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胶原酶二步灌流法获取原代大鼠肝细胞,用不同浓度的速眠新和保定宁处理,Western blot法测定肝细胞中细胞色素酶P450 3A1(CYP3A1)和细胞色素酶P4502E1(CYP 2E1)的表达水平.结果表明:通过胶原酶灌流法,每只大鼠可获得2～4×108个肝细胞,成活率约为95%.用速眠新、保定宁处理后,肝细胞CYP3A1和CYP2E1的表达随速眠新、保定宁浓度的增加和处理时间的延长而呈升高的趋势.原代大鼠肝细胞可用于速眠新药物代谢分子机制的研究,为其临床上合理地应用提供了理论依据. 相似文献
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【目的】腹脂沉积是目前家禽养殖过程中的一个普遍现象。与哺乳动物不同,家禽的脂质代谢主要发生在肝脏,前人很多研究发现叶酸和IGF2均参与调控动物的脂质代谢,因此,试验旨在建立鸡原代肝细胞培养条件,并研究叶酸对鸡原代肝细胞脂质代谢相关基因表达的影响,为体外探究叶酸调控家禽脂质代谢机制提供依据。【方法】采用胶原酶消化配合鸡淋巴细胞分离液纯化法分离得到鸡原代肝细胞,用高碘酸希夫氏染色方法进行肝细胞鉴定;同时分离得到的肝细胞用正常培养基培养36 h后,更换含不同叶酸浓度的培养基(0,1,5,10,15,和20 mg·L~(-1)),每个叶酸浓度6个重复,处理12 h后收集上清液,并收集细胞提取总RNA,用RT-q PCR法检测基因相对表达量,MTT法检测细胞增殖,商业试剂盒方法检测上清液中LDH含量。并分析基因表达之间的相关性以及叶酸剂量与基因表达之间的回归关系。【结果】采用胶原酶消化配合鸡淋巴细胞分离液纯化法可以获得分离效果好且纯度高的鸡肝细胞;不同剂量的叶酸没有影响肝细胞培养液中的LDH活性(P0.05),也没有对肝细胞的增殖产生影响(P0.05);与1 mg·L~(-1)剂量的叶酸对照组相比,10、15和20 mg·L~(-1)的叶酸显著降低了肝细胞IGF2以及与脂质合成代谢有关的ACC和FAS基因的表达(P0.05),但叶酸并没有对鸡肝细胞中与脂质分解代谢有关的CPT1和PPARα基因的表达产生影响(P0.05);并且鸡肝细胞中ACC和FAS基因的表达与IGF2存在一定的正相关(P0.05);除此之外,鸡肝细胞IGF2,FAS和ACC的表达与叶酸剂量也存在着线性和二次曲线的回归关系(P0.05)。【结论】叶酸的添加可降低鸡原代肝细胞中与脂肪酸合成相关基因的表达,并且FAS和ACC基因的表达可能与IGF2具有正相关关系;本试验中叶酸的最适剂量为15 mg·L~(-1)。 相似文献
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成年鸡肝细胞的分离与原代培养 总被引：2，自引：0，他引：2
以8~10周龄的雄性黄羽鸡为对象,比较了原位两步胶原酶灌流法、改良的原位两步灌流法及原位一步灌流结合组织块消化法对成年鸡肝细胞的分离效果,同时比较了不同基础培养液对成年鸡肝细胞体外培养的影响。结果表明,采用改良的原位两步灌流法可以获得分离效果很好,均匀一致且活率达90%以上的肝细胞;以Williams’medium E为基础培养液,以1×105个/cm2密度接种,4 h后肝细胞贴壁,随后在含φ=7%新生牛血清的培养液中培养24 h后,肝上皮细胞呈现典型的多角形,核圆透亮,聚集呈岛屿状生长,48 h后增殖旺盛,96 h后基本铺满培养皿底部,出现胆小管样结构,并可维持存活13 d以上。本试验为进一步建立成年鸡肝细胞无血清培养体系,体外研究其功能奠定了基础。 相似文献
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《西南农业学报》2017,(1)
为了研究中药泽泻提取物对油酸诱导建鲤脂肪肝变性细胞的保护作用,本实验以0.4 mmol·L-1油酸来构建建鲤原代脂肪肝细胞损伤模型,然后用不同浓度的泽泻提取物处理肝细胞24和48 h后,分别收集细胞和细胞培养液,然后测定谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、碱性磷酸酶(AKP)、胆碱酯酶(CHE)、细胞色素酶P4501A1(CYP1A1)和细胞色素酶P4502E1(CYP2E1)的含量等生化指标以及CYP1A的蛋白表达情况。结果显示,0.4 mmol·L-1的油酸与原代肝细胞共培养48 h可以显著提高肝细胞培养上清中GPT、GOT、TG、TC、AKP、CHE、LDH、CYP1A1和CYP2E1的含量(P0.01或者P0.05),可以诱导肝细胞中CYP1A的蛋白表达。将不同浓度的泽泻提取物(0、1、5、10、20、50μg·m L-1)与脂肪肝细胞共培养24~48 h发现,泽泻提取物能不同程度抑制油酸诱导的GOT、GPT、TG、TC、LDH、AKP、CHE水平和CYP1A1、CYP2 E1含量的升高(P0.01或者P0.05),不同程度降低肝细胞中CYP1 A蛋白表达,以作用时间48 h效果较好。研究证实了泽泻提取物对油酸诱导的鱼类脂肪肝细胞损伤具有保护作用,而泽泻提取物作为鱼类脂肪肝的防治药物还需要进一步的在体研究。 相似文献
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《浙江农业学报》2015,(9)
研究旨在分析谷氨酰胺(Gln)对基础状态乳腺上皮细胞生长、增殖及热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。取对数生长期的奶牛乳腺上皮细胞用于试验,细胞在含有不同浓度(0,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0和16.0mmol·L-1)Gln的DMEM培养液中培养24 h,收取细胞及培养液;细胞在含8 mmol·L-1Gln的DMEM培养液中培养不同时间(0,3,6,12,24,48,72 h)后,收取细胞及细胞培养液。采用MTT法检测细胞存活率,比色法检测LDH活性,SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测细胞内热休克转录因子1(HSF-1)和HSP70的表达水平。结果显示:Gln能促进奶牛乳腺上皮细胞生长增殖,Gln浓度为2.0 mmol·L-1时细胞存活率最高,4.0~8.0mmol·L-1时仍维持较高水平;细胞内HSP70与HSF-1的表达趋势一致,8.0 mmol·L-1的Gln诱导24 h,二者表达量均达峰值,分别为细胞活性最佳剂量2.0 mmol·L-1表达量的8.49倍(P0.01)和5.90倍(P0.01),表明Gln能促进奶牛乳腺上皮细胞的生长、增殖,并通过启动HSF-1 mRNA的转录活性诱导基础状态乳腺上皮细胞高表达HSP70 mRNA。 相似文献
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《南京农业大学学报》2017,(3)
[目的]本文旨在研究(-)-羟基柠檬酸[(-)-HCA]对鸡胚原代肝细胞脂滴沉积的影响及其机制。[方法]选用含(-)-HCA的培养液孵育鸡胚原代肝细胞后,油红染色法检测鸡胚原代肝细胞中脂滴的数量和总面积;试剂盒法检测鸡胚原代肝细胞中甘油三酯、葡萄糖含量及糖代谢、呼吸链关键酶活性。[结果](-)-HCA处理显著降低鸡胚原代肝细胞中甘油三酯含量、脂滴数量和总面积,但对细胞活力和死亡率无显著影响。(-)-HCA处理提高了鸡胚原代肝细胞中葡萄糖消耗量,显著降低了柠檬酸裂解酶活性和细胞质中乙酰辅酶A含量。(-)-HCA处理显著提高了鸡胚原代肝细胞中葡萄糖激酶、磷酸果糖激酶1、丙酮酸激酶、丙酮酸脱氢酶(E1)、乌头酸酶、琥珀酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、柠檬酸合酶、NADH脱氢酶和ATP合酶活性。[结论](-)-HCA通过抑制柠檬酸裂解酶的活性减少细胞质中乙酰辅酶A的供给,并通过增强糖代谢和呼吸链中关键酶活性而加速能量代谢,最终抑制了鸡胚原代肝细胞中脂滴的沉积。 相似文献
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[目的]本试验旨在揭示胆碱对热应激诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡的抑制作用.[方法]奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T细胞)于含10％胎牛血清的DMEM培养基中进行体外培养,将细胞分为对照组、胆碱组(100μmol·L-1)、热应激组(42℃,2 h)、热应激+胆碱组.采用CCK-8法分析添加胆碱对MAC-T细胞的药物毒性及细... 相似文献
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[目的]探究鸭原代肝细胞脂质含量与碳水化合物反应元件结合蛋白基因(ChREBP)表达的关联性,为深入研究ChREBP基因对畜禽脂质代谢的遗传调控机制提供参考依据.[方法]采用Ⅳ型胶原酶消化法分离孵化21 d的鸭胚原代肝细胞,以DMEM高糖培养基进行培养.利用RT-PCR扩增鸭ChREBP基因编码区(CDS)序列,构建携带His标签的真核表达载体pEGFP-N3-ChREBP-His,通过脂质体法分别转染鸭胚原代肝细胞和人前列腺癌细胞(PC3);采用His标签检测试剂盒检测ChREBP基因的表达量,以脂质指标测定试剂盒测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的含量,并分析鸭胚原代肝细胞和PC3细胞中ChREBP基因表达与脂质指标含量的相关性.[结果]以构建的真核表达载体pEGFP-N3-ChREBP-His转染鸭原代肝细胞和PC3细胞均能发出绿色荧光,表明携带His标签的ChREBP基因能在鸭原代肝细胞和PC3细胞中表达.ChREBP基因表达量与鸭原代肝细胞和PC3细胞中的TG、TC和HDL含量均呈极显著正相关(P<0.01,下同),与LDL含量呈极显著负相关.[结论]以构建的真核表达载体pEGFP-N3-ChREBP-His转染鸭原代肝细胞和PC3细胞后均能发出绿色荧光,说明ChREBP基因表达对鸭原代肝细胞和PC3细胞中的脂质代谢作用机理相似,可促进细胞脂质累积. 相似文献
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[目的]对水貂附红细胞体进行体外培养试验。[方法]在 RPMI-1640、DMEM、M-199和 HL培养液中添加30%的新生牛血清或水貂血清,在37℃、5% CO2条件下体外培养水貂附红细胞体,每12 h更换1次培养液,补充适量健康水貂红细胞,并进行传代培养。[结果]RPMI-1640和 HL培养液中附红细胞体的感染率和感染强度高于 DMEM和 M-199培养液,在RPMI-1640和 HL培养液中添加30%水貂血清附红细胞体的感染率和感染强度高于添加30%新生牛血清,且 RPMI-1640略高于HL培养液,培养12 h后获得了80%以上的感染率,且体外传代可连续培养23代。[结论]该研究为筛选有效防治水貂附红细胞体的药物及制备诊断抗原与研制疫苗提供了有效的途径。 相似文献
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王永生 《金陵科技学院学报》1996,(2)
养好肉仔鸡的关键是选择质量可靠的品种苗雏，喂以全价营养饲料，特别要加强雏鸡阶段的饲养管理，如温度、饮水等，按照科学的免疫程序进行免疫，做好肉仔鸡常见病的防制。 相似文献
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鸡Mx基因全长cDNA序列的克隆及分析 总被引：2，自引：0，他引：2
以Poly(I)-Poly(C)诱导鸡成纤维细胞Mx基因的表达,提取总RNA,RT-PCR扩增出全长Mx cDNA,扩增产物克隆入pMD19-T Simple载体中进行序列测定。结果表明:与GenBank公布的鸡Mx cDNA序列相比,其同源性达99.9%,为进一步研究鸡Mx基因的抗病毒活性和作用机理奠定了基础。 相似文献
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安徽省正阳关鸡场鸡球虫感染情况调查 总被引：4，自引：0，他引：4
对安徽省正阳关鸡场200个粪样采用饱和白糖溶液漂浮法进行鸡球虫感染情况的调查,结果表明:肉鸡球虫感染率为46.1%(83/180),而肉种鸡球虫感染率为70.0%(14/20).所获虫种经鉴定为堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)、和缓艾美耳球虫(E.mitis)、巨型艾美耳球虫(E.maxima)、柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)和毒害艾美耳球虫(E.necatrix).用SAS系统对调查数据进行统计分析,肉鸡球虫感染率存在年龄差异,相同日龄肉鸡毒害艾美耳球虫感染率显著低于其他几种球虫. 相似文献
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为研究地方土鸡和商品肉鸡的营养和风味品质差异，以平原散养的固始鸡、高原散养的红拉山鸡和商业笼养的科宝肉鸡为研究对象，对其腿肌的营养组分、氨基酸组成、脂肪酸组成、挥发性风味物质等指标进行系统比较分析。结果显示：不同品种鸡肉的营养品质和风味特征不尽相同。固始鸡肉的脂肪含量和单不饱和脂肪酸含量分别为16.13 g/100 g和55.59 mg/g，显著高于其他2个品种（P<0.05）；红拉山鸡肉的总糖含量为0.97 g/100 g（P<0.05），必需氨基酸和多不饱和脂肪酸含量居中，分别为29.97 g/100 g和35.91 mg/g；科宝肉鸡含有83.91 g/100 g蛋白质、31.94 g/100 g必需氨基酸、42.76 mg/g多不饱和脂肪酸，显著高于其他2个品种（P<0.05）；固始鸡、红拉山鸡和科宝肉鸡中低阈值的醛类物质相对含量分别为40.08%、49.09%和36.46%。结果表明，固始鸡和红拉山鸡具有较好的风味特性，而科宝肉鸡的营养品质较好。 相似文献
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仙居鸡和固始鸡胸肌肌苷酸含量的分析 总被引：6，自引：0，他引：6
采用高效液相技术，测定仙居鸡和固始鸡胸肌肌苷酸的含量。结果表明：①仙居鸡胸肌肌苷酸含量显著高于固始鸡；②仙居鸡和固始鸡胸肌肌苷酸含量性别间表现为公鸡低于母鸡，其中仙居鸡公、母鸡间差异显著；③胸肌肌苷酸含量与12周龄体重相关分析表明，仙居鸡和固始鸡胸肌肌苷酸含量与12周龄体重呈负相关，其中仙居鸡胸肌肌苷酸含量与体重相关达显著水平。 相似文献
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鸡白介素-6(ChIL-6)基因的克隆与序列分析 总被引：7，自引：1，他引：7
分别用鸡传染性法氏囊病病毒感染和用ConA免疫刺激健康鸡，无菌取处理鸡的脾脏，匀浆后用Tr-izol抽提细胞总RAN，应用随机引物反转录获得cDNA，设计引物，经PCR扩增获得鸡白介素-6（ChIL-6)基因，应用pGEM-T载体克隆该基因，经测序，表明其与Gene Bank中公布的唯一的一个ChIL-6基因为同源基因。 相似文献