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1.
将50只大鼠随机分为5组,分别注射0.2（T1）、0.6（T2）、1g/L（T3）pEGISI,100μg空载体pEGFP-N1（C1）和100μL生理盐水（C2）,以探讨在没有使用免疫佐剂的情况下,抑制素与GFP融合基因疫苗pEGISI免疫对大鼠卵巢和生殖激素的影响。研究结果,加强免疫能提高抗体P/N值,T3组在加强免疫期与对照组差异显著（P〈0.05）;加强免疫第2周时T3组抗体阳性鼠比例达40%,与T1和T2组差异均显著（P〈0.05）。T3组卵巢大小和卵泡数均显著高于对照组（P〈0.05）,但抗体阳性鼠大卵泡数与阴性鼠差异不显著（P〉0.05）。各剂量组促卵泡素和雌二醇均高于对照组,且在加强免疫第2周时T3组与对照组差异显著（P〈0.05）;各剂量组孕酮含量与对照组差异均不显著（P〉0.05）。结果表明,在没有使用免疫佐剂的前提下,抑制素pEGISI基因免疫可产生抗体,促进卵巢发育和FSH分泌。本试验条件下100μg是最佳免疫剂量。 相似文献
2.
将90只大鼠随机分为5组,分别注射10μg.100μL-1 pcISI(T1)、50μg.100μL-1 pcISI(T2)、100μg.100μL-1(T3)pcISI、100μg空载体pcMV-S(V)和100μL生理盐水(S),以探讨在不使用免疫佐剂的情况下,不同剂量的双拷贝抑制素pcISI基因免疫对大鼠卵泡发育、产仔和生殖激素的影响。结果表明,加强免疫能提高抗体P/N值,加强免疫后各剂量组平均抗体P/N值大于2,T3组抗体P/N值显著高于T1和T2组(P<0.05)。T3组成熟卵泡数显著高于对照组(P<0.05),且抗体阳性鼠成熟卵泡数比阴性鼠多12.45个(P<0.05)。除了T1组外,其他2个剂量组产仔数和胎盘数均高于对照组(P<0.05)。抗体阳性鼠胎盘数比阴性鼠多5.09个(P<0.05),产仔数比阴性鼠多5.39个(P<0.05)。抑制素pcISI基因免疫大鼠后促卵泡素(FSH)、雌二醇(E2)和孕酮(P4)含量均高于对照组,T3组的FSH含量与对照组差异显著(P<0.05),T3组的E2含量与对照组差异极显著(P<0.01),各剂量组P4含量与对照组差异均不显著(P>0.05)。这些结果说明,在没有免疫佐剂的前提下,双拷贝抑制素pcISI基因免疫可产生抗体,促进FSH分泌和卵泡发育,增加产仔数。本试验条件下100μg.100μL-1是最佳免疫剂量。 相似文献
3.
抑制素与乙肝表面抗原融合基因免疫对大鼠生殖能力的影响 总被引：1，自引：1，他引：1
90只大鼠随机分为5组(n=18),分别肌肉注射10、50、100μg抑制素与乙肝表面抗原融合基因表达质粒(pCIS)、50μg空载体(pcDNA3.1)和100μL生理盐水。20 d后加强免疫1次,对每组中的12只大鼠进行2次加强免疫。结果发现抑制素抗体P/N值随着免疫次数的增加而提高。100μg剂量组2次和3次免疫的成熟卵泡发育数分别比对照组多6.9和7.5个(P<0.05)。3次免疫后大鼠成熟卵泡发育数比2次免疫后显著提高(35.2±2.73 vs 31.0±0.92,P<0.05)。抑制素基因免疫组的胎盘数和窝产仔数高于对照组(P>0.05),抗体阳性鼠高于阴性鼠(P<0.05)。pCIS 3次免疫后抗体阳性鼠的抗体水平与成熟卵泡发育数的相关系数为0.45(P>0.05),与胎盘数的相关系数为0.77(P<0.05)。pCIS免疫大鼠动情期和产后血浆FSH水平高于对照组,抗体阳性鼠的血浆FSH水平高于阴性鼠,其中2次免疫后阳性组动情期FSH浓度极显著高于阴性组(P<0.01)。这些结果表明,抑制素基因免疫大鼠可促进大鼠的卵泡发育,提高血浆FSH水平,为抑制素基因免疫大动物提供了试验依据。 相似文献
4.
抑制素基因免疫对小鼠生殖的影响 总被引：32，自引：5，他引：27
用编码抑制素α（1－32）的基因与pcDNA3.1真核表达质粒进行重组，构建抑制素基因疫苗NH。将30只2周龄ICR小鼠随机分为3组（每组10只），试验Ⅰ，Ⅱ组分别经脂质体介导肌肉注射iINH15μg()0μL,25μg(100μL)，对照组注射免疫空载体pcDNA3.115μg(100μL)。首次免疫后间隔3周加强免疫1次。小经pINH基因免疫后，用ELISA可从血浆中检测到抑制素抗体，表明pINH可在活体肌细胞内表达，表达产物具有制素抗原性，能激活免疫系统产生抑制素抗体。抑制素抗体P／N＞2视为阳性，阳性率为30％（6／20）。抑制素抗体阳性小鼠与阴性小鼠的产仔数，初生重和窝重等没有显著差异（P＞0．05）。抗体阳性组首次免疫后，雌鼠血浆FSH浓度略有升高，经过加强免疫后显著升高（P＜0．05）。由此可以看出，抑制素基因免疫可以诱导产生抗抑制素抗体，并促进促卵泡素的分泌。 相似文献
5.
抑制素基因免疫的免疫反应性 总被引：9，自引：1，他引：9
通过应用抑制素真核表达质粒pcINH和抑制素融合表达质粒pCIS分别经肌肉注射免疫大鼠的2个系列试验，检测了免疫鼠抑制素抗体水平及抗体阳性鼠的比例。结果，抑制素质粒pcINH经脂质体介导免疫大鼠，50％（13／26）的个体产生了抑制素阳性抗体。40μg组产生的抗体水平最高；抑制素融合表达质粒pCIS免疫经盐酸普鲁卡因处理的大鼠，2次免疫获得了38.9％（23／54）的抗体阳性率。3次免疫获得55．6％（20／36）的抗体阳性率，100μg组产生的抗体水平最高；加强免疫可提高抗体的水平。但免疫剂量的增加并不一定能增加抗体阳性鼠的比例。 相似文献
6.
抑制素pCIS基因免疫对黄牛卵泡发育和生殖激素的影响 总被引：2，自引：1，他引：1
分别用O(C)、0.75(T1)、1.50(T2)、2.25(T3)和3.0(T4)nag·头'-1的抑制素pCIS基因疫苗免疫58头黄牛,以探讨抑制素pCIS基因免疫对卵泡发育和生殖激素的影响.结果表明,抑制素pCIS基因免疫组的大卵泡(d≥10 mm)数显著高于对照组(P<0.01),中卵泡(7 mm≤d<10 mm)数和小卵泡(4 mm≤d<7 mm)数与对照组均没有显著差异(P>0.05),T1组左右两侧成熟卵泡大小与对照组差异不显著(P>0.05),其它3组两侧成熟卵泡均显著大于对照组(P<0.05).抑制素pCIS基因免疫黄牛的促卵泡素(FSH)平均含量高于对照组,且在加强免疫阶段差异显著(P<0.05);加强免疫后雌二醇(E2)和孕酮(P4)含量均显著增加,且均与对照组差异显著(P<0.05).这些结果表明,抑制素pCIS基因免疫可促进FSH分泌,进而影响黄牛卵泡发育和成熟. 相似文献
7.
抑制素基因免疫对京白鸡产蛋性能的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
120只380 d京白鸡随机分为4组,分别腿部肌肉注射0、50、100、150 μg抑制素真核表达质粒pcISI,20 d后加强免疫1次.ELISA检测抗抑制素抗体水平,观察产蛋量,并进行鸡蛋品质测定.免疫4个月后全部捕杀,统计各级卵泡数.结果表明,抑制素基因加强免疫后抗体水平显著升高(P<0.05),3个剂量组间差异不显著(P>0.05).试验组全期产蛋量极显著高于对照组(P<0.01),大白泡和小白泡比对照组显著增多(P<0.05),优势卵泡、小黄泡和鸡蛋品质与对照组差异不显著(P>0.05).表明抑制素基因免疫京白鸡可产生抗抑制素抗体,并能提高京白鸡的产蛋性能. 相似文献
8.
为了研究抑制素α（INHα）主动和被动免疫对哈萨克羊生殖激素含量的影响，本试验在对抑制素α重组质粒表达菌株进行诱导表达的基础上，将经纯化、鉴定的抑制素α重组蛋白免疫接种新疆双峰骆驼，制备驼抗抑制素α多克隆抗体，并对其进行纯化，检测抗体效价，验证抗体的特异性。之后选择3~5岁、发情时间相近并处于间情期的45只成年哈萨克羊随机分为3组，分别作为抑制素α多克隆抗体免疫组（A组）、抑制素α重组蛋白免疫组（B组）及对照组（C组），每隔10 d连续进行3次加强免疫，应用ELISA法检测在绵羊繁殖活动中具有重要功能的5种生殖激素：促卵泡素（FSH）、促黄体素（LH）、孕酮素（P4）、雌激素（E2）、抑制素（INH），并检测血液生化指标。结果显示，IPTG的最佳诱导浓度是0.6 mmol/L，在4 h时诱导出产量较高的抑制素α包涵体蛋白，纯化后的抑制素α重组蛋白纯度较高，并具有较好的免疫原性，经进一步验证发现，制备的抑制素α抗体效价为1：512 000，该抗体可与抑制素α重组蛋白特异性结合。说明成功制备了具有免疫原性的抑制素α重组蛋白和高效价的驼抗抑制素α多克隆抗体。免疫后A组LH、P4含量和B组FSH、LH、P4、E2、INH含量与C组相比差异不显著（P>0.05），而A组FSH含量和E2含量显著高于C组（P<0.05），INH含量显著低于C组（P<0.05）。通过血液生化指标检测发现，抑制素α蛋白和抑制素α抗血清两种免疫制剂免疫后，试验动物均没有出现不良症状。说明两种抑制素α抗原均可对哈萨克羊血液生殖激素的分泌产生良好效果，相比之下抑制素α抗血清免疫效果更佳。 相似文献
9.
选择32只60日龄雌性性成熟大鼠分为4组，分别肌肉注射pcDNA-DPPISS-DINH（试验组1）50μg，poD—NA—DPPISS-DINH—mC3d3（试验组2）50μg，空载体pcDNA3．1（对照组1）50μg，生理盐水（对照组2）1mL。首次免疫20、40d后各组分别同剂量同样免疫程序加强免疫注射1次。结果发现，试验1和2组卵巢的重量都显著高于对照组1和2，但试验1和2组之间的差异不显著（P〉0．05）；试验2组卵巢成熟卵泡发育个数和FSH的浓度显著高于试验1组和对照1和2组（P〈0．05）；加强免疫第40天，试验1、2组的E1的浓度分别显著高于本试验组免疫前第0天，免疫后第20天的激素浓度；试验组与对照组在各个免疫试验时间LH的浓度在统计上差并不显著（P〉0．05）。结果证明，应用重组抑制素真核表达质粒pcDNA-DPPISS-DINH—mC3d3（试验组2）免疫动物可以促进大鼠卵泡的发育，可提高血浆FSH、E2水平，为抑制素基因免疫大动物提供了试验依据。 相似文献
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将构建的ｐＢＳＴ２～６工程菌质粒用限制性内切酶ＢａｍＨＩ／ＢｇｌⅡ酶切，经琼脂糖凝胶电泳和电洗脱，回收１４７ｂｐ的目的ＳＴ１基因。随之将该基因分别重组到能有效表达Ｋ９９菌毛抗原和ＬａｃＺ酶的ｐＧＫ９９之Ｋ９９基因ＢｇｌⅡ位点和ｐＵＣ１８的ＢａｍＨＩ位点中。通过ＳＴ１基因探针菌落原位杂交、特定酶切分析及ＤＮＡ序列分析，筛选并鉴定出了理想重组子，从而构建出了能分别表达ＳＴ１融合基因产物的工程菌株ｐＳＫ２１９和ｐＸＳＴ１。 相似文献
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基因枪转化技术无论在动物还是植物方面都产生了巨大的影响,因粒子介导的转基因方法简单、安全、高效,而越来越被人们所重视。研究结果表明,该转化技术不仅能够用于组织、细胞、器官,甚至可用于一些较难转染的靶目标,同时还可用于体内和体外信息的转换。目前手提式基因枪已广泛应用于皮肤、组织、各种细胞或内脏器官的转染,应用最广的领域是基因治疗,主要包括基因免疫和抑制肿瘤生长。近几年,基因枪技术发展迅速,应用范围越来越广,已经取得了丰硕的成果。作者主要叙述了基因枪转化的基本原理及近年来人们对基因枪转化技术条件的改进,同时就基因枪在动物转基因中的应用和一些主要的研究成果作了阐述,主要包括利用基因枪基因免疫、基因治疗、自杀基因治疗癌症、胚胎转基因、各种动物细胞和器官组织转基因等,并对基因枪技术在动物上应用的优势和不足进行了一些分析,最后展望了基因枪转化技术在动物中的应用前景。 相似文献
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根据绵羊、猪、小鼠和牛的Myostatin基因序列,设计引物,通过PCR方法扩增了山羊的Myostatin基因的3′臂、5′臂,其长度分别为1.4kb、4.5kb.将扩增的片段与T载体连接后进行部分序列测定,与已知发表的Myostatin序列进行同源性比较,同源性为100%.对目的片段与载体进行酶切后定向连接形成转基因结构,经序列测定后,证明其插入方向和位置完全正确,构建表达Neo、Tk基因的哺乳动物双标记转基因载体,并命名为ploxp-M . 相似文献
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试验旨在构建pET-28a-S-SEA融合表达质粒,并评价S-SEA蛋白的免疫原性。根据大肠杆菌密码子偏嗜性,对我国猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行毒株(GenBank:LT906620.1)的S基因与金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因(GenBank:MH053151.1)进行优化,通过柔性连接肽(GGGGS)连接后,克隆至表达载体pET-28a,得到pET-28a-S-SEA重组质粒,转化至宿主菌BL21(DE3)中诱导表达,经SDS-PAGE和Western Blot检测后,对最佳表达条件进行摸索。在此基础上,将亲和层析后的重组蛋白,免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠,对免疫小鼠的血清特异性抗体水平和淋巴细胞增殖指数进行检测。结果成功构建pET-28a-S-SEA质粒,且在大肠杆菌中获得高效表达;小鼠试验结果表明,纯化的S-SEA蛋白能够诱导小鼠产生特异性免疫反应,促进淋巴细胞增殖,具有良好的免疫原性,为进一步研究猪流行性腹泻亚单位疫苗提供帮助。 相似文献
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牛对氧磷酶1基因和对氧磷酶2基因原核表达载体的构建及其表达分析 总被引：1，自引：1，他引：0
为制备和纯化对氧磷酶(PON1和PON2)蛋白做准备，对牛的PON1和PON2基因进行克隆并在大肠杆菌中表达。从牛肝脏组织中用RT-PCR扩增PON1和PON2 cDNA的全长编码序列，连接到原核表达载体pET28a中，构建重组表达质粒并转化到大肠杆菌BL21（DE3）中，以IPTG诱导表达目的蛋白，SDS-PAGE分析表达情况。 结果表明，成功克隆了PON1和PON2两个基因的cDNA的全长编码序列，酶切及测序鉴定证明，获得含有目的基因片段的重组质粒，表达的牛的PON1和PON2融合蛋白以可溶性的形式存在。这为进一步制备和纯化PON1和PON2蛋白，以及探索其在家畜使用寿命中的研究和提高犊牛初生重的作用等方面提供依据。 相似文献
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酪氨酸酶(TYR)是合成黑色素的限速酶,其活性的高低直接影响着黑色素合成的种类和数量。本文综述了TYR基因结构及功能、表达调控以及该基因在物种上应用研究进展。 相似文献
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CAST基因研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
CAST(calpastatin)基因是钙蛋白酶水解系统成员之一。在一定浓度的钙离子作用下,钙蛋白酶系统主要作用于细胞骨架蛋白、蛋白激酶和磷酸酶,还参与细胞内的信号传递。CAST能促使蛋白质降解减少,导致肌肉增长,还可识别CAPN与钙结合引起的构象变化并与之特异性结合,从而保证钙蛋白酶对底物只进行特定部位的水解。因此,可以通过激活钙蛋白酶或降低钙蛋白酶抑制蛋白的活性来提高肌肉的嫩度,改善肉质。最近的研究表明,CAST基因多态性与家畜的眼肌厚度和眼肌面积存在关联,有望成为提高家畜肉用性能的候选基因。 相似文献