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1.
猪神经介素B和受体基因的克隆与组织分布 总被引：1，自引：0，他引：1
基于电子延伸序列,克隆并分析了猪神经介素B(NMB)和受体(NMBR)基因。猪NMBcDNA克隆片段长度为567 bp,开放阅读框架长度为366 bp,编码121个氨基酸。NMBR cDNA克隆片段长度为1 194 bp,开放阅读框架长度为1 173 bp,编码390个氨基酸。同源分析表明,猪NMB的核酸序列与牛、人、小鼠和大鼠的同源性分别为87.1%,85.2%,78.1%和76.6%,氨基酸序列的同源性分别为81%,74.4%,70.2%和70.1%;NMBR的核酸序列与牛、人、小鼠和大鼠的同源性分别为91%,89%,84.2%和83.6%,氨基酸序列的同源性分别为92.3%,90.3%,86.9%和86.4%。组织分布结果显示,猪NMB在多种组织均有分布,NMBR仅分布在大脑。克隆的猪NMB和受体基因分别注册GenBank(EU375564和EU670045)。 相似文献
2.
【目的】克隆分析绵羊联会复合中心组分蛋白1（synaptonemal complex central element protein 1,SYCE1）基因,检测其在雄性生殖轴系中的表达,探索SYCE1对雄性动物生殖发育的调控机制。【方法】以雄性绵羊（小尾寒羊）为研究对象,通过RT-PCR技术克隆SYCE1基因序列,并对该序列及其编码的蛋白进行生物信息学分析;利用qRT-PCR、Western blotting技术分析SYCE1在绵羊下丘脑-垂体-睾丸生殖轴及不同发育阶段（40日龄、3月龄和12月龄）睾丸中的表达情况;采用免疫组织化学染色方法检测SYCE1蛋白在不同发育阶段睾丸组织中的分布情况。【结果】核苷酸序列分析表明,SYCE1基因CDS全长972 bp,编码274个氨基酸。进化树结果表明,绵羊SYCE1氨基酸序列与山羊、欧洲普通牛、野牛、白尾鹿等的氨基酸同源性高;不同物种之间同源性分析发现,SYCE1基因在进化中高度保守;qRT-PCR、Western blotting检测结果表明,SYCE1 mRNA及其蛋白在绵羊的下丘脑、垂体、睾丸及附睾组织中均有表达,其中睾丸组织表达量极显著高于其他组织（P<0.01）,对于不同发育阶段的睾丸组织SYCE1表达水平随着绵羊年龄的增加逐渐升高;免疫组织化学染色结果显示,SYCE1蛋白在40日龄定位于睾丸间质细胞和少量精原细胞,在3月龄定位于睾丸初级精母细胞、精原细胞和间质细胞,在12月龄定位于睾丸初级精母细胞、次级精母细胞、精原细胞、间质细胞和支持细胞。【结论】SYCE1在雄性绵羊生殖轴和不同发育阶段睾丸中均有表达,随着绵羊年龄的增加SYCE1在睾丸组织中的表达水平逐渐上调,说明其与绵羊睾丸器官发育成熟度相关,推断其参与雄性绵羊生殖轴调控。 相似文献
3.
研究热应激对公兔下丘脑-垂体-睾丸(HPT)轴神经介素B(NMB)及其受体(NMBR)基因表达水平及血清皮质醇和睾酮分泌的影响,探讨热应激对神经肽和相关激素分泌的影响。建立热应激模型,采用荧光定量PCR (RT-PCR)检测兔NMB和NMBR m RNA在HPT轴的表达情况,采用放射免疫分析法(RIA)检测兔血清中皮质醇和睾酮浓度的变化规律。结果表明,兔NMB和NMBR基因在HPT轴中表达;NMB和NMBR m RNA在HPT轴的表达模式相似,且热应激后在一定程度上可以促进NMB和NMBR基因的表达,并按时序在下丘脑(热应激0.5 h)、垂体(热应激1.0 h)和睾丸(热应激2.0 h)促进作用最为明显;热应激可以促进皮质醇的分泌,并抑制睾酮的分泌,但这种抑制作用随着热应激时间的增加(热应激2.0 h)逐渐恢复正常。表明热应激可能通过NMB/NMBR系统调节HPT轴的功能,进而影响动物繁殖。 相似文献
4.
研究旨在比较分析不同发育阶段绵羊背最长肌中TMOD4基因的表达水平。采用qRT-PCR和Western-Blot技术检测绵羊1、7、13月龄3个阶段背最长肌中TMOD4基因mRNA和蛋白质的相对表达量。结果表明,TMOD4的mRNA在1月龄绵羊背最长肌组织中表达量最高,13月龄次之,7月龄较低于13月龄,其中1月龄与7月龄、13月龄之间差异极显著(P0.01),7月龄与13月龄之间差异显著(P0.05)。TMOD4蛋白水平在1月龄中最高,7月龄次之,13月龄中最低,1月龄与7月龄和13月龄之间差异极显著(P0.01),7月龄与13月龄之间差异显著(P0.05)。结果表明,TMOD4基因与绵羊背最长肌组织发育相关。 相似文献
5.
[目的]研究MC1R、Agouti和MITF基因在不同毛色新疆山羊皮肤组织中的差异表达，为确定其与新疆山羊毛色形成的相关性提供依据。[方法]采用实时荧光定量PCR技术，检测3种不同毛色(白色、褐色、黑色)新疆山羊皮肤组织中MC1R、Agouti和MITF基因mRNA的表达差异。[结果]MC1R、Agouti及MITF基因mRNA在不同毛色新疆山羊皮肤组织中均有表达；MC1R、MITF基因mRNA在黑色新疆山羊皮肤组织中的表达量高于褐色和白色新疆山羊(P>0.05),Agouti基因mRNA在白色新疆山羊皮肤组织中的表达量显著高于褐色和黑色新疆山羊(P<0.05)。[结论]MC1R、Agouti和MITF基因对新疆山羊毛色形成有一定影响，为今后新疆山羊毛色选育与品种改良提供了参考。 相似文献
6.
[目的]本试验旨在探究PPARGC1A/NRF1/TFAM通路核心基因在湖羊性成熟前后的表达变化。[方法]选取体况良好和系谱清楚的雄性湖羊18只(3和9月龄,各9只),颈静脉采血后进行阉割处理。ELISA检测血样中睾酮(T)、瘦素、胰岛素及胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)的浓度;免疫组化法检测睾丸组织中PPARGC1A/NRF1/TFAM通路相关蛋白的表达定位; RT-qPCR和Western blot检测睾丸组织中PPARGC1A/NRF1/TFAM通路相关基因与蛋白的表达变化。[结果]与3月龄湖羊相比,9月龄湖羊外周血中T、瘦素、胰岛素及IGF-Ⅰ的浓度显著升高(P0.05)。免疫组化法检测发现PPARGC1A、NRF1和TFAM蛋白在3月龄和9月龄湖羊睾丸组织的多种细胞内均呈时空特异性表达。此外,与3月龄湖羊相比,9月龄湖羊睾丸组织中PPARGC1A、NRF1和TFAM m RNA和蛋白表达水平均显著升高(P0.05)。[结论]PPARGC1A/RNF1/TFAM通路相关基因可能与湖羊睾丸发育和性成熟过程密切相关。 相似文献
7.
《中国农业科学》2020,(20)
【目的】BOLL作为一个RNA结合蛋白,可通过与其他分子相互作用而在精子发生过程中发挥不可或缺的作用。研究旨在分析藏绵羊BOLL的序列特征及其在睾丸中的表达与分布模式,进而探究其表达调控与潜在的生物学功能,以期为进一步解读BOLL在绵羊精子发生中的作用机制提供必要的思路和分子见解。【方法】选取3月龄(性成熟前)、1岁龄(性成熟)和3岁龄(成年)3个关键发育阶段各8只健康的雄性藏绵羊。以睾丸组织总RNA为模板,采用RT-PCR技术克隆藏绵羊BOLL的完整编码序列(coding sequence,CDS)区;通过相关生物信息学软件对BOLL的序列与结构特征及其互作蛋白进行分析;采用实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR,qRT-PCR), Western blot和免疫荧光染色法对BOLL在3个发育阶段睾丸组织中的表达和免疫定位特征进行检测;基于课题组前期有关藏绵羊睾丸组织全转录组测序数据,借助相关数据库进行绵羊BOLL的竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)调控网络和功能注释分析,并采用qRT-PCR和双荧光素酶报告实验对其表达特征及靶向关系进行验证。【结果】藏绵羊BOLL CDS区全长为888 bp,可编码295个氨基酸,含有由81个氨基酸残基组成的RRM结构域(靠近N端)和25个氨基酸残基组成的DAZ重复基序。绵羊BOLL在不同哺乳物种间(特别是山羊、川南山地黄牛和牦牛)具有高度的序列同源性和进化保守性。BOLL蛋白与10个雄性生殖细胞发育相关蛋白质分子间存在潜在的相互作用。随着年龄的增加,在藏绵羊睾丸中BOLL mRNA的表达持续上调,而其蛋白的表达先上调后下调。BOLL蛋白主要存在于性成熟后(1岁龄和3岁龄)睾丸内的精子细胞中,也在精母细胞和整个发育阶段的精原细胞中有少量分布。qRT-PCR结果显示,与3月龄相比,在1岁龄和3岁龄睾丸中微小RNAs(microRNAs,miRNAs)oar-miR-127-5p、oar-miR-382-5p和oar-miR-760-3p的表达量极显著下调(P0.01),而长链非编码RNAs(long noncoding RNAs,lncRNAs)LOC105602204、LOC105603195和LOC105616228以及环状RNAs(circular RNAs,circRNAs)circ-ECT2L和circ-SPHKAP的表达量极显著上调(P0.01)。oar-miR-127-5p和oar-miR-760-3p明显降低了BOLL 3′UTR野生型的荧光素酶活性,并且oar-miR-760-3p明显降低了野生型Circ-ECT2L和野生型LOC105616228报告基因的荧光素酶活性。【结论】报道了藏绵羊睾丸中BOLL的分子结构特征、表达规律及潜在的表达调控作用。BOLL主要在藏绵羊减数分裂后的圆形和长形精子细胞中表达,并且其表达受到oar-miR-127-5p和oar-miR-760-3p的直接靶向负调控以及oar-miR-760-3p介导的circRNA Circ-ECT2L和lncRNA LOC105616228的正向调控,进而可能与下游信号分子相互作用,以参与调节绵羊精子细胞向成熟精子分化。 相似文献
8.
《浙江农业学报》2017,(10)
为了探讨绵羊(Ovis aires)MUSTN1基因特征及其在不同发育阶段的背最长肌与股二头肌组织中的表达规律,选取0、2、6、12和24月龄健康绵羊15只,每组3只,采取背最长肌和股二头肌组织,应用分子生物学等方法,对MUSTN1基因CDS区进行克隆,对其进行生物信息学和组织表达分析。结果表明,MUSTN1基因CDS区全序列为248 bp,编码82个氨基酸,其分子量为8.89 ku,等电点为9.93,GC含量大于AT含量,含有5个磷酸化位点、5个N-糖基化位点、1个O-糖基化位点、0个跨膜结构、疏水性蛋白,二级结构主要以无规卷曲为主;与山羊(Capra hircus)该基因核苷酸以及编码氨基酸序列的同源性最高,分别为99.2%、100%,其次为牛(Bos taurus),分别为97.2%、100%。MUSTN1基因在绵羊不同发育阶段(0、2、6、12和24月龄)的背最长肌与股二头肌中均有表达,在背最长肌中,24月龄MUSTN1表达量最高,极显著高于其他月龄(P0.01),0月龄MUSTN1表达量最低,极显著低于2、12月龄(P0.01),显著低于6月龄(P0.05);而在6月龄绵羊股二头肌中MUSTN1表达量最高且极显著高于其他月龄(P0.01),24月龄表达量次之且极显著高于12月龄(P0.01),显著高于0月龄(P0.05)。结论为绵羊MUSTN1基因的编码区序列在物种间具有保守性,且在不同发育阶段的背最长肌和股二头肌组织中均表达,其表达量的高低可能与骨骼肌肉的生长快慢相关。 相似文献
9.
《山西农业大学学报(自然科学版)》2017,(10)
[目的]研究饲喂不同沙棘果渣添加水平的日粮对公绵羊睾丸与附睾抗氧化性的影响。[方法]选用24只5月龄,体重(25.00±1.00)kg健康的杜泊×小尾寒羊杂交公羔,随机分为4组,按照分组依次饲喂添加不同水平沙棘果渣(0%、10%、20%、30%)的日粮,试验期65d。试验结束后采集公绵羊的睾丸和附睾组织,并对组织抗氧化相关基因mRNA和蛋白的表达进行研究。[结果]睾丸组织中,30%沙棘果渣添加组GPx4 mRNA的相对表达量相较于10%添加组以及对照组显著降低(P0.05)。附睾头组织中,30%沙棘果渣添加组Cu-ZnSOD mRNA的相对表达量显著低于10%和20%沙棘果渣添加组(P0.05);30%沙棘果渣添加组GPx4 mRNA的相对表达量相较于对照组显著降低(P0.05)。附睾体组织中,30%沙棘果渣添加组CAT mRNA的相对表达量相较于10%添加组显著降低(P0.05)。附睾尾组织中,20%沙棘果渣添加组Cu-ZnSOD mRNA的相对表达量相较于30%添加组与对照组显著升高(P0.05);30%沙棘果渣添加组Cu-ZnSOD mRNA的相对表达量相较于10%添加组显著降低(P0.05)。20%沙棘果渣添加组附睾头Nrf2与附睾尾Cu-ZnSOD蛋白表达量显著高于10%和30%沙棘果渣添加组。[结论]日粮中添加10%和20%沙棘果渣可以不同程度促进公绵羊睾丸和附睾抗氧化相关基因mRNA的表达,而添加30%沙棘果渣会降低睾丸GPx4、附睾头Cu-ZnSOD和GPx4、附睾体CAT、附睾尾Cu-ZnSOD mRNA以及附睾头Nrf2和附睾尾Cu-ZnSOD蛋白的表达量。因此,25kg杜泊×小尾寒羊杂交公羔日粮中添加30%沙棘果渣为过量添加水平。 相似文献
10.
【目的】BOLL作为一个RNA结合蛋白,可通过与其他分子相互作用而在精子发生过程中发挥不可或缺的作用。研究旨在分析藏绵羊BOLL的序列特征及其在睾丸中的表达与分布模式,进而探究其表达调控与潜在的生物学功能,以期为进一步解读BOLL在绵羊精子发生中的作用机制提供必要的思路和分子见解。【方法】选取3月龄（性成熟前）、1岁龄（性成熟）和3岁龄（成年）3个关键发育阶段各8只健康的雄性藏绵羊。以睾丸组织总RNA为模板,采用RT-PCR技术克隆藏绵羊BOLL的完整编码序列（coding sequence,CDS）区;通过相关生物信息学软件对BOLL的序列与结构特征及其互作蛋白进行分析;采用实时荧光定量PCR（quantitative real time PCR,qRT-PCR）, Western blot和免疫荧光染色法对BOLL在3个发育阶段睾丸组织中的表达和免疫定位特征进行检测;基于课题组前期有关藏绵羊睾丸组织全转录组测序数据,借助相关数据库进行绵羊BOLL的竞争性内源RNA（competing endogenous RNA,ceRNA）调控网络和功能注释分析,并采用qRT-PCR和双荧光素酶报告实验对其表达特征及靶向关系进行验证。【结果】藏绵羊BOLL CDS区全长为888 bp,可编码295个氨基酸,含有由81个氨基酸残基组成的RRM结构域（靠近N端）和25个氨基酸残基组成的DAZ重复基序。绵羊BOLL在不同哺乳物种间（特别是山羊、川南山地黄牛和牦牛）具有高度的序列同源性和进化保守性。BOLL蛋白与10个雄性生殖细胞发育相关蛋白质分子间存在潜在的相互作用。随着年龄的增加,在藏绵羊睾丸中BOLL mRNA的表达持续上调,而其蛋白的表达先上调后下调。BOLL蛋白主要存在于性成熟后（1岁龄和3岁龄）睾丸内的精子细胞中,也在精母细胞和整个发育阶段的精原细胞中有少量分布。qRT-PCR结果显示,与3月龄相比,在1岁龄和3岁龄睾丸中微小RNAs（microRNAs,miRNAs）oar-miR-127-5p、oar-miR-382-5p和oar-miR-760-3p的表达量极显著下调（P<0.01）,而长链非编码RNAs（long noncoding RNAs,lncRNAs）LOC105602204、LOC105603195 和LOC105616228以及环状RNAs（circular RNAs,circRNAs）circ-ECT2L和circ-SPHKAP的表达量极显著上调（P<0.01）。oar-miR-127-5p和oar-miR-760-3p明显降低了BOLL 3′UTR野生型的荧光素酶活性,并且oar-miR-760-3p明显降低了野生型Circ-ECT2L和野生型LOC105616228报告基因的荧光素酶活性。【结论】报道了藏绵羊睾丸中BOLL的分子结构特征、表达规律及潜在的表达调控作用。BOLL主要在藏绵羊减数分裂后的圆形和长形精子细胞中表达,并且其表达受到oar-miR-127-5p和oar-miR-760-3p的直接靶向负调控以及oar-miR-760-3p介导的circRNA Circ-ECT2L和lncRNA LOC105616228的正向调控,进而可能与下游信号分子相互作用,以参与调节绵羊精子细胞向成熟精子分化。 相似文献
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MMP15、PICK1基因均是哺乳动物性腺组织中影响性腺生理功能正常发挥的重要影响因子，但它们在黔北麻羊睾丸组织中的表达规律尚不明晰。为研究黔北麻羊不同月龄的睾丸中MMP15、PICK1基因的表达情况，本试验以黔北麻羊为研究对象，通过qRT-PCR技术分别检测MMP15与PICK1基因在1、3、6、9、12月龄的黔北麻羊睾丸中的表达水平并建立基因表达的标准曲线。结果显示：MMP15、PICK1基因在黔北麻羊不同月龄睾丸组织中均有表达；MMP15基因在黔北麻羊不同月龄睾丸中的表达量从高到低排列为：12月龄>1月龄>9月龄>3月龄>6月龄；12月龄与1月龄的表达差异不显著(P>0.05),二者表达量均极显著高于3月龄、6月龄、9月龄(P<0.01);9月龄表达显著高于3月龄(P<0.05),极显著高于6月龄(P<0.01);3月龄表达极显著高于6月龄(P<0.01)。PICK1基因在黔北麻羊不同月龄睾丸中的表达量从高到低排列分别是：3月龄>6月龄>12月龄>9月龄>1月龄；3、6月龄其表达量极显著高于9、12月龄... 相似文献
12.
《山西农业大学学报(自然科学版)》2017,(12)
[目的]为了研究不同发育阶段晋兰绒山羊睾丸及附睾中β防御素104a(goat Beta-Defensins 104a,gBD104a)表达的特性。[方法]采用免疫组化法对绒山羊公羊睾丸和附睾中的gBD104a进行表达定位。[结果]免疫组化染色结果显示:在山羊睾丸的支持细胞、精母细胞、生精细胞、精子细胞中检测到的gBD104a阳性信号非常弱,且在120日龄以前,随着日龄的增加,山羊睾丸的gBD104a表达量逐渐增加,之后则随着日龄的增加而逐渐降低;在山羊附睾的柱状上皮细胞、附睾管腔游离端的纤毛细胞、管腔液中检测到的gBD104a阳性信号较强。对免疫组化结果进行光密度值分析显示不同发育阶段附睾不同片段表达量顺序均是:附睾体附睾头附睾尾,且差异显著(P0.05)。附睾体中gBD104a表达随着月龄的增加而增加,而附睾头中gBD104a表达则是在150日龄是达到高峰,随后日龄增加而降低;附睾尾gBD104a表达趋势与睾丸表达趋势的相似即:是在150日龄是达到高峰,随后日龄增加而降低。附睾精子免疫荧光结果显示,gBD104a定位在精子头部顶体、颈部和尾部主段。[结论]山羊睾丸和附睾中gBD104a表达具有时空特异性。附睾体可能是gBD104a与精子发生作用的部位。包裹在精子顶体部位的gBD104a可能与精子获能或顶体反应相关,其gBD104a功能需进一步深入研究。 相似文献
13.
[目的]探讨绵羊肌肉生长激素受体基因(GHR)在生长发育早期的表达。[方法]用real time PCR法对不同日龄雄性哈萨克羊和新疆细毛羊背最长肌GHRmRNA的表达进行定量分析。[结果]绵羊背最长肌GHRmRNA的表达随着日龄的增加先升后降,然后趋于水平,30日龄时最高。哈萨克羊的表达量在2~90日龄期间都极显著低于新疆细毛羊(P<0.01)。[结论]日龄和品种对绵羊肌肉GHR基因表达均有较大影响。 相似文献
14.
《（《农业科学与技术》）编辑部》2014,(10)
[目的]旨在克隆绵羊激活素受体IIB(ActRIIB)基因,并构建原核表达载体进行体外表达,为进一步验证功能奠定基础。[方法]以绵羊肝脏组织为材料,以提取总RNA反转录得到的cDNA为模板,利用同源序列克隆技术,对绵羊ActRIIB基因的cDNA全长进行克隆,并对其进行生物信息学分析。再根据克隆序列设计引物,将其与原核表达载体pET41a连接,构建重组表达质粒pET41a-ActRIIB,经IPTG诱导后进行表达鉴定。[结果]扩增获得绵羊ActRIIB基因cDNA全长1 564 bp(Genbank登陆号为:JX422071.1),最大开放阅读框为1 539 bp,共编码512个氨基酸;其氨基酸序列与牛的同源性最高(99.6%),ActRIIB的C末端区域高度同源且属于TGFβ家族。原核诱导表达获得符合预期大小(约92 kD)并带有组氨酸标签序列的ActRIIB重组蛋白。[结论]绵羊ActRIIB基因的克隆和表达为进一步研究其生物学功能奠定了基础。 相似文献
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[目的]血管紧张素转换酶2(ACE2)是RAS系统的关键调控酶,在动物上的研究较少,本试验研究了山羊ACE2的相关理化性质和功能。[方法]利用同源克隆及RT-PCR技术,根据牛的ACE2基因mRNA序列设计引物,从山羊肾脏组织中扩增出ACE2基因编码区的特异性片段,TA克隆到p MD19-T载体并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,对生长出的单菌落进行验证后测序分析。根据测序分析结果设计引物,经PCR扩增和酶切连接,构建原核表达载体p ET-28a-ACE2,经过验证后转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG诱导表达ACE2蛋白。[结果]山羊ACE2基因c DNA编码区共包括2 415个核苷酸,编码804个氨基酸残基。同源性比对发现,山羊ACE2基因核苷酸序列同源性与绵羊ACE2最高,为99%,与斑马鱼最低,仅为60%。遗传进化分析也表明该ACE2基因与绵羊的遗传距离最近,与斑马鱼处在两个不同的分支上。蛋白结构及理化性质分析预测该山羊ACE2蛋白属于稳定型蛋白,蛋白信号肽序列位于第1氨基酸(aa)~18氨基酸(aa)之间,蛋白跨膜螺旋预测为Ⅰ型跨膜蛋白。成功构建山羊ACE2蛋白胞外部分(19~738 aa)表达载体,表达出的蛋白相对分子质量约为90×103,主要以包涵体的形式在BL21(DE3)中表达。[结论]本试验首次成功克隆了山羊ACE2基因编码区(基因序列号:KF921008.1),并对其蛋白结构及理化性质进行了初步预测,同时在大肠杆菌中高效表达了其胞外区蛋白。 相似文献
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山羊IGFBP-2基因的克隆、序列分析及其组织表达 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】克隆获得南江黄羊IGFBP-2（Insulin-like growth factor binding protein -2）基因的CDS区全序列,对其进行生物信息学分析,并分析IGFBP-2的mRNA和蛋白组织表达特征,为深入研究该基因在出生后山羊生长和发育过程中的作用以及表达调控提供基础资料。【方法】下载NCBI的GenBank数据库中公布的绵羊（Ovis aries,NM_001009436）和牛（Bos taurus,NM_174555）的IGFBP-2基因的mRNA序列,经序列比对后采用保守区域序列并利用Primer Premier 6.0软件设计克隆引物,经PCR扩增后采用TA克隆技术获取含有阳性克隆子的菌液,送公司测序得到山羊IGFBP-2基因的完整编码区序列,并利用EditSeq、DNAMAN 6.0、MEGA 6.0和ExPASy在线平台等软件对CDS区序列和其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析;获得山羊IGFBP-2基因CDS区序列后,利用该序列设计实时荧光定量PCR（Q-PCR）引物,采用Q-PCR和蛋白质免疫印迹杂交（Western blotting）方法检测了IGFBP-2的mRNA和蛋白在出生后南江黄羊不同组织（心脏、肝脏、肺、背最长肌、半膜肌和臂三头肌）和不同发育阶段（3、30、60、90和120 d）的表达情况。【结果】①克隆得到954bp的南江黄羊IGFBP-2基因的CDS区全序列,碱基组成为GC含量69.39%,AT含量30.61%,共编码317个氨基酸残基,预测的山羊IGFBP-2蛋白分子量大小为33.8808 kD,等电点为7.82,二级结构由无规卷曲（68.14%）、α-螺旋（18.30%）和延伸链（13.56%）三种形式组成;蛋白结构域分析发现,IGFBP-2蛋白序列包含保守的IB（IGFBP homologues）和TY（Thyroglobulin type Ι repeats）结构域,IB结构域位于第37-125位氨基酸处,TY结构域位于第250-302位氨基酸处;②磷酸化位点预测发现,IGFBP-2蛋白中存在Ser（5）和Thr（7）共12个磷酸化位点;糖基化位点预测发现,IGFBP-2蛋白序列中存在10个N-糖基化位点和2个O-糖基化位点;③CDS区序列相似性比较发现,山羊IGFBP-2与绵羊、牛、猪、人和小鼠的相似性分别达到98.99%、97.73%、87.12%、78.33%和76.26%;氨基酸序列相似性比较发现,山羊IGFBP-2与绵羊、牛、猪、人和小鼠的相似性分别达到99.24%、98.10%、87.07%、70.27%和73.00%;④系统进化树分析发现,山羊IGFBP-2与绵羊和牛的亲缘关系最近;⑤组织表达分析表明,IGFBP-2在肝脏中的mRNA和蛋白的相对表达量均最高(P<0.01),背最长肌次之;在不同发育阶段的肝脏组织中,IGFBP-2 mRNA和蛋白相对表达量均呈现一直上升的趋势;在不同发育阶段的背最长肌组织中,IGFBP-2的mRNA表达水平呈现一种“上升-下降-上升”的波动平衡。【结论】获得了山羊IGFBP-2基因完整的编码区序列和组织表达特征,生物信息学分析发现IGFBP-2基因的编码区序列具有物种间的保守性,肝脏是山羊IGFBP-2 的mRNA和蛋白表达的主要组织,同时在山羊不同发育阶段的肝脏和背最长肌组织中,IGFBP-2基因的mRNA和蛋白表达丰度呈现一定的规律性,表明IGFBP-2基因可能在出生后山羊的早期生长发育过程中发挥着重要的作用。 相似文献
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藏系绵羊MSTN基因在不同年龄不同组织的表达定量研究 总被引：2，自引：0，他引：2
[目的]研究MSTN基因在藏系绵羊不同年龄、不同组织的表达差异。[方法]根据GenBank已发表序列（NM_001009428．1）设计l对引物,以藏系绵羊组织总RNA为模板,采用实时荧光定量PCR技术（QRT—PCR）分析了MSTN基因在不同年龄阶段的真胃、瘤胃、腿肌和心肌中的基因表达量。[结果]经过内参基因校正后,综合4个组织分析,MSTN基因在6月龄藏系绵羊的相对表达量最高,是12月龄藏系绵羊的2．52倍,是羔羊的2．24倍,是9月龄的1．30倍（尸〈O．05）。且MSTN基因在腿肌中的表达量最高,在其他组织几乎未表达,在腿肌中的表达量是其瘤胃的3984．78倍,是心肌的602．69倍（P〈0．01）。[结论]为MSTN蛋白抗体的正确利用奠定了基础。 相似文献
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[目的]研究哈萨克羊和新疆细毛羊肝脏生长激素受体(Growth hormone receptor,GHR)基因在发育早期的表达,为绵羊早期生长发育的研究提供资料。[方法]采用实时定量PCR检测2个品种羊在2、30、60、90和120日龄时肝脏GHRmRNA的水平,并用SPSS软件进行统计分析。[结果]绵羊肝脏GHR基因的表达量在2日龄时较高,30日龄时降到最低点,然后持续上升;30日龄后的变化趋势与绵羊的累积生长曲线呈正相关(P<0.05);哈萨克羊的GHR表达量在2~90日龄期间均低于新疆细毛羊,但仅在2和90日龄时差异极显著(P<0.01)。[结论]雄性哈萨克羊和新疆细毛羊肝脏GHRmRNA表达的发育性变化模式基本相似,品种间差异较小;肝脏GHR基因在绵羊生长发育的调控中可能起着重要作用。 相似文献
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NGF及其受体在雄鸡睾丸组织中的定位及表达 总被引：1，自引：0，他引：1
分别取14,20,24,35周龄同批次放养土鸡的睾丸组织,一部分经液氮处理后提取总蛋白,通过Western blot技术检测其表达量;另取一部分通过免疫组织化学技术对目的蛋白进行定位分析,研究神经生长因子(Nerve Growth Factor,NGF)及其受体NGFR(P75)在雄鸡睾丸组织中的定位及表达情况。结果表明,NGF及P75蛋白在各发育阶段的雄鸡睾丸组织内均有表达;随着日龄增加,表达部位有所变化,且NGF及P75的蛋白表达量随各发育阶段呈增加趋势。研究结果对于阐明NGF及其受体在禽类生殖发育中调节作用的分子机理有重要意义。 相似文献