达载体,转化拟南芥和甘蓝型油菜,其转基因阳性苗中HSC70-1基因表达量显著下降。高温胁迫试验表明,拟南芥和甘蓝型油菜热胁迫后,其阳性苗的生长势和存活率显著低于其对应的对照。qPCR结果显示,油菜中HSC70-1基因表达量热胁迫后较热胁迫前上升。上述结果表明,油菜novel-miR311介导HSC70-1基因的剪切降低了拟南芥和甘蓝型油菜耐热性。 相似文献
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为证实热休克小鼠胎儿成纤维细胞中钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)对热休克蛋白70(Heat shock protein70,HSP70)基因表达的影响及其作用机理,将体外培养的小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse Embryonic Fibroblasts,MEF)随机分为39℃和41℃热处理组(分别处理0.5,1,1.5,2 h)和常温对照组(37℃),测定各组细胞CaMKⅡ和HSF1 mRNA的量。此外,将培养的细胞分为37℃和39℃CaMKⅡ特异性抑制剂(myr-AIP)处理组和相应的空白对照组,分别测定各组细胞HSP70、HSF1及其mRNA的量。结果表明,39℃热休克1 h后HSF1和CaMKⅡ的mRNA表达量极显著高于常温对照组,经过myr-AIP处理的39℃组细胞HSP70及其mR-NA含量显著低于39℃空白对照组,而37℃myr-AIP处理组与37℃对照组没有显著差异;myr-AIP对37℃组和39℃组的HSF1 mRNA和蛋白含量影响均不显著,却使p-HSF1的含量显著降低。热休克能增加CaMKⅡ和HSF1 mRNA的转录,且CaMKⅡ通过磷酸化HSF1促进HSP70基因表达。 相似文献
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半定量RT-PCR方法检测热应激对鲫鱼肝脏中HSP70 mRNA含量的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
依据GenBank已公布的鲫鱼热激蛋白70(Heat shock protein70,HSP70)和beta-actin mRNA序列,分别设计两对引物,应用半定量RT-PCR方法检测应激处理后不同恢复时期鲫鱼(Carassius auratus)肝脏中HSP70 mRNA的表达情况。结果表明,诱导后肝脏组织中HSP70 mRNA的表达量呈现时间依赖性,存在先升高后回落的趋势。在诱导后1h即有所升高,在4h时达到最高值,之后逐渐降低,至48h,表达量降至最初值。研究结果为鲫鱼HSP70的研究提供了基础数据,也为将HSP70用作鱼类生理状态的诊断提供了理论依据。 相似文献
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《Medicinal Plant》2015,(Z5)
[Objective] To discuss the effects of Scutellaria bartata flavonoids on NOS,HSP70 and apo E expression of rats astrocytes induced by Aβ25- 35. [Methods] Astrocytes of rats in the third generation were randomly divided into blank control group,model group and three dosage groups of S. bartata flavonoids. 17. 5,35 and 70 μg / m L S. bartata flavonoids were added into cells in dosage groups for 24 h. Then,100 μmol Aβ25- 35 was added into model group and three dosage groups for reaction for 24 h. e NOS,i NOS and n NOS expressions in astrocytes were detected by immunohistochemistry. HSP70 and apo E mRNA expressions in astrocytes were detected by western blotting and RTPCR,respectively. [Results] Compared with blank group,e NOS content reduced by 60. 83%(P 0. 01) in model group,i NOS content enhanced by 215. 03%(P 0. 01),HSP70 content enhanced by 166. 67%(P 0. 01),and apo E mRNA content increased by 150. 00%(P 0. 01). 17. 5,35 and 70 μg / m L S. bartata flavonoids enhanced the e NOS content in different degrees(73. 66%- 137. 77%,P 0. 05),reduced the i NOS content by 19. 40%- 44. 50%(P 0. 01),decreased the HSP70 content by 18. 52%- 49. 38%(P 0. 01),and reduced the apo E mRNA content by 14. 17%- 41. 67%(P 0. 01). [Conclusions] S. bartata flavonoids interfered the damaged astrocytes induced by Aβ25- 35,and this influence might be helpful for the treatment of AD. 相似文献
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复方中药制剂“球宁”对感染柔嫩艾美耳球虫雏鸡红细胞免疫功能的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
用青蒿、常山等组成复方中药制剂“球宁”,并对其进行超微粉碎加工成微粉制剂。按不同比例添加与饲料中,饲喂人工感染柔嫩艾美耳球虫的雏鸡,以磺胺喹啉钠为对照,在感染后8d剖杀,检测血浆中红细胞C3b受体(RBC-CR1)花环率和免疫复合物(RBC-IC)花环率,以观察“球宁”及其微粉制剂对人工感染柔嫩艾美耳球虫的雏鸡的红细胞免疫功能的影响。结果,粗粉组(2%)、微粉组(2%)、微粉组(1%)三组的红细胞C3b受体花环形成率比阳性对照组有明显提高(p<0.05);红细胞免疫复合物(RBC-IC)花环形成率比阳性对照组有所降低(p<0.01)。说明所试药物能改善红细胞的免疫粘附功能,显著降低血浆中免疫复合物的含量,降低球虫病对机体的损伤。 相似文献
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《农产品加工．学刊》2020,(10)
研究了罗非鱼肉肽、罗非鱼皮肽、鲣鱼肽体外结合胆酸盐的效果。结果表明,罗非鱼肉肽对3种胆酸盐都有结合能力,其余2种肽对胆酸盐没有或者有很弱的结合能力;罗非鱼肉肽对牛磺胆酸钠的结合率和结合量分别为38.27%和1.32 mg/g,对甘氨胆酸钠为34.07%和1.04 mg/g,对胆酸钠为20.80%和0.82 mg/g;罗非鱼肉肽结合胆酸盐适宜的添加量为15.0～16.7mg/mL;模拟胃肠道消化发现,罗非鱼肉肽对牛磺胆酸钠、甘氨胆酸钠的结合率和结合量都提高,分别达到43.69%和1.75 mg/g,37.31%和1.49 mg/g,罗非鱼肉肽在60 min对胆酸钠结合率和结合量基本达到平衡为28.74%和0.96 mg/g。罗非鱼肉肽结合牛磺胆酸钠的能力约为考来烯胺的40%。 相似文献
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以细菌总数、TVB-N为指标,比较了生姜、大蒜、溶菌酶、乳酸链球菌素、茶多酚、ε-聚赖氨酸、鱼精蛋白、壳聚糖等8种天然生物防腐剂对生鲜罗非鱼片的防腐效果。结果表明,8种天然生物防腐剂对生鲜罗非鱼片均有一定防腐作用,最佳防腐浓度分别为:生姜体积分数20 mL/100 mL,大蒜60 mL/100 mL,溶菌酶质量分数0.5%,茶多酚0.6%,乳酸链球菌素1.0%,鱼精蛋白0.6%,壳聚糖1.2%,ε-聚赖氨酸0.6%。其中,生姜、大蒜和壳聚糖的防腐效果相对较好。 相似文献
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本研究通过热激(43～45℃)和2种外源激素吲哚乙酸(IAA)、乙烯利对6个大豆品种的花荚期植株进行单一处理和复合处理,研究不同处理对大豆HSP70基因表达的影响。Northem杂交结果显示,单一热激处理时所有供试品种的HSP70基因表达量明显高于常温(30～32℃)处理组。用激素(IAA或乙烯利)单一处理时,所有供试品种的HSP70基因表达量与各自的水处理对照组无明显差异,当热激附加IAA(0．05～0．15g／L)复合处理时,所有6个品种的HSP70 mRNA转录量均高于各自的单一激素处理,而热激附加乙烯利(1～7ml／L)复合处理的作用效果较为复杂,HSP70基因的表达水平因品种而异。实验结果说明,热激处理能够提高大豆植株花荚离层组织HSP70基因的表达水平,外源激素(IAA或乙烯利)单独处理基本不能促进大豆HSP70基因的表达,但IAA处理能够加强热激对该基因的表达作用,表现协同效应,这种协同效应对于提高大豆抗逆性和降低花荚脱落率具有实际意义。 相似文献
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选用4种中草药方剂AH、CD、Ⅳ和APS,每日按体质量的3%混饲鲫鱼30 d。采用实时荧光定量RT-PCR方法,监测适温(18℃)及热刺激(28℃)1 h后的鲫鱼脑及肝脏中HSP 70表达水平变化。试验结果表明,对照组鲫鱼体内2种组织中HSP 70的表达量在热刺激条件下均有不同程度的升高,且适温和热应激条件下,鲫鱼肝脏组织中HSP 70表达量均明显高于脑组织。而AH组、IV组和APS组热刺激后HSP 70 mRNA含量升高,但CD组热刺激后HSP 70 mRNA转录水平降低,且在肝脏中表达水平降低极为显著。4种方剂中尤以补血养气为主要功能的AH方剂在鲫鱼肝脏中对HSP 70表达水平有极大的促进作用,在适温及热应激条件下,分别是对照组的4.86,3.43倍。因此,中草药方剂AH对促进鲫鱼HSP 70基因高水平表达有较好的作用,有助于鱼体抵抗热刺激防止热损伤,可作为有效的鲫鱼抗热应激备选药物。 相似文献
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《分子植物育种》2016,(11)
本研究从水芹中克隆得到一个HSP基因Oj HSP90,生物信息学分析表明:水芹Oj HSP90基因全长2 100 bp,编码699个氨基酸;Oj HSP90蛋白的理论分子量为80.3 k D,等电点为5.01,是一种亲水性的稳定蛋白;Oj HSP90蛋白的二级结构中,α-螺旋占52.93%,延伸链占16.74%,β-折叠占5.87%,无规则卷曲占24.46%;该蛋白的N端含有1个HSP90超家族蛋白保守的结构域YSNKEIFLRE,能够与ATP结合;进化树分析表明,Oj HSP90蛋白与拟南芥At HSP90蛋白和烟草Nt HSP90的相似度最高,分别为91.99%和92.13%。本研究旨在为进一步研究HSP90基因的功能以及研究水芹耐高温途径提供理论参考。 相似文献