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将携带有化学合成的SREBP-1c基因的质粒先用Xba Ⅰ酶切,Klenow补平突出末端,纯化回收后再用Hind Ⅲ酶切,切胶回收目的基因片段;并将其克隆至用EcoR Ⅴ/HindⅢ酶切回收的pShuttle-EGFP-CMV(-)TEMP穿梭载体上.经酶切鉴定后,重组穿梭质粒和腺病毒pAdxsi质粒分别用I-Ceu Ⅰ+I-Sce Ⅰ双酶切处理,T4DNA连接酶连接,获得重组质粒pAdxsi-GFP-SREBP1c,酶切鉴定后经Pac Ⅰ酶切线性化转染HEK293细胞,经包装扩增后用TCID50测定病毒滴度.以重组腺病毒感染犊牛原代肝细胞,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中SREBP1c mRNA和蛋白的表达量.结果显示,重组腺病毒酶切鉴定正确,滴度可达1.2×1010,腺病毒感染犊牛原代肝细胞中SREBP-1c mRNA和蛋白的表达显著升高.结果表明,本试验成功构建了SREBP-1c基因过表达重组腺病毒,且SREBP-1c在犊牛原代肝细胞中高度表达. 相似文献
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为了研究肌内脂肪与脂类合成代谢相关基因的关系,试验采用荧光定量PCR的方法检测了8头乌金猪和6头长白猪背最长肌脂肪酸合成酶(FAS)、固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)和硬脂酰CoA去饱和酶(SCD)基因mRNA相对表达量,同时采用索氏提取法检测背最长肌肌内脂肪含量,并对两者进行相关性分析。结果表明:乌金猪FAS基因mRNA相对表达量极显著高于长白猪(P0.01);SCD基因mRNA相对表达量显著高于长白猪(P0.05);SREBP-1c基因mRNA相对表达量虽然高于长白猪,但差异不显著(P0.05)。乌金猪背最长肌肌内脂肪含量高于长白猪,且差异显著(P0.05)。乌金猪和长白猪的FAS和SCD基因mRNA相对表达量都与肌内脂肪含量呈极显著正相关(P0.01);乌金猪SREBP-1c基因mRNA相对表达量与肌内脂肪含量呈极显著正相关(P0.01),长白猪SREBP-1c基因mRNA相对表达量与肌内脂肪含量呈显著正相关(P0.05)。说明脂肪酸合成关键基因的mRNA相对表达量在乌金猪和长白猪间存在品种差异,这种差异可能是肌内脂肪含量不同的主要原因之一。 相似文献
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《中国兽医学报》2017,(2):312-317
为确定胰岛素(insulin,INS)和胰高血糖素(glucagon,GLN)对奶牛肝细胞脂合成作用的影响,本试验体外培养犊牛原代肝细胞,分别用不同浓度的INS和GLN处理肝细胞:对照组(0nmol/L)、浓度梯度组(1,10,100,1 000nmol/L)。培养1h后分别用免疫印迹(Western blot,WB)方法、荧光定量PCR(qRT-PCR)方法以及细胞免疫荧光(immunofluorescence,IF)方法检测INS和GLN处理体外培养肝细胞对关键转录因子固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)mRNA表达水平,SREBP-1c核质分布以及下游靶基因脂代谢关键酶乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达水平的影响。结果显示:INS处理使SREBP-1c的表达水平和转录活性显著升高,入核量显著增加,其下游的脂合成关键酶ACC和FAS的基因表达水平也显著升高。而与之相反,GLN处理使SREBP-1c的表达水平和转录活性显著降低,入核量显著减少,其下游的脂合成关键酶ACC和FAS的基因表达水平也显著降低。以上结果说明,INS可通过增强SREBP-1c的活性从而促进肝细胞脂合成,增加肝脂沉积;而GLN则通过抑制SREBP-1c的活性从而降低肝细胞脂合成。 相似文献
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催乳素(prolactin,PRL)是启动和维持泌乳所必须的激素,在泌乳期间能够优先将机体营养物质和能量流向乳腺,用于乳脂和乳蛋白的合成。本试验采用体外分离培养奶牛肝脏细胞,分别添加PRL和磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)抑制剂LY294002、PRL和酪氨酸蛋白激酶2(janus kinase 2,JAK2)抑制剂AG490,通过甘油三脂(triglyceride,TG)测定试剂盒测定细胞内TG含量,以确定PRL的脂质合成通路,进而探讨其对脂合成相关基因的作用。结果显示,PRL通过PI3K-Akt信号通路促进奶牛肝脏细胞TG的合成,此时关键转录因子固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)的表达活性和转录活性及下游控制脂合成的脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)基因表达均显著升高。而与之相反,添加LY294002之后,SREBP-1c基因的表达活性和转录活性及下游基因FAS、ACC1的表达则显著降低。结果表明,PRL通过PI3K-Akt通路调节SREBP-1c、FAS和ACC1的表达来调控肝脏细胞的TG合成。 相似文献
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脂肪酸结合蛋白5（fatty acid binding protein 5,FABP5）是一种胞内脂质运载体。本试验应用甘油三酯测定法及BODIPY染色法检测奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cell,BMEC）中甘油三酯及脂滴分泌情况,采用实时荧光定量PCR、Western blotting技术检测BMECs中FABP5对固醇调节元件结合蛋白-1c（SREBP-1c）的表达影响。结果显示,试验成功获得高纯度的BMECs,构建了pGCMV-IRES-EGFP-FABP5真核表达载体,且与空白对照组和空载体组相比,FABP5过表达组的甘油三酯和脂滴分泌量极显著增加（P<0.01）,同时SREBP-1c及靶基因FAS、ACC的表达量均极显著增加（P<0.01）;试验成功筛选了FABP5 siRNA1为最佳干扰片段,当FABP5抑制时,抑制组的甘油三酯、脂滴分泌量极显著减少（P<0.01）,SREBP-1c、FAS、ACC的表达量均极显著降低（P<0.01）。表明FABP5可通过上调SREBP-1c的表达从而促进BMEC中乳脂的合成。 相似文献
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在不同季节分别采集青海省祁连县、大通县和湟中县牦牛的肝脏、肾脏和结肠,提取Total RNA,在逆转录聚合酶的作用下生成cDNA,利用Real-time PCR检测牦牛甾醇类调控元件结合蛋白1(SREBP-1)基因mRNA的表达水平。结果显示,牦牛不同组织中SREBP-1基因相对表达量由大到小顺序为,肝脏、肾脏、结肠。SREBP-1基因在不同季节中除了2016年春季的牦牛,其他的均以肝脏样品中的SREBP-1 mRNA相对定量拷贝数最高。不同季节间SREBP-1基因在2015年春季和2016年春季中相对表达量差异极显著。3个组织间SREBP-1基因在结肠和肝脏中相对表达量差异呈极显著(P<0.01),在肾脏和肝脏中相对表达量差异显著(P<0.05)。 相似文献
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《中国草食动物科学》2020,(3)
研究旨在比较分析固醇调节元件结合蛋白-1(Sterol regulatory element-binding protein 1,SREBP-1)基因在湘西黄牛不同组织中的发育性表达规律,以探讨SREBP-1基因与肉牛脂肪代谢的关系。选取湖南德农牧业集团有限公司国家级保种场不同月龄(6月龄、18月龄、30月龄)湘西黄牛各4头,利用实时荧光定量PCR检测肝脏、背最长肌、皮下和腹腔脂肪组织SREBP-1基因的相对表达量。结果表明:①SREBP-1基因在湘西黄牛肝脏、背最长肌、皮下和腹腔脂肪的4个部位中的表达量随月龄增加依次显著增加(P0.01);②在6月龄时,皮下脂肪SREBP-1基因的表达量显著高于肝脏与腹腔脂肪(P0.05);③18月龄时,SREBP-1基因在肝脏中的表达量显著高于背最长肌与腹腔脂肪(P0.05);④30月龄时,SREBP-1基因在肝脏组织中的表达量显著高于其他3个组织(P0.05),在皮下脂肪中的表达量显著高于背最长肌与腹腔脂肪(P0.05)。由此可见,SREBP-1基因在湘西黄牛不同部位脂肪组织和肌肉组织中均有表达,且其表达随月龄与部位的不同而不同,存在月龄和部位的差异性。 相似文献
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脂肪细胞定向和分化因子1(Adipocyte Determination and Differentiation factor-1,ADD1),又称固醇调节元件结合蛋白1-c(Sterol Regulatory Element-binging Proteins-1c,SREBP1-c),是一种重要的核转录因子,作为固醇调节元件结合蛋白家族成员与SREBP-1α和SREBP-2一起调控脂肪酸和胆固醇的合成,并通过对葡糖激酶(GK)转录调控介导胰岛素,参与肝脏的碳水化合物和脂质代谢动态平衡.研究表明,ADD1基因多态性与猪肌内脂肪、皮脂率和屠宰率显著相关,ADD1基因很可能是影响猪肉质、胴体性状的候选基因. 相似文献
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对大鼠附睾和肾周脂肪组织分离的前体脂肪细胞原代培养，采用RT—PCR法分析脂代谢重要酶和转录因子基因在不同分化阶段转录表达的时序变化。结果显示，在前体脂肪细胞阶段，固醇调控元件结合蛋白（SREBP）-1c、碳水化合物反应元件结合蛋白（ChREBP）以及脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶α（ACC1）、硬酯酰辅酶A去饱和酶（SCD）和激素敏感脂酶（HSL）基因均不转录表达；HSL mRNA在分化初期表达，中期表达水平最高，分化末期降低；SCD mRNA在分化中期表达，末期表达水平显著提高；分化初期FAS mRNA水平明显高于中期和末期；ACC1 mRNA仅在末期表达；分化初期SREBP-1c mRNA水平较高，中期和末期显著下降；ChREBP mRNA表达水平在分化末期稍高于中期，但差异不显著。表明，SREBP-1c mRNA的表达与脂肪细胞早期分化调控有关，分化成熟脂肪细胞的ChREBP mRNA表达可能与生脂基因的转录激活有关。 相似文献
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试验旨在研究猪PPARGC1A和CAPNS1基因多态性及其与肉质性状的相关性。结果发现,PPARGC1A基因存在4个多态位点,CAPNS1基因存在3个多态位点。PPARGC1A基因突变位点c.1288T>A与杜洛克×皮特兰杂交F2代(DuPi,n=313)猪肉质pH和蒸煮损失显著相关(P<0.05),与大白猪(ILW,n=380)和长白猪(ILA,n=158)肉质pH显著相关(P<0.05);CAPNS1基因突变位点c.429A>C与杜洛克×皮特兰杂交猪pH、导电率显著相关(P<0.05),与长白猪肉质色度显著相关(P<0.05)。PPARGC1A基因mRNA表达与蒸煮损失呈极显著相关(P<0.01);CAPNS1基因mRNA表达与蒸煮损失也存在一定相关性,但差异不显著(P=0.06)。CAPNS1基因表达调控中没有发生启动子甲基化。因此,PPARGC1A和CAPNS1基因与猪肉质性状存在显著关联,且由于物种间差异,可作为候选基因用于猪肉质性状的改良。 相似文献
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Roland Grossmann 《畜牧与生物技术杂志(英文版)》2012,3(2):77-85
Background: A leptin-like immunoreactive substance has been found in chicken eggs and has been implicated in serving as a maternal signal to program offspring growth and metabolism. In the present study, we investigated the effects of in ovo leptin administration on hatch weight, serum and hepatic concentrations of metabolites and hormones, as well as on the expression of genes involved in hepatic lipid metabolism and the predicted microRNAs (miRNAs) targeting the affected genes. To this end we injected fertile eggs with either 0.5 μg of recombinant murine leptin or vehicle (PBS) before incubation. Results: Prenatally leptin-exposed chicks showed lower hatch weight, but higher liver weight relative to the body weight, compared to the control group. In ovo leptin treatment increased the hepatic content and serum concentration of leptin in newly hatched chickens. The hepatic contents of triglycerides (TG) and total cholesterol (Tch) were decreased, whereas the serum levels of TG, Tch and apolipoprotein B (ApoB) were increased. The hepatic mRNA expression of sterol regulator element binding protein 1 (SREBP-1c), SREBP-2, hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase (HMGCR) and cholesterol 7α-hydroxylase 1 (CYP7A1) was significantly up-regulated, as was the protein content of both SREBP-1c and SREBP-2 in hepatic nuclear extracts of leptin-treated chickens. Moreover, out of 12 miRNAs targeting SREBP-1c and/or HMGCR, five were significantly up-regulated in liver of leptin-treated chicks, including gga-miR-200b and gga-miR-429, which target both SREBP-1c and HMGCR. Conclusions: These results suggest that leptin in ovo decreases hatch weight, and modifies hepatic leptin secretion and lipid metabolism in newly hatched broiler chickens, possibly via microRNA-mediated gene regulation. 相似文献
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为了研究郏县红牛遗传育种研究进展,本文梳理了夏洛来牛、南德温牛、利木赞牛、红安格斯牛、丹麦红牛改良郏县红牛的研究进展,对郏县红牛基因多态性与生长性状的关系和基因遗传变异与生长性状的关系进行了梳理,结果表明：红安格斯牛可以提高郏县红牛的肉用性能和优质牛肉肉块重量,夏洛来牛改良郏县红牛可以提高牛肉品质;ZAG基因、IGF2基因、DGAT2基因、CLPG基因、AQP7基因可以作为生长性状辅助选择的基因,POU1F1基因第6外显子被Hinf I酶切后表现多态性,BB基因型个体可以作为生长性状辅助选择的基因,SREBP-1c基因内含子7区域84 bp缺失位点可以作为生长性状辅助选择的位点。 相似文献
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《中兽医医药杂志》2015,(6)
以5个早胜牛类群(庆阳类群、平凉类群、南德温与庆阳类群杂种、西门塔尔与平凉类群杂种、秦川牛与平凉类群杂种)为研究对象,采用PCR-SSCP及DNA测序方法检测SCD1基因外显子5的多态性。结果表明,早胜牛及其杂交群体SCD1基因外显子5c.878CT位点发生了C/T的突变,检测到2种基因型(CC和CT)和2个等位基因(C和T),且5个类群均处于中度多态水平。相关性分析表明,早胜牛平凉类群及其余西门塔尔的杂交类群胴体品质和肉质性状在该基因c.878CT位点的CT和CC基因型之间差异不显著(P0.05)。因此,SCD1基因外显子5突变位点可作为早胜牛及其杂交群体选育、加强胴体和肉质性状遗传效应的分子标记。 相似文献
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鹅肥肝形成相关基因的研究进展 总被引：2，自引：2，他引：0
鹅肥肝与鲟鱼子酱、黑菌被西方人誉为世界三大美食。对于肥肝产业而言,加强对鹅遗传育种的研究,培育产肝鹅新品系有着重要的意义。作者依据肥肝形成机制,综述了近年来研究发现的影响肥肝形成的相关基因,包括主要参与脂肪合成的硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD-1)、脂蛋白脂酶(LPL)、脂肪酸合成酶(FAS)、肝X受体(LXRα)、脂肪酸长链延伸因子6(ELOVL-6)、固醇调节元件结合蛋-1c(SREBP-1c)、碳水化合物反应元件结合蛋白(CHREBP)基因,参与脂肪转运的脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)、长链酯酰辅酶A合成酶1(ACSL1)基因,以及参与脂肪氧化的过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)、胆固醇7a轻化酶(CYP7A1)基因等。 相似文献
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郏县红牛SREBP-1c基因84 bp缺失突变的检测及其对6个生长性状的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
旨在研究牛SREBP-1c基因内含子7区域84bp缺失的遗传多态性及其对生长性状的影响。本试验以中国地方品种郏县红牛共计441头个体为实验动物,通过DNA测序技术和琼脂糖凝胶电泳方法检测该区域缺失突变的多态性。结果发现,在该突变位点检测到2种基因型:WW和WD型,等位基因W和D频率分别为0.8651和0.1349。He、Ne和PIC值都很低,说明在本突变位点遗传多态性不够丰富。该突变位点处于Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05)。该位点的多态性与郏县红牛6个生长性状指标关联分析显示,郏县红牛WD基因型个体在12、18、24月龄的体质量和胸围显著高于WW基因型个体(P0.01或P0.05),基因型WD个体在18、24月龄的体斜长显著高于WW基因型个体(P0.05),基因型WD个体在18月龄的平均日增体质量显著高于WW基因型个体(P0.01)。初步认为WD型是提高黄牛体质量和体尺指标性状的有利基因型。本研究结果表明,黄牛SREBP-1c基因内含子7区域84bp缺失位点可作为郏县红牛生长性状的潜在分子育种标记,具有很大的研究价值。 相似文献
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《中国畜牧杂志》2015,(11)
CYP7A1是催化动物肝脏胆固醇转变成胆汁酸的限速酶。本研究采用PCR-SSCP法和DNA直接测序相结合筛查白羽番鸭CYP7A1基因多态性,分析其与肉质和血清生化指标的相关性。结果表明:在CYP7A1基因外显子2检测到沉默突变c.294.AG,产生3种基因型从、AG和GG,AG和A分别为优势基因型和优势等位基因,其频率分别为0.5517和0.6107;在外显子3检测到沉默突变c.759.TA,TT和T分别为优势基因型和优势等位基因,其频率分别为0.6552和0.7931;2个SNP均为中度多态位点,且基因型分布均未偏离Hardy-Weinberg平衡。关联分析显示,c.294.AG突变对肉质和血清生化指标没有产生显著影响;c.759.TA突变对血清总胆固醇、总蛋白和白蛋白有显著效应,A为低血清总胆固醇的有利等位基因,可能作为降低番鸭胆固醇的一个标记性辅助选择位点。 相似文献
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磷酸酪氨酸互作结构域1(phosphotyrosine interaction domain containing 1,PID1)基因是最近发现的与脂肪代谢相关的新基因.在不同动物的不同组织中均能检测到PID1基因的表达.PID1基因表达过量能促进前体脂肪细胞的增殖,影响肉质性状相关候选基因[如过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)和解偶联蛋白(UCP)基因]的表达.因此,深入探讨PID1基因在畜禽肉品质上的调控作用及其影响机制,将为改善畜禽肉品质提供新的思路.本文概述了PID1基因的发现和表达规律、PID1蛋白的结构、PID1基因与肉质性状候选基因的关系及其在畜禽肉质调控中的可能作用. 相似文献
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猪鸡肉质性状分子标记及主效基因的研究进展 总被引：8，自引：0，他引：8
本文回顾了近年来猪鸡肉质性状的分子遗传标记及主效基因的研究进展。研究结果表明 ,已发现了 6 0个影响肉质性状的QTLs,它们分别位于染色体 1,2 ,4 ,5 ,6 ,7,8,10 ,11,12 ,13,14 ,15 ,17,18和X ,其中 9个和 1个分别达到了 5 %和 1%基因组水平 ;影响肉质的主效基因达 2 0个左右 ,它们包括氟烷基因、糖原基因及影响肌肉含量、背膘厚和肌内脂肪含量等肉质性状的基因 ,其中氟烷基因和糖原基因的研究结果得到公认 ,其余基因的报道还有待进一步验证 相似文献