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1.
香蕉枯萎病菌RAPD分析及4号生理小种的快速检测 总被引：3，自引：0，他引：3
用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对采自广东、广西的香蕉和粉蕉上的30个香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)菌株和3个其它尖孢镰刀菌专化型的菌株进行比较及聚类分析。在遗传相似系数0.67时,可将供试菌株划分为3个RAPD群(RGs),其中香蕉枯萎病菌4号生理小种(FOC4)共15个菌株属于RGⅠ,1号生理小种(FOC1)共15个菌株属于RGⅡ,供试的其它尖孢镰刀菌专化型的3个菌株则属于RGⅢ。这说明香蕉枯萎病菌和供试3个其它专化型菌株与致病性间存在明显的相关性。1号生理小种内菌株间的遗传分化大于4号生理小种内菌株间的遗传分化。从90条RAPD随机引物中筛选出2条引物可产生4号生理小种的RAPD标记2个。将这2个RAPD标记电泳切胶回收、克隆及测序,并根据这2个特异片段序列设计SCAR上下游特异引物,通过对30个菌株的PCR扩增检验,其中一个RAPD标记成功地转化为SCAR标记,初步建立了以此为基础的4号生理小种快速检测技术,其检测灵敏度为2 ng新鲜菌丝。对采自不同地区的显症样品、吸芽、室内接种未显症的香蕉苗以及发病的香蕉植株不同部位进行检测,能够准确灵敏地鉴定出4号生理小种,从而为香蕉枯萎病菌的快速检测及防治奠定了基础。同时,快速检测结果发现,田间发病植株果柄的各部位及果实内并没有枯萎病菌的存在。 相似文献
2.
香蕉镰刀菌枯萎病拮抗放线菌的分离筛选及其抑制效果的初步评价 总被引：4，自引：0，他引：4
香蕉镰刀菌枯萎病是一种由尖孢镰刀菌古巴专化型Fusarium oxysporum f. sp. cubense侵染引起的维管束系统性病害。本试验对从海南省东方、八所、黄流、三亚和广东省湛江、徐闻、海安等香蕉种植地采集的根际土样进行拮抗放线菌的分离纯化,得到放线菌菌株139个。通过纸片扩散法,筛选出对香蕉枯萎病4号生理小种具有拮抗作用的菌株8个。进一步试验表明,其中4个菌株不仅对香蕉枯萎病生理小种4号的菌丝生长有良好稳定的抑制作用,且对另外14个不同专化型病原菌也有一定的抑制作用。另外,分别将这8株放线菌发酵上清液与香蕉枯萎病病原菌孢子悬浮液混合12h后,有6株放线菌发酵上清液对病原菌孢子萌发的抑制率超过85%。盆栽试验结果表明,2株放线菌对香蕉枯萎病防效达86%以上,极显著地高于恶霉灵药剂处理。 相似文献
3.
近年来,大蕉枯萎病在广东省东莞市发生严重,为了有效控制病害发生蔓延,生产上急需明确大蕉枯萎病的病原。本研究收集了我国华南地区的12株大蕉枯萎病病原菌及19株包括1号及4号生理小种的单孢菌株,以来源于澳大利亚的1号、2号、3号和亚热带4号生理小种以及4株非病原尖孢镰孢菌作对照,通过病原菌形态鉴定、致病性测定、4号小种(Foc 4)及热带4号小种(TR4)的分子特异检测、以及基于翻译延伸因子(TEF-1α)序列的系统发育分析,对大蕉枯萎病病原菌进行鉴定。同时,对我国华南地区不同来源的香蕉枯萎病病原菌的遗传发育关系及致病性分化情况进行了研究。结果表明:(1)引起大蕉枯萎病的病原菌主要是1号生理小种或者是与1号生理小种亲缘关系较近的一个新的系统发育谱系,该谱系可能为 1 号生理小种变异演化而来;(2)大蕉枯萎病病原菌对大蕉和粉蕉都有较强的致病力,但不能侵染香蕉;我国的1号小种存在一定的分化,其中有一个类群只能感染粉蕉,另一个类群既能感染粉蕉也能感染大蕉;(3)大蕉与粉蕉枯萎病的病原菌在致病性及遗传发育关系上都存在一定的交叉和分化。 相似文献
4.
甘蓝枯萎病菌生理小种传统鉴定方法费时费力,不能满足生产的要求,因此需要建立一种快速、可靠的分子检测技术。本研究在甘蓝枯萎病菌1号和2号生理小种基因组测序的基础上,通过比较基因组学方法筛选1、2号生理小种各自的特异基因片段并设计引物,并分别以10个甘蓝枯萎病菌1号生理小种菌株、2个2号生理小种菌株、7个尖孢镰刀菌其他专化型菌株及4个外围菌株DNA为模板进行常规PCR扩增,筛选出甘蓝枯萎病菌1号和2号生理小种特异性引物,同时引入尖孢镰刀菌通用引物W106R/W106S,建立起一步三重PCR检测甘蓝枯萎病菌1、2号生理小种的分子检测技术。结果表明,该分子检测技术实现了在一次PCR反应中快速、准确地同步检测出甘蓝枯萎病菌DNA、罹病甘蓝组织和土壤中的甘蓝枯萎病菌1号和2号生理小种,对检测甘蓝植株是否感染枯萎菌及甘蓝种植区土壤是否受到枯萎菌的污染有实用价值。 相似文献
5.
香蕉枯萎病菌热带4号生理小种(Fusarium oxysporum f. sp.cubense tropical race 4,Foc TR4)严重威胁世界香蕉产业的可持续发展，一些特殊功能的蛋白在其侵染过程中起重要作用。我们分析Foc TR4接种巴西蕉后的转录组数据发现M35金属蛋白酶(metalloprotease 35)同源基因FocM35＿2在病原菌侵染初期受诱导显著上调表达，经同源重组法敲除该基因，突变体致病力显著下降，菌丝生长速率降低，产孢量略微减少，回补突变体则可以恢复其致病力和生长发育；与野生型菌株相比较，突变体对外源氧胁迫、渗透压和细胞膜压力更敏感；在本氏烟草(Nicotiana benthamiana)中的瞬时表达结果显示该蛋白定位于质外体，并引起叶片产生超敏反应(HR,hypersensitive response);该蛋白的缺失还能够诱导寄主更高水平几丁质酶的活性。因此，FocM35＿2是促进Foc TR4侵染寄主的的重要致病因子。 相似文献
6.
7.
以ITS测序与SCAR分子标记相结合的香蕉病原菌FOC4分子检测方法,利用通用引物ITS1和ITS4对病原菌SF001的rDNA中ITS序列进行PCR扩增,获得560bp左右的特异条带。经Blast分析比对,确定该菌为FOC。再利用FOC4的特异引物PCL/PDL对基因组上的特征序列扩增区域(SCAR)进行PCR扩增,获得677bp的特有序列,鉴定菌株SF001是尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种。经过致病性测试,菌株SF001表现出典型4号生理小种的病理特征。 相似文献
8.
Fusarium oxysporum f.sp. vasinfectum(Fov)已报道有8个生理小种和一个澳大利亚生理型,在我国只报道有3、7、8号小种。前期研究发现,我国还有一个与3、7、8号小种具有较大遗传差异的Fov新生理型。本研究通过对3、7、8号小种和新生理型菌株的翻译延伸因子(EF-1α)基因序列比对分析,发现该新生理型菌株具有特异性碱基序列。根据这些特异性碱基序列,设计了一对针对新生理型菌株的特异性引物,并证明该引物可以特异性检测Fov新生理型菌株。利用该引物对采自河北省主要植棉区的77株Fov菌株进行筛选,鉴定出2株潜在的新生理型菌株。从这2个Fov菌株中克隆出EF-1α和β-tubulin基因序列,通过构建系统发育树,证明这2个Fov菌株为新生理型菌株,而且与澳大利亚生理型菌株具有较近的亲缘关系。本研究建立的分子检测方法可用于棉花枯萎病菌新生理型菌株的鉴定。 相似文献
9.
香蕉枯萎病菌Fusarium oxysporum f. sp. cubense和细菌性软腐病菌Dickeya zeae的复合侵染为害给香蕉产业发展带来严重挑战, 有必要建立相关病害的多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction, multiplex PCR)检测技术。本文基于尖孢镰刀菌古巴专化型1号生理小种(F. oxysporum f. sp. cubense race 1, FOC1)基因组contig 438区间(35 631-37 693 bp)(GenBank: AMGP01000438.1)和4号生理小种(F. oxysporum f. sp. cubense race 4, FOC4)基因组contig 195区间(4 028-6 126 bp)(GenBank: AMGQ01000195.1)存在160 bp插入序列差异设计特异扩增引物FOC-F/-R, 同时以香蕉细菌性软腐病菌D. zeae的促旋酶B 亚单位基因(the subunit B of gyrase gene)(GenBank: JQ284039)序列设计特异扩增引物gyrB-F/-R。多重PCR检测结果显示:本技术可在一次PCR扩增反应内同时检测香蕉枯萎病菌1号、4号生理小种和细菌性软腐病菌; 多重PCR的灵敏度结果表明:检测香蕉枯萎病菌的DNA浓度最低限为0.1 ng/μL, 细菌性软腐病菌的灵敏度为10 3cfu/mL;检测结果稳定可靠。因此, 本研究建立的多重PCR检测方法可有效应用于检测香蕉发病组织中的香蕉枯萎病菌和细菌性软腐病菌, 也可用于香蕉种苗和田间土壤带病菌的监测, 为香蕉种植保驾护航。 相似文献
10.
香蕉枯萎病拮抗菌筛选及其抑菌活性 总被引：2，自引：0，他引：2
为获得对香蕉枯萎病菌具有稳定拮抗作用的微生物菌株,分别从海南省临高县南宝镇新营农场、皇桐村及美台镇美梅村采集感病土壤和健康土壤进行微生物分离,并以香蕉枯萎病菌4号小种(Fusarium oxysporum f.sp.cubense Race 4)等9种病原菌为靶标菌株,采用平板对峙法和含药介质法对拮抗菌的抑菌活性进行评价,同时根据形态特征、培养特征及生理生化特征和16S rDNA序列分析对其进行鉴定。结果表明:6个土壤样品中共分离得到具有拮抗作用的细菌93株和放线菌133株,其中T3-G-59菌株对9种病原菌具有广谱抗性,菌丝生长抑制率为43.58%~86.43%,孢子萌发抑制率为42.22%~81.11%,其中对香蕉枯萎病菌4号小种的菌丝生长和孢子萌发抑制率分别为86.43%和81.00%,经鉴定该菌株为多产色链霉菌Streptomyces polychromogenes,表明该多产色链霉菌T3-G-59菌株具有应用于香蕉枯萎病生物防治的潜力。 相似文献
11.
美国出境旅游市场特征及旅华美国市场拓展对策研究 总被引：1，自引：0，他引：1
美国是世界出游大国,同时也是我国第一大远程客源国和第四大入境旅游客源国,在我国入境旅游市场中占据着举足轻重的地位。文中运用2001-2010年美国出境旅游市场统计数据,采用季节变动指数、地理集中指数和首位度、位序-规模分布等理论,通过对美国出境旅游市场规模变化、季节分布、全球流向分布及在中国和亚洲其他国家之间分配特征的研究,提出拓展旅华美国市场的对策。研究发现美国出境旅游市场具有以下特征:1)出境旅游市场规模大且持续增长,但是受国内和国际危机事件影响显著;出境旅游旺季在3月、6月、7月和12月,最主要的出境旅游目的地是墨西哥、加拿大和欧洲,亚洲虽非美国人的主要旅游目的地,但其占美国出境市场的份额逐年上升;2)美国人在亚洲旅游的主要目的地包括日本、中国大陆、印度、中国香港、韩国、中国台湾等6个国家和地区;3)中国大陆对美国出境市场的旅游吸引力持续上升,日本对美国市场的垄断地位开始动摇,但仍是中国大陆最大的竞争对手。最后,根据研究结论提出旅华美国市场的拓展对策。 相似文献
12.
以眼子菜为受体,研究大叶芥菜水浸提液对眼子菜的化感作用。结果显示,浓度分别为0.500 0、0.250 0、0.125 0、0.085 0、0.062 5、0.050 0、0.033 5、0.008 5 g/m L的大叶芥菜水浸提液对眼子菜种子的萌发抑制效应以0.500 0 g/m L最高,平均抑制率为100.00%;低浓度(0.008 5 g/m L)处理对眼子菜种子萌发的抑制率为13.89%。此外研究发现,大叶芥菜水浸提液对眼子菜叶片数量及鲜质量积累有明显的抑制作用,对鲜质量积累的平均抑制率分别为100.00%、74.68%、65.19%、55.70%、47.79%、46.20%、35.13%和8.23%;对眼子菜种子萌发和鲜质量的化感综合效应(SE)分别为100.00%、74.84%、57.59%、47.29%、43.34%、36.99%、34.23%和11.06%。结果表明,大叶芥菜对眼子菜有很强的化感潜力,能为眼子菜的绿色防控提供理论依据。 相似文献
13.
观察球型芽孢杆菌2362和苏云金杆菌H -14杀灭蚊虫幼虫效果。方法 :小型孳生地现场试验。结果 :现场实验结果显示 ,Bs.2362按10mL/m2 施药 ,第3d、7d校正密度下降率分别为84.44%和92.86% ;水沟中按20mL/m2施药 ,第3d、7d校正密度下降率分别为99.68%和100%。Bt.H -14按10mL/m2施药 ,第3d、7d校正密度下降率分别为83.33%和61.55% ;水池中按20mL/m2 施药 ,第3d、7d校正密度下降率均为100%。 相似文献
14.
Twenty-eight strains of Pseudomonas syringae pv. actinidiae isolated in 1984, 1987 and 1988 from kiwifruit orchards in Japan were tested for their resistance to copper sulfate. All strains
isolated in 1984 were copper sensitive with a minimum inhibitory concentration (MIC) of cupric sulfate of 0.75 mM. However,
some strains isolated in 1987 and 1988 were resistant, with the MIC ranging from 2.25 to 3.0 mM. All copper-resistant strains
contained at least one of two plasmids, pPaCul (about 70.5 kb) or pPaCu2 (about 280 kb), or both. In a copper-resistant strain
Pa429, the location of the copper-resistance gene(s) was examined by insertional inactivation with Tn5. The MIC of copper sulfate in the copper-sensitive mutant obtained by Tn5 tagging decreased from 2.75 to 0.75 mM. The 14.5 kb BamHI fragment, designated pPaCuB14, containing the same locus mutagenized with Tn5 was cloned from pPaCu1. However, pPaCuB14 did not confer copper resistance in the transformant of copper-sensitive strain
Pa21R, suggesting that this clone did not contain a full set of copper-resistance gene(s). Then a cosmid library of pPaCu1
was constructed and six cosmid clones hybridized with pPaCuB14 were selected. One of the six cosmids, designated pPaCuC1,
conferred a near wild-type level of copper resistance in the transformant of the copper-sensitive strain. pPaCuC1 had a homologous
region that hybridized with all of the PCR-amplifled fragments of copA, copB, copR, and copS genes of P. syringae pv. tomato. DNA sequence analysis of the homologous region revealed the existence of four open reading frames (ORF A, B, R and S) oriented
in the same direction. The predicted amino acid sequences of ORF A, B, R and S had 80, 70, 97 and 95% identity with CopA,
B, R and S of P. syringae pv. tomato, respectively.
Received 5 July 2001/ Accepted in revised form 27 September 2001 相似文献
15.
菜豆种子普通细菌性疫病菌检测 总被引：2，自引：0，他引：2
由Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli和Xanthomonas fuscans subsp. fuscans引起的菜豆普通细菌性疫病是严重影响菜豆生产的限制因子之一,可造成严重的产量和品种损失。染菌种子是病原菌传播的主要途径。本研究对5个菜豆主要产区的60份菜豆种子样品进行普通细菌性疫病菌检测。在MT选择性培养基上有36份种子样品浸提液检测到目标病原菌, 种子样品带菌量为2.49×102~5.20×107 CFU/粒。选择36个分离物接种感病品种“英国红”植株,所有分离物均引起接种植株发病。特异PCR检测结果表明,有20个分离物为X. fuscans subsp. fuscans,16个分离物为X. axonopodis pv. phaseoli。试验结果表明,我国一些菜豆主产区商业种植和研究用种子多数污染普通细菌性疫病菌,建议建立无菌种子生产区和加强种子管理,以有效控制病害发生。 相似文献
16.
lori INOUE Toshiaki OHARA Fumio NAMIKI Takashi TSUGE 《Journal of General Plant Pathology》2001,67(3):191-199
Restriction enzyme-mediated integration (REMI) mutagenesis was used to isolate mutants of Fusarium oxysporum f. sp. melonis impaired in pathogenicity. The race 2 strain Mel02010 was transformed with linearized pSH75, conferring resistance to hygromycin
B, with or without the enzyme used to linearize the plasmid. Addition of restriction enzymes did not affect the transformation
frequency. A total of 2929 REMI transformants were tested for pathogenicity to three melon cultivars, Amus, Ogon 9 and Ohi.
The race 2 strains are pathogenic to Amus and Ogon 9, but not to Ohi. Of 43 transformants with reduced pathogenicity on susceptible
melon cultivars, 12 mutants were examined in detail for pathogenicity, vegetative growth and integrative mode of pSH75. The
levels of pathogenicity varied among these mutants. Two mutants (B48 and B137) almost completely lost pathogenicity to both
susceptible cultivars, and the others had reduced pathogenicity. Mutants B48, B241, B886 and X36 were also impaired in vegetative
growth. Mutant B809 was a biotin auxotroph. By DNA gel blot analysis, nine mutants were found to contain a single copy of
the transformation vector. These mutants may thus be useful in isolating genes involved in pathogenicity.
Received 22 December 2000/ Accepted in revised form 16 April 2001 相似文献
17.
香蕉枯萎病菌生理分化研究 总被引：6，自引：0，他引：6
本研究对香蕉枯萎病菌菌株FOCAAA9（来自香蕉）和FOCABB1（来自粉蕉）进行培养试验和接种试验；在含粉蕉和香蕉组织漫提液的培养基上2个菌株的培养性状、菌丝生长速度、孢子形态、大小型孢子比率和产孢量显示出差异；接种结果FOCAAA9能侵染香蕉（Musa AAA）品种巴西蕉、红香蕉和台蕉引起枯萎病，而FOCABB1对3个香蕉品种无致病性。研究结果表明侵染香蕉和粉蕉的古巴尖镰孢[Fusarium oxysporum f．sp．cubeilse（E．F．Smith）Snyder]存在生理分化现象。 相似文献
18.
Fumio NAMIKI Kanji SHIMIZU Kyoko SATOH Tetsuo HIRABAYASHI Kazufumi NISHI Tsuruo KAYAMURA Takashi TSUGE 《Journal of General Plant Pathology》2000,66(1):12-17
In 1994, Fusarium wilt of melon cultivars which are resistant to races 0 and 2 of Fusarium oxysporum f. sp. melonis was observed in southern area of the Lake Biwa region, Shiga prefecture. In commercial fields, mature plants of cv. Amus
which were grafted onto cv. Enken Daigi 2, and of cv. FR Amus showed yellowing, wilting and finally death before harvesting
of fruits. Diseased plants had vascular and root discolorations, and their stem sections yielded typical colonies of F. oxysporum. When the Shiga strains were tested for their pathogenicity to 12 species of cucurbits, they caused wilts only on melon.
Using race differential cultivars of melon, the Shiga strains were classified as race 1 of F. oxysporum f. sp. melonis, which has not been reported in Japan. To further characterize their pathogenicity, the strains were used to inoculate 46
additional cultivars of melon, oriental melon and oriental pickling melon. All the race 1 strains were pathogenic to the cultivars
tested, and their host range was apparently different from those of strains belonging to other races (races 0, 2 and 1,2y).
DNA fingerprinting with a repetitive DNA sequence, FOLR3, differentiated race 1 strains from strains of races 0 and 2, but
not from race 1,2y strains.
Received 2 July 1999/ Accepted in revised form 30 September 1999 相似文献
19.
历史时期(着重近4kaB.P.以来)南疆地区气候环境与人地关系演化的初步研究 总被引：2，自引：0，他引：2
南疆地区近四千年来气候与环境演化的研究表明 ,本地区气候环境的干旱状况持续未变 ,但期间仍有若干次相对凉湿与暖干旱时期的波动 ,且揭示出 3 .0 ka B.P.、2 .0 ka B.P.、1.5 ka B.P.、1.0 ka B.P.、0 .2 ka B.P.五个气候突变转干时间界线。本研究揭示了近四千年来本地区持续干旱化的特征 ,并有后期加剧的趋势 ,并指出历史时期南疆地区若干人文事件的发生如近两千年以来丝绸之路的兴衰、南疆古城镇的废弃等与气候环境演化之间存在着良好的准对应关系 ,表明气候环境的自然演化是影响人地关系类型与内容的重要因素之一。 相似文献
20.
用小麦离体叶段法,设置22、23、24、25和26℃共5个温度处理,对2009年采自四川、北京、甘肃、河南、河北、陕西和湖北七省（市）的小麦白粉菌标样分离获得的129个单孢堆菌株对温度的敏感性进行了测定。结果表明,供试的129个菌株平均ET50为22.49℃,其中ET50最高为24.48℃,最低为19.88℃,供试菌株中40.52%的ET50介于23℃和24℃之间,占参试菌株的近一半,7.63%的供试菌株ET50≥24℃。不同省（市）的病菌群体对温度的敏感性存在一定差异,且病菌群体对温度的敏感性差异与经纬度存在显著或极显著的负相关关系。研究结果获得了温度对此病害的终止阈值平均为26.65℃,且对温度相对不敏感菌株在较高温度下的潜育期较短、病害的严重度较高。不同敏感性菌株的频率分布结果表明,自然环境中病菌群体已受到温度的选择压力。 相似文献