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为探讨牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)感染牛单核巨噬细胞后的免疫机理,采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离牛外周血单个核细胞,再经贴壁培养获得单核巨噬细胞。应用Griess法检测接种IBRV后6、12、24、48h时间段的牛单核巨噬细胞分泌一氧化氮(NO)的含量,结果显示,单核巨噬细胞感染IBRV后产生NO的量均高于对照组(P<0.05),攻毒24h时巨噬细胞产生NO的量达到最高水平(607.87μmol/L)。结果表明,IBRV感染可以对单核巨噬细胞分泌NO的量产生影响,这可能和IBRV引起的致病机理有一定关系。 相似文献
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探索奶牛乳腺炎粪肠球菌cyl A基因对体外培养的单核巨噬细胞完全吞噬功能的影响。通过体外培养牛外周血单核巨噬细胞（BMC-7）,利用牛乳腺炎粪肠球菌野生型菌株（BME1708）和cyl A基因敲除突变株（BME1708?cyl A）按照不同时间梯度侵染BMC-7,利用台酚蓝染色显微镜观察法,统计不同时间BMC-7对BME1708和BME1708?cyl A的吞噬率和吞噬指数的差异。结果表明随着时间的延续,吞噬率和吞噬指数存在动态变化,至48 h时BMC-7对BME1708的吞噬率和吞噬指数分别为25%和2.3,而对BME1708?cyl A的吞噬率和吞噬指数分别为50%和5.5。随着时间的进一步延续,巨噬细胞开始死亡。说明溶血素cyl A基因阳性的粪肠球菌菌株对巨噬细胞的吞噬作用具有一定的负调控作用,并且在巨噬细胞内的存活率相对高,在单核巨噬细胞内存在一定的“内生”现象,这一现象可能是由该致病菌引起的牛乳腺炎常反复、难治愈的分子机制之一。 相似文献
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本试验旨在为阐明水牛感染大片吸虫的免疫机理提供单核巨噬细胞材料。经过密度梯度离心分离,贴壁法培养水牛外周血单核巨噬细胞,以MTT法检测培养4、24、48、72、96、120、144、168、192 h时贴壁单核巨噬细胞的相对存活数量,结果显示贴壁细胞体外培养72、96、120 h时,细胞数量相对稳定,组间差异不显著(P＜0.05)。贴壁72 h的细胞通过倒置显微镜、瑞氏染色观察,结果显示其具备单核巨噬细胞的典型形态特征;酸性磷酸酶、非特异性酯酶染色阳性率分别为(72.8±0.5)%和(84.6±0.4)%,显示其具备单核巨噬细胞酶化学特性;贴壁细胞表达单核巨噬细胞特异性表面抗原MHC Ⅱ;墨汁的吞噬率为(87.5±0.6)%,表明该细胞具有单核巨噬细胞的吞噬功能。结果表明贴壁法分离,5% BSA的DMEM培养水牛外周血单核巨噬细胞,培养72 h贴壁细胞具备单核巨噬细胞特征,在细胞数量相对稳定期(72、96、120 h)可以进行相应的试验研究。 相似文献
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病菌净Ⅱ对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能的影响试验 总被引：4，自引：1，他引：3
本实验测定了中药复方病菌净Ⅱ对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能的影响。测试结果,病菌净Ⅱ能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的功能。其吞噬百分率和吞噬指数都显著高于对照组（Ｐ〈０．０１）。结果表明,中药复方病药净Ⅱ有增强机体非特异性免疫功能的作用。 相似文献
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猪圆环病毒2型感染对猪肺泡巨噬细胞生物学活性的影响 总被引：2，自引：1，他引：2
将猪圆环病毒2型（PCV2）BF株经口、鼻接种40日龄健康仔猪，在接种后不同时间宰杀，收集猪肺泡巨噬细胞（PAM），同时设立对照。用FITC—Annexin V／PI双染色流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳检测PAM凋亡现象，通过EA花环试验测定Fc受体数目，通过吞噬鸡红细胞试验测定吞噬功能，分析PCV2感染对PAM生物学活性的影响。结果显示，在整个试验期内2种方法均没有检测到PAM凋亡，表明PCV2感染不会诱发PAM凋亡。PAM的Fc受体数和吞噬鸡红细胞数的变化规律一致，与对照组相比，两者数量在接种后第3d明显下降，第7d有所回升，之后基本恢复，表明PCV2感染后PAM吞噬和清除病原的功能出现短暂下降。 相似文献
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比色法测定小鼠巨噬细胞的吞噬活性 总被引：1，自引：0，他引：1
巨噬细胞广泛存在于机体的各个脏器和组织，又称为单核吞噬细胞系统（MPS），是机体免疫系统中重要的细胞成分之一，可以吞噬微生物和其他异物颗粒，在吞噬过程中产生过氧化氢（H2O2）。在各种药物及病原菌对机体免疫功能影响作用的研究中，吞噬细胞吞噬功能的检测是一个重要的非特异性免疫功能的监测指标。国内外研究巨噬细胞的吞噬活性方法很多， 相似文献
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[目的]为了解凯里市A奶牛场牛呼吸道疫病的流行情况。[方法]本次采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对142 份奶牛血清样品进行牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）、牛病毒性腹泻（BVDV）、牛传染性鼻气管炎（IBRV）、牛支原体感染抗体检测。[结果]凯里市A奶牛场4 种呼吸道疾病病原普遍存在,BRSV阳性率为41.5%（59/142）;BVDV阳性率为40.1%（57/142）;IBRV阳性率为45.0%（64/142）;支原体阳性率为33.8%（48/142）。犊牛4 种呼吸疾病单一感染率为15.1%~45.5%;BVDV感染最严重,为45.5%;成年牛单一感染率为33.8%~45.1%。此外,奶牛场存在IBRV、BRSV、BVDV、支原体多种病原体混合感染,二重感染率为18.3％~30.2％;BVDV+IBRV感染率最高,为30.2%;三重感染以BVDV+支原体+IBRV感染率最高,为19.7%;四重感染率为9.9%。[结论]凯里市A奶牛场存在4 种疫病,有不同程度的病原体感染,应加强对上述病原体的流行控制,提高奶牛场管理水平,减少奶牛场疫病发生和经济损失。 相似文献
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为了调查新疆地区某规模化奶牛场牛传染性鼻气管炎（IBR）发病情况,通过采集不同生长阶段牛群血清共计362 份,使用牛传染性鼻气管炎病毒gB（IBR-gB）抗体检测试剂盒检测牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）抗体效价,评估该奶牛场IBRV疫苗免疫效果。结果显示,后备牛中犊牛和青年牛IBRV抗体阳性率分别为88.57%（31/35）、75.00%（21/28）;成年母牛中泌乳期母牛、干奶期母牛IBRV抗体阳性率分别为81.46%（145/178）、95.04%（115/121）。阴性数共44 份,可疑数8 份,IBRV抗体平均阳性率为88.38%;结果表明,疫苗接种后,不同生产阶段牛群均可产生不错的抗体保护效果,为奶牛场防控IBR提供依据。 相似文献
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由2例疑似牛传染性鼻气管炎（IBR）病例的荷斯坦奶牛分离到一株病毒,命名为IBRV—C1株。该病毒可被IBR标准阳性血清完全中和;接种MDBK细胞可出现IBR病毒典型细胞病变效应;选取IBR病毒gB蛋白基因序列设计引物进行PCR检测和基因测序,结果可扩增出特异性目的片段;动物回归试验显示,3头牛均可见体温升高、鼻流粘液、呼吸困难等典型的IBR临床症状。在此基础上制备了三批牛传染性鼻气管炎灭活疫苗,并进行了疫苗安全性和效力试验,结果表明三批疫苗对靶动物安全,免疫效果较好,免疫牛中和抗体效价几何平均值可达1：41以上,攻毒保护率达5／5。 相似文献
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为研究紫玉米花色苷(purple corn anthocynins,PCA)的抗病毒效果,本试验先通过观察细胞病变效应测定了PCA对牛肾细胞传代系MDBK细胞的毒性作用,以此确定PCA的安全浓度范围;然后以3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法检测了安全浓度范围内的PCA对牛传染性鼻气管炎病毒在MDBK细胞中复制的影响。PCA毒性试验结果显示,PCA对MDBK细胞的最大安全浓度为262.14 μg/mL;而最小浓度为7.8125 μg/mL的PCA就能对牛传染性鼻气管炎病毒在MDBK细胞中的复制有明显抑制作用。MTT试验结果显示,PCA对MDBK细胞的半数抑制浓度（TC50）为262.14 μg/mL,对病毒的半数抑制浓度（IC50）为11.38 μg/mL,以此计算出治疗指数（TI）为23.04。由此证明PCA具有良好的抗牛传染性鼻气管炎病毒的作用,提示紫玉米可作为防制奶牛传染性鼻气管炎的饲料原料。 相似文献
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为了获得具有生物学活性的牛传染性鼻气管炎病毒（infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV） gD蛋白特异性单链抗体,试验采用PCR方法扩增杂交瘤细胞的cDNA单链抗体重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）基因,通过重叠延伸PCR及Linker序列获得完整的单链抗体基因,将单链抗体基因克隆至杆状病毒载体pFB-LIC-Bse中,构建重组转移载体pFB-VH-VL,将其转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中制备重组杆粒rBacmid-VH-VL,将重组杆粒rBacmid-VH-VL转染至Sf9细胞中获得携带单链抗体基因的重组杆状病毒。该重组杆状病毒在Sf9细胞中表达了分子质量约为30 ku的单链抗体蛋白。Western blotting结果显示,重组单链抗体蛋白能被His标签抗体特异性结合,也能特异性结合gD蛋白。间接免疫荧光试验结果显示,该单链抗体蛋白能够识别感染牛肾细胞MDBK中的IBRV。本研究在昆虫细胞中成功表达了具有识别IBRV的gD蛋白特异性单链抗体,为牛传染性鼻气管炎的诊断与治疗奠定了基础。 相似文献
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Infectious bovine rhinotrachetis virus (IBRV) progeny was increased ten to 12 fold in bovine turbinate (BT) cells treated with 10?3 M corticosterone acetate (CCA) as demonstrated by plaque assay. Autoradiographic studies demonstrated an increased binding of 3H-corticosterone (3H-CS) in IBRV infected cells and the fractionation of labelled cells revealed 78–80% of the total hormone associated with the cytoplasmic components. Incorporation of 3H-uridine and 3H-valine precursors into cells treated with the hormone demonstrated up to 16-fold increase in RNA and protein synthesis which was inhibited by the addition of actinomycin D. The data suggest that increased rate of macromolecular synthesis in IBRV infected cells treated with the corticosteroid may result in the enhancement of virus production. 相似文献
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For preparation of bioactive single chain fragment variable (ScFv) which was targeted against envelope glycoprotein D (gD) of infectious bovine rhinotracheitis virus (IBRV),VH and VL genes were amplified from the cDNA of lymphocyte hybridoma, then VH and VL genes were integrated with a Linker by SOE-PCR,and the ScFv gene was cloned into the baculovirus vector pFB-LIC-Bse, which was transformed into Escherichia coli DH10Bac competent cells to construct a recombinant bacmid rBacmid-VH-VL. Finally,ScFv was expressed by transfected rBacmid-VH-VL into insect Sf9 cells, its molecular weight was about 30 ku. The result of Western blotting suggested that ScFv generated in Sf9 cells was specifically binds to His antibody,the protein also showed high affinity to gD of IBRV. The result of indirect immunofluorescence assay showed that ScFv could recognize IBRV which infected bovine kidney cells (MDBK). The study indicated that the recombinant ScFv was expressed in Sf9 cells, and could bind to gD of IBRV specifically. The result could provide the basis for the diagnosis and treatment of infection of IBRV. 相似文献
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Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from calves infected with and hyperimmunized to infectious bovine rhinotracheitis virus (IBRV) were stimulated in vitro with viral antigens to evaluate their cytotoxicity for a variety of cells. The 51-Cr release assay was used to measure cytotoxicity. Cytotoxicity was not present in fresh nonstimulated cells, but was detected in cultured, IBRV-stimulated cells at day 3, was maximal at day 7, and declined thereafter. PBMC stimulated in vitro with IBRV expressed a preference for killing IBRV-infected cells compared to pseudorabies virus (PRV)-infected cells. IBRV-infected, but not PRV-infected, cold target cells inhibited lysis of IBRV-labeled target cells. High concentrations of IBRV hyperimmune serum partially blocked cytotoxicity. Cells expressing a viral preference for cytotoxicity showed no preference for lysis of autologous compared to heterologous bovine cells. PBMC from calves that were either IBRV-immune or not immune were cultured without IBRV stimulation and had similar levels of cytotoxicity for IBRV-infected cells as cells from IBRV-infected cattle. 相似文献
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牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)主要引起牛的呼吸道、生殖道等炎症反应,也可以引起呼吸困难及流产。IBRV的致病机制尚不清楚,目前发现IBRV的非结构蛋白和结构糖蛋白与病毒毒力相关,不但影响病毒的复制及对宿主细胞的感染,同时也与病毒的免疫逃逸密切相关。除此之外,IBRV通过诱导宿主细胞凋亡造成持续性感染及激活炎症复合体诱导严重的炎症反应,造成宿主广泛病理反应的发生。因此,探索IBRV毒力蛋白结构功能、IBRV感染诱导的细胞凋亡及宿主炎性复合体激活的分子机制,将成为未来IBRV研究的热点。 相似文献