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平菇细菌性褐斑病是一种严重危害平菇生产的病害,早期监测和防治是关键。采用平菇细菌性褐斑病病原菌托拉斯假单胞杆菌（Pseudomonas tolaasii）毒素基因的特异性引物（Pt-1A）/（Pt-1D1）,通过扩增条件优化,建立了该菌的实时荧光定量PCR（Real-time fluorescence quantitative Polymerase Chain Reaction）检测及富集方法,并利用该方法完成了该菌在平菇表层的动态监测。试验结果表明,实时荧光定量PCR对托拉斯假单胞杆菌的检测范围为102 ~ 109 cfu ? mL-1,在经过选择性培养基富集后,检测灵敏度进一步提高了100倍。利用选择性培养基富集及荧光定量PCR检测方法,可在病害症状未显现之前检测到病原菌,为平菇细菌性褐斑病的流行监测和早期防治奠定了技术支持。 相似文献
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以番茄细菌性斑点病病原菌丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv. tomato,Pst)的致病相关基因HrpZ为靶序列,设计了特异性引物Pst3F/Pst3R,能从Pst基因组DNA中特异性扩增出大小为161 bp的目的片段。建立的Pst实时荧光定量PCR检测技术体系的检测灵敏度比普通PCR高1 000倍。利用实时荧光定量PCR检测体系,检测模拟带菌种子中Pst的带菌量,检测下限为4.21 cfu·g-1;检测人工接种叶片组织中Pst的带菌量,检测到1级发病叶片带菌量为4.15×102 cfu·g-1。对田间采集的63个番茄细菌性斑点病明显症状和疑似症状样本,分别进行了实时荧光定量PCR、普通PCR和病原菌分离检测,检测到54个样本中含有Pst,3种方法检测结果一致。结果表明,建立的Pst实时荧光定量PCR检测体系具有特异性强、灵敏度高的特点,可以快速准确地定量检测番茄种子和发病组织中Pst的含量,为番茄细菌性斑点病的早期预防和流行监测提供了有效的技术手段。 相似文献
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《中国果树》2021,(5)
根据GenBank数据库已登录序列设计了12对苹果坏死花叶病毒(apple necrotic mosaic virus,ApNMV)的检测引物,通过引物筛选和体系优化,建立了以ApN1-F3/R3为引物的ApNMV的TB Green染料法实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测技术。该技术标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率为97.3%,相关系数为0.997,灵敏度是常规PCR的100倍。采用q PCR方法对60份田间苹果样品进行检测,结果显示,常规PCR对ApNMV的检出率为51.7%,而qPCR的检出率为56.7%。该技术适用于田间样品的检测。 相似文献
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《果树学报》2016,(3)
【目的】建立葡萄炭疽病LAMP检测方法。【方法】在葡萄炭疽病菌ITS序列片段设计LAMP特异性引物,优化反应条件,建立葡萄炭疽病LAMP检测体系,并利用荧光显色剂(0.05 mmol·L-1钙黄绿素和0.5 mmol·L-1氯化锰混合液)实现检测结果的可视化;同时对该体系进行特异性和灵敏度的验证,对采集自5个地区的田间样品进行实测。【结果】除染病的待检样品有特异性反应,观察到亮绿色荧光信号外,其他供试菌株均无特异性扩增反应;对葡萄发病组织总DNA的检测灵敏分别是定量PCR和常规PCR的1/10和100倍,检测限达到了5×10-4mg·L-1;对来自福建等5个地区的样品进行实测,结果表明待检样品中有81.5%感染葡萄炭疽病菌,该检测结果与定量PCR的检测结果完全一致。【结论】本研究建立了一种基于荧光显色的可视化LAMP检测体系,该体系可用于葡萄炭疽病的田间样品检测。 相似文献
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根据番茄枯萎病病原菌尖孢镰刀菌番茄专化型(Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici,FOL)蛋白激酶基因序列,设计1对番茄枯萎病特异性引物209F/361R,构建番茄枯萎病菌的RT-PCR(real-time PCR)检测体系,并利用该体系定量检测盆栽番茄茎基部病原菌。RT-PCR结果表明该引物只对番茄枯萎病菌有唯一产物吸收峰,对其他供试菌株都未检到荧光信号。利用该引物建立的RT-PCR检测体系线性关系良好,灵敏度为5.76×103 copies·μL-1,是普通PCR的10倍。人工接种番茄枯萎病菌定植后7 d即可在茎基部检测到病原菌;田间采集的24个自然发病样本中有16个能够检测到番茄枯萎病菌。基于RT-PCR技术构建的番茄枯萎病菌快速检测方法检测速度快、灵敏度高、特异性强、重现性好,能够为该病的早期诊断和流行监测提供理论依据。 相似文献
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《中国南方果树》2021,(5)
为了建立黄龙病菌的重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification, RPA)快速检测体系,丰富柑桔黄龙病的高效简便检测方法,以黄龙病菌株psy62全基因组中的单拷贝tufB-secE-nusG-rplKAJL-rpoB基因簇序列和5拷贝核糖核苷酸还原酶β亚基基因(nrdB)序列设计并筛选特异性引物,经灵敏度比较和检测特异性验证,建立该病的RPA检测体系,并经PCR、RPA和实时荧光PCR对87份柑桔样品的黄龙病菌进行对比检测,验证RPA检测体系的适用性。结果表明,建立的黄龙病菌RPA检测方法能特异性检测柑桔黄龙病;灵敏度与实时荧光PCR相当,是PCR的100倍;扩增过程只需20 min,大幅提高检测效率;对田间疑似柑桔黄龙病的送检样品检测结果与实时荧光PCR一致,比PCR的检出率高。 相似文献
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采集新疆生产建设兵团第十二师农业科学研究所草莓育苗网室内典型疫霉病症状的发病草莓短缩茎,进行组织培养、病原菌分离及纯化,并进行病原菌形态学及分子生物学鉴定。结果表明:发病草莓短缩茎分离得到的培养物在PDA培养基上的形态正反面无差异,分离纯化获得P1菌株;致病性结果表明,P1菌株在接种病原物的健康草莓短缩茎部位产生了病原菌菌丝;利用通用引物ITS1和ITS4对P1菌株DNA进行PCR扩增,得到大小约800bp的条带,获得片段与Phytophthora cactorumstrainGL1、BT1、TARI20179菌株的ITS序列同源性均为100%;结合形态学和分子生物学鉴定结果,确定致病病原菌为恶疫霉菌(Phytophthora cactorum)。 相似文献
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利用实时荧光PCR 方法检测香蕉软腐细菌 总被引：1，自引：0，他引：1
由Dickeya spp.引起的香蕉细菌性软腐病是近年来在中国广东发生的一种严重危害香蕉的病
害,检测方法的建立和应用是防止病害传播和实时防治的重要手段。依据报道的Dickeya spp.通用引物,
建立了用于香蕉细菌性软腐病发病植株和带菌土壤检测的实时荧光PCR 方法。优化后的检测体系对香蕉
软腐细菌（XJ8-3-3）靶片段克隆质粒DNA 的检测灵敏度可达到2.4 × 10-5 ng · μL-1,对菌悬液的检测灵敏
度可达到4.0 × 102 cfu · mL-1,而常规PCR 对其检测的灵敏度为2.4 × 10-3 ng · μL-1 和4.0 × 104 cfu · mL-1,
实时荧光PCR 的灵敏度比常规PCR 高100 倍。利用实时荧光PCR 能够快速的检出香蕉细菌性软腐病发
病植株和带菌土壤中的病原菌量,对梯度稀释的菌悬液接种的带菌土壤检测结果表明,可检测到病菌DNA
最低含量为0.35 pg · L-1。该方法适用于对香蕉软腐病菌的检测和监控。 相似文献
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寡雄腐霉菌剂对辣椒疫病的防治及促生效应 总被引：5，自引：0，他引：5
利用自主分离的寡雄腐霉生防菌株(Pythium oligandrum CQ2010)制备固体菌剂(P.oligandrum agent,POA),通过培养、拮抗试验和田间试验,研究其对辣椒疫病的防治,以及对辣椒生长发育、产量和品质的影响。结果表明,P.oligandrum CQ2010能大量分泌纤维素酶、蛋白酶、β–1,3–葡聚糖酶和几丁质酶,前三者在固体培养基上的水解圈直径接近或超过菌落直径,POA提取液显著抑制辣椒疫霉菌菌丝生长,抑菌率处于化学药剂精甲霜锰锌和双炔酰菌胺之间。在辣椒田间疫病防治试验中,移栽时将POA基施于辣椒根系周围,显著降低辣椒疫霉病的发病率和病情指数,POA的防效和疗效分别为89.37%和61.19%,防效大于疗效。施用POA之后,辣椒开花期和结果期均比常规施肥提早6?9 d,植株生物量增加32.03%,氮、磷、钾吸收量分别提高35.74%、40.53%和53.23%,果实增产25.21%。此外,POA改善辣椒果实品质,提高可溶性蛋白、游离氨基酸、可溶性糖和维生素C含量,而硝酸盐含量无显著变化。结论:P.oligandrum CQ2010能分泌水解病原真菌细胞壁的酶类,其提取液可以抑制辣椒疫霉生长,田间施用能够降低辣椒疫病的发病率和病情指数,促进植株生长,增加养分吸收,提高产量品质。因此,POA有广阔的运用前景,适合大规模生产运用。 相似文献
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柑橘采后致病青霉的鉴定 总被引：2，自引：1，他引：2
青霉菌是柑橘类水果采后优势致病菌,也可使多种果蔬腐烂。目前,国内外大多数学者认为,引起柑橘采后腐烂的青霉菌为意大利青霉(Penicillium italicum Wehmer)与指状青霉(P.digitatum Sacc.),但也有人提出不同的看法。病原真菌的鉴定通常采用传统形态学的方法,存在一定的局限性。应用rDNA-ITS分子标记分析和传统真菌形态学鉴定相结合的方法,对从不同产地分离获得的能引起柑橘贮藏期间腐烂的8株青霉菌(L﹑Q﹑PL﹑PQ﹑CL﹑CQ﹑PTY-1﹑PTY-2)进行了鉴定。结果表明:引起柑橘采后腐烂的青霉菌除指状青霉(P.digitatum Sacc.)外,还有扩展青霉[P.expansum (Link) Thom],波兰青霉(P.polonicum Thom),黄青霉(P.chrysogenum Thom)等多种青霉。为柑橘采后致病青霉的快速鉴定及其病害的及早防治提供了有益的参考。 相似文献
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以10种瓜类蔬菜幼苗为材料,在其2片真叶展平时,分别以孢子浓度为2×103、2×104、2×105个.mL-1的辣椒疫霉菌游动孢子悬浮液进行了人工灌根接种和苗期抗病性鉴定。结果表明,不同瓜类蔬菜品种幼苗对辣椒疫霉菌的抗病性表现完全不同,其中早熟1号肉丝瓜和新秀丝瓜幼苗未感染辣椒疫霉菌;其余9种瓜类蔬菜幼苗随着接种辣椒疫霉菌游动孢子浓度的提高而抗病性降低,在接种辣椒疫霉菌游动孢子浓度为2×104个.mL-1时,蜜本南瓜和新广优节瓜幼苗抗病性较强,早优苦瓜和碧峰黄瓜中度抗病,特大新红宝西瓜、秀美青筋白瓜、银辉薄皮甜瓜、台优蒲瓜和晶莹1号西葫芦高度感病。 相似文献
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AIM: To investigate the effects of survivin inhibitor YM155 {4,9-dihydro-1-(2-methoxyethyl)-2-methyl-4,9-dioxo-3-(2-pyrazinylmethyl)-4,9-dihydro-1H-naphtho[2,3-d]imidazolium bromide} on the apoptosis, mitochondrial membrane potential (Δψm) and cytochrome C (Cyt C) of retinoblastoma Y79 cells, and to analyze the mitochondrial mechanisms of apoptosis.METHODS: Y79 cells were cultured in vitro and treated with YM155 at concentrations of 0, 0.5, 1, 2, 4 and 8 nmol/L. The cells in control group were treated without YM155. The proliferation of Y79 cells were measured by CCK-8 assay and bromodeoxyuridine (BrdU) labeling assay. Y79 cells were randomly divided into 4 groups:control group (with equal volume of RPMI-1640 nutrient medium), positive control group (10 nmol/L topotecan), low-dose (1 nmol/L) YM155 group and high-dose (2 nmol/L) YM155 group. The effects of YM155 on the apoptosis, the changes of Δψm, the mitochondrial distribution and the protein level of Cyt C in the Y79 cells were evaluated by flow cytometry with Annexin V-FITC/PI staining, JC-1 staining, immunofluorescence analysis and Western blot, respectively. RESULTS: Compared with control group, YM155 significantly inhibited the proliferation of Y79 cells and induced apoptosis (P<0.05). YM155 significantly reduced Δψm of the Y79 cells, promoted Cyt C which released from mitochondria to the cytosol and reduced the protein level of Cyt C in the mitochondria (P<0.05). CONCLUSION: YM155 inhibits Y79 cell proliferation and induces apoptosis, and the possible mechanisms may be involved in the mitochondrium-mediated apoptotic pathway. 相似文献
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O. Wally A. El Hadrami A.H. Khadhair L.R. Adam T. Shinners-Carnelley B. Elliott F. Daayf 《Scientia Horticulturae》2008
During the summer of 2001 and 2002, 850 and 865 carrot plants and 926 and 2584 leafhoppers associated with aster yellow (AY)-type disease were collected from five fields in Manitoba, Canada. DNA was extracted from 999 individual leafhoppers and 381 leaf tissues from both apparently healthy and AY-like infected carrot plants. All DNA samples were examined by PCR for the presence of phytoplasmas using three universal primer pairs P1/P6, P1/P7 and R16F2n/R2 derived from phytoplasma rDNA sequences. DNA amplification with these three primer pairs generated the expected amplification products of 1.7, 1.5 and 1.2 kb, respectively. Diluted PCR products obtained using universal primer pair P1/P6 were nested with R16F2n/R16R2n. The latter set of primers amplified DNA samples from 92 carrot plants and 83 leafhopper samples. In order to assess the diversity among insect and plant phytoplasmas, nested PCR products from all 92 carrot and 83 leafhopper samples were subjected to RFLP analysis using restriction endonucleases KpnI, MseI, and HhaI. This RFLP analysis showed similar patterns among carrot and leafhopper samples. Phytoplasmas detected in most samples belonged to the subgroup 16Sr-IA. To understand why the R16F2n/R16R2n of primers did not amplify the PCR product obtained from the first PCR in the remaining samples, four PCR products of P1/P6 from two plants (representing 16Sr-IA and 16Sr-IB) and two leafhopper samples that did not amplify with nested PCR, were used for DNA sequencing. 1 The BLAST analysis of the obtained sequences showed that the PCR amplicons from the two carrot samples precisely matched with the GenBank sequences of known phytoplasmas. Alignments of these two sequences have shown very slight variations (transition/transversion ratio mean of 0.539) that would correspond to the minor differences at the 16S level between the 16Sr-IA and 16Sr-IB phytoplasma subgroups. The sequences of PCR products obtained from the two insect samples had similarity (>98%) with the sequences of phytoplasma in carrot except that their length differed from the carrot samples by 6 bp. They actually matched bacterial sequences from the GenBank, indicating that a single PCR using P1/P6 was not enough to detect phytoplasma in leafhoppers. 相似文献
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β- 氨基丁酸诱导甜( 辣) 椒抗疫病作用的研究 总被引：12，自引：2，他引：12
报道了用β- 氨基丁酸( DL-β-aminon-butyric acid, BABA) 喷雾处理辣椒叶片和茎后的诱导抗疫病作用。研究证明: 高浓度BABA ( 1 000 g/mL) 对离体辣椒疫霉病菌无抗菌活性, 用其喷雾处理辣椒的茎叶所诱导的抗疫病作用可完全控制其危害; 用BABA 诱导处理后3 d 接种辣椒疫霉病菌, 辣椒植株开始表达出较高的诱导抗性, 这种抗病作用可持续20 d 以上, 并表现出与数量抗病性相似的特性。 相似文献
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根据柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri ssp.citri,Xcc)基因组的保守序列设计特异引物,通过对引物浓度、反应温度和反应时间条件优化,建立了柑橘溃疡病菌重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification,RPA)检测方法。该方法无需PCR仪等复杂设备,在39℃恒温反应30 min即可完成检测过程,快速简便。该检测方法与其他柑橘病原无交叉反应,特异性强;检测灵敏度是普通PCR的100倍,与实时荧光定量PCR基本一致。对71个柑橘样品进行检测,RPA检测出溃疡病阳性样品22个,与PCR、实时荧光定量PCR检测结果一致。 相似文献