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以淹涝处理后的樱桃叶片和根系为材料,采用CTAB法、TaKaRa RNA提取试剂盒法和改良试剂盒法提取其总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白检测仪比较所提取总RNA样品的质量。结果表明:改良TaKaRa RNA提取试剂盒法提取的总RNA完整性高,质量好,无降解;进一步采用改良TaKaRa RNA提取试剂盒法提取樱桃淹涝胁迫0—4 d叶片和根系的总RNA为模板进行RT-PCR验证,发现PCR扩增得到的条带较清晰,与目的片段大小一致。因此,改良TaKaRa RNA提取试剂盒法提取的樱桃叶片与根系总RNA完全可以满足进一步分子生物学研究的需要,是淹涝处理后樱桃总RNA提取的理想方法。 相似文献
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以西洋梨品种‘早红考密斯’、‘香红蜜’和白梨品种‘华酥’成熟果实为试材,采用Plantol总RNA提取试剂盒法、改良CTAB法和SDS法提取果皮中总RNA,并通过凝胶电泳、核酸蛋白分析仪和RT-PCR检测所提取总RNA样品的质量.结果表明,Plantol试剂盒法和改良CTAB法提取的RNA,经RT-PCR后得到的条带清晰,与目的片段大小一致,可以满足基因表达分析等试验的要求;而SDS法所提取的部分RNA,RT-PCR扩增不到目的片段,难以达到进一步试验的要求. 相似文献
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芍药芽总RNA提取方法的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
以处于休眠和解除休眠时期的芍药芽为试验材料,采用改良CTAB法、Trizol法和EASYspin Plus植物RNA快速提取试剂盒提取其总RNA,通过核酸蛋白仪、琼脂糖凝胶电泳和RT-PCR检测所提总RNA样品的品质。结果表明,Trizol法没有提取到芍药芽总RNA;EASYspin Plus植物RNA快速提取试剂盒提取的总RNA浓度太低,无法满足下一步试验的要求;改良CTAB法提得的总RNA较完整,条带清晰,品质较优,28S rRNA亮度约是18S rRNA的2倍,且无降解现象。以改良的CTAB法提取的总RNA为模板进行内参Actin扩增,得到的条带清晰,与目的片段大小一致,进一步证明此方法提取的总RNA能够满足后续试验的要求。 相似文献
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分别采用Trizol法、CTAB法、异硫氰酸胍法、SDS法和Omega试剂盒法从短枝木麻黄小枝中提取总RNA。结果表明:用Trizol法和异硫氰酸胍法没有提取到木麻黄总RNA;用CTAB法提取的RNA发生了降解;只有SDS法和Omega试剂盒法成功提取到木麻黄小枝RNA,但质量均没有达到试验要求。对提取效果相对较好的SDS法进行改进,主要是加入去除次生代谢物质的步骤。经检测,改进后的SDS法提取的木麻黄小枝总RNA纯度高、完整性好,能够满足RT-PCR分析等分子生物学研究的要求。 相似文献
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《江苏农业科学》2015,(9)
发菜是一种具有丰富胶质鞘、色素、多糖的陆生蓝藻。采用Omega RNA提取试剂盒、Trizol RNA提取法、天根试剂盒及优化后的Omega RNA提取试剂盒、Trizol法、天根试剂盒法从发菜藻体中提取RNA,并用核酸浓度测定仪和琼脂糖凝胶电泳检测提取的总RNA质量。结果表明,优化前后的Trizol法均无法提取到发菜总RNA;利用Omega试剂盒获得发菜总RNA已降解;利用天根试剂盒可获得发菜总RNA,进一步改进和优化天根试剂盒的提取程序,获得的发菜总RNA 23S、16S条带清晰,D260 nm/D280 nm、D260 nm/D230 nm分别为2.06、2.08。研究结果为深入开展发菜转录组研究奠定了基础。 相似文献
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荔枝果肉因含糖量高、水分大和含较高活性的氧化酶而难以提取高质量的总RNA。以妃子笑荔枝不同发育期果肉为试材,经过多种提取方法比较和改进,发现市售RNA提取试剂盒改进提取步骤后均可快速得到质量较高的总RNA,果肉总RNA完整性好、质量高,平均浓度都在20μg/g以上,符合进一步分子生物学试验的要求。以反转录后得到的cDNA为模板,进一步的实时定量PCR反应表明以未纯化的RNA反转录的cDNA为模板没有信号,而经纯化后即可得到有规律的基因表达。 相似文献
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为获得一种玫瑰(Rosa rugosa)花柱总RNA提取的理想方法,为后续相关基因工程研究奠定基础。以玫瑰花柱为材料,用核酸蛋白仪和凝胶电泳法比较了改良CTAB 法、Trizol 法以及EASY spin Plus 植物RNA提取试剂盒法提取的玫瑰花柱总RNA的纯度、浓度及完整性,利用RT-PCR反应检测了其反转录产物用于基因扩增的有效性。结果表明：改良CTAB法提取的总RNA纯度、浓度较高,但存在严重降解现象;Trizol 法提取的总RNA纯度和浓度极低;EASY spin Plus 植物RNA提取试剂盒法提取的总RNA纯度和浓度较高,条带清晰,且28S 条带亮度是18S 条带亮度的2 倍,将其反转录获得的cDNA用于RT-PCR,能够扩增出清晰的特异性条带。综上所述：EASY spin Plus 植物RNA提取试剂盒法从玫瑰花柱中提取的RNA质量最好,完全能够满足后续的玫瑰分子生物学研究要求。 相似文献
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目的筛选适合黄花石蒜花蕊和花葶组织中总脱氧核糖核苷酸(RNA)的提取方法。方法采用CTAB法、SDS法和植物总RNA提取试剂盒法对黄花石蒜花蕊和花葶组织中总RNA进行提取并比较其效果。结果 CTAB法和SDS法均不能提取到完整的RNA;植物总RNA提取试剂盒能有效地去除蛋白质、多糖及DNA,28S条带的荧光亮度是18S条带的2倍左右,OD260/280值在1.8~2.0之间,花蕊和花葶的产率分别为304.1μg/g和255.8μg/g,并且试剂盒法提取的总RNA通过RT-PCR扩增能获得特异性条带。结论试剂盒法适合黄花石蒜花蕊和花葶组织总RNA的提取,提取的总RNA质量高、完整性好、产率高,符合后续实验的要求。 相似文献
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不同方法提取吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的比较 总被引：1，自引：0，他引：1
分别研究对比了3种不同方法提取吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的质量,以确定适合吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的提取方法。采用紫外分光光度法和普通电泳检测法比较了常规CTAB法、SDS法和改良CTAB法提取吴茱萸叶片基因组DNA的效果;采用紫外分光光度法和非变性电泳检测法比较了酚-SDS法、Trizol法和改良异硫氰酸胍法提取吴茱萸叶片RNA的效果。结果表明,分别采用不同方法提取的吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的质量差异较大。常规CTAB法和SDS法无法提取出高质量的吴茱萸叶片基因组DNA,而改良CTAB法提取效果较好;酚-SDS法和Trizol法不适合高质量吴茱萸叶片RNA的提取,而改良异硫氰酸胍法的提取效果良好。 相似文献
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采用改良CTAB法、硼砂/CTAB法、酚/SDS法、皂土法和2种总RNA提取试剂盒共6种方法提取滇杨叶芽总RNA,并通过紫外分光光度计测定RNA样品的纯度,琼脂糖凝胶电泳和cDNA AFLP检测总RNA样品的完整性和质量。结果表明,硼砂/CTAB法和皂土法不适合滇杨叶芽总RNA的提取。改良CTAB法、酚/SDS法和2种试剂盒均能得到清晰的28S和18S条带。其中,改良CTAB法提取的滇杨叶芽总RNA完整性最好,OD260/OD280值在1.8-2.0之间,OD260/OD230值>2.0,经过cDNA-AFLP扩增分析,获得了清晰的条带。结果证明,改良CTAB法提取的滇杨叶芽总RNA能够满足RT-PCR等分子生物学实验。 相似文献
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水稻抑制差减杂交技术中叶片总RNA提取方法的探讨 总被引：1，自引：0，他引：1
为建立水稻抑制差减杂交技术中叶片总RNA最佳的提取方法,以5叶期水稻品种合江19为提取总RNA的材料,对Trizol法和两种改良Trizol法提取的水稻叶片总RNA纯度和完整性进行了比较研究。基因定量仪检测结果表明,Trizol法、改良Trizol法Ⅰ和改良Trizol法Ⅱ提取的RNAOD（260／280）分别为1．529、1．755和1．991;琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,改良Trizol法Ⅱ提取的RNA具有28s、18s和5s3条清晰的条带,且无降解,而其他两种方法提取的RNA质量较差,均有降解。该研究结果说明改良Trizol法Ⅱ提取的RNA完整性好和纯度较高,该方法优于Trizol法。 相似文献
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[目的]从杜仲树皮中获得高质量的总RNA。为开展杜仲后续mRNA分离、杜仲抗真菌蛋白基因克隆、及杜仲树皮cDNA文库构建等研究奠定基础。[方法]以杜仲树皮为材料,分别采用改良CTAB-LiCl法、RNApure Plant Kit法和RNAiso Plus法进行总RNA提取,用琼脂糖甲醛变性凝胶电泳检测总RNA的完整性,用紫外分光光度计检测总RNA的纯度和得率。[结果]改良CTAB-LiCl法和RNA-pure PlantKit法提取的杜仲树皮总RNA纯度和完整性较高,A260/A280值均在1.800~2.000,28和18 SrRNA条带清晰,RNA得率较高;而RNAiso Plus法提取的杜仲树皮总RNA的纯度和完整性较低,A260/A280值为1.652,28S和18S rRNA条带存在降解和弥散现象,RNA得率低。[结论]改良CTAB-LiCl法和RNApure Plant Kit法抽提获得的杜仲树皮总RNA质量较高,能满足后续RT-PCR和RACE等试验的要求,这为成功克隆杜仲相关基因奠定了基础。关键词杜仲树皮;RNA提取;方法;比较 相似文献
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Trizol法提取厚皮甜瓜果实RNA条件的筛选 总被引：3，自引：1，他引：2
采用改良的Trizol法提取厚皮甜瓜‘银帝’果实中的RNA.利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法和RT-PCR法进行纯度、浓度和RNA完整性检测.结果表明:1 mL Trizol用于提取200 mg甜瓜果实量时,得到的RNA产量最大,氯仿抽提2次时提取到的RNA的A260/A280在1.9~2.0之间,所提取的RNA无蛋白质和DNA污染,室温沉淀和低温沉淀对RNA的产量无明显影响.将提取的RNA反转录后扩增β-actin基因片段,扩增的条带与设计大小一致,验证了该方法提取的RNA可用于RT-PCR. 相似文献
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红肉桃果实总RNA提取方法的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
以红肉桃果实为材料,采用Unizol总RNA提取试剂盒、CTAB法、冷酚法和改良SDS法4种方法分别提取果皮和果肉中总RNA,以期获得提取红肉桃果肉中总RNA的最适方法。比较,发现改良后的SDS法更适合于红肉桃果实总RNA的提取。此方法所得RNA完整性好,纯度和浓度均较高,可用于RT-PCR分析研究及后续实验。 相似文献
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猪肝脏总RNA快速提取方法 总被引：1，自引：0，他引：1
采用CTAB法和改良的Trizol法提取贵州从江香猪(Sus scrofa domestica)新鲜肝脏的总RNA,通过紫外分光光度法和凝胶电泳检测RNA质量。结果表明,改良的Trizol法提取的总RNA的纯度高,完整性好,优于CTAB法。且改良的Trizol法提取的猪肝脏总RNA可用于RT-PCR等后续分子生物学操作。 相似文献