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采用酚:氯仿和醋酸铵两种方法提取质粒NDA,其中经醋酸铵抽提得到的质粒DNA的量较多,且该方法操作简单,采用醋酸铵提取质粒DNA是较为适宜的。 相似文献
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胡永浩 《甘肃农业大学学报》1994,(4)
通过对碱变性和ＰＥＧ法提取纯化质粒ＤＮＡ的改进，成功地进行了ｐＥＨ２０ＤＮＡ的制备，得到了高纯度的质粒ＤＮＡ。改进的方法使碱变性法与ＰＥＧ法有机地衔接起来，具有经济、省时、简便、可靠的特点，可用于相关质粒ＤＮＡ的大量制备。 相似文献
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将扩增出的1.8 kb目的片段克隆入pUCm-T载体,以构建好的质粒为模板进行突变反应。DpnⅠ酶切反应产物,去除甲基化及半甲基化DNA模板。酶切产物经纯化后转入DH5α感受态细胞,提取质粒测序。结果表明,双核苷酸碱基AA突变为GC,成功得到突变载体。将定点突变试剂盒方法加以改进,完成GC含量高达69.5%模板定点突变,改进后的方法操作简单、经济实用,有效地解决了高GC含量模板难突变难题。 相似文献
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采用索氏提取器从茶叶中提取咖啡因的方法具有提取率低、操作繁琐、耗时长的缺点,为了克服这些缺点,实验采取多种途径改进了实验方法,对比实验结果表明,各改进后的实验方法均提高了咖啡因的提取率,综合改进方法使提取率提高了1倍,大大缩短了提取时间。 相似文献
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基因组的提取是分子生物学研究的基础技术。提取的纯度及结构的完整性是进行基因工程各项研究所必需的条件。报道了一种改进的鱼组织线粒体基因组的提取方法,该方法操作简便,提取的线粒体基因组结构完整,并尽可能避免了核DNA、蛋白质、有机溶剂等的污染,而得率和纯度都可满足鱼组织线粒体基因组的研究要求。 相似文献
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碱裂解法提取P.ananatis变异体质粒DNA改良研究 总被引：2，自引：0，他引：2
[目的]对常规碱裂解法进行改进。[方法]分别改变溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及无水乙醇的反应时间,少量提取质粒DNA。根据产率和纯度,得出各溶液的最佳反应时间,以紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳结果验证提取效果。[结果]将常规碱裂法中溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及无水乙醇的反应时间由原来的5、5、5、15 min分别缩短至0、1、1、5 min,纯度达1.8~1.9,产率达180.0~248.0μg/ml。[结论]改良法提取质粒DNA,总提取时间缩短了23 min。 相似文献
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利用滤膜过滤技术对经典碱裂解法进行改良,并将改良后的提取效果与经典碱裂解法和试剂盒法进行比较。结果表明,改良法提取的质粒DNA浓度显著高于经典碱裂解法和试剂盒法,并且质粒纯度与试剂盒法相近。改良方法适用于实验室的应用与推广。 相似文献
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[目的]为抑制素质粒的大量提取与纯化寻找一种成本低的方法。[方法]采用碱裂解法与DEAE-纤维柱层析法提取与纯化抑制素质粒DNA,用分光光度法测定其浓度和纯度。[结果]抑制素质粒DNA的等电点为2．0～2．5,低于大部分蛋白质。pH值为8．0时,抑制素质粒DNA带负电荷,且电荷数量与RNA和蛋白质不同。用紫外分光光度计测定的柱层析后洗脱峰1、2、3在260和280nm波长处的吸光度值分别为3．01和2．9、0．95和0．51、0．84和0．76,其OD260nm/OD280nm分别为1．04、1．86和1．10。3mol／L NaCl的洗脱峰1大部分是蛋白质,0．6mol／L NaCl的洗脱峰2是浓度为93．0ng／ml的抑制素质粒DNA,3mol／L NaCl的洗脱峰3是杂质。[结论]利用碱裂解法能从大肠杆菌细胞中分离出抑制素质粒DNA,DEAE-纤维柱层析法纯化的抑制素质粒DNA达到了要求的纯度。 相似文献
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在ｐＲＫ２０７３的辅助作用下,通过三亲本接合转移,将Ｔｎ５（ｓａｃＢ－ｌｕｘＡＢ）插入华癸根瘤菌７６５３Ｒ菌株基因组中。将３２００个Ｔｎ５标记菌株影印到含有８％蔗糖的ＹＭＡ平板,检测这些菌株的发光酶活性和新霉素抗性。共获得８个菌株,其选择标记消失。质粒检测发现其共生质粒有不同程度的缺失甚至消除。结瘤实验证明,所有共生质粒部分缺失（有的缺失达１／３）的菌株依然结瘤。经用ｌｕｘＡＢ探针的分子杂交证实,８个菌株中有３个对应的标记菌株其Ｔｎ５插在共生质粒上。 相似文献
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Caplan A Herrera-Estrella L Inzé D Van Haute E Van Montagu M Schell J Zambryski P 《Science (New York, N.Y.)》1983,222(4625):815-821
The tumor-inducing (Ti) plasmid of the soil microorganism Agrobacterium tumefaciens is the agent of crown gall disease in dicotyledonous plants. The Ti plasmid contains two regions that are essential for the production of transformed cells. One of these regions, termed transfer DNA, induces tumor formation and is found in all established plant tumor lines; the other, termed the virulence region, is essential for the formation but not the maintenance of tumors. Transfer DNA, which transfers to the plant genomes in a somewhat predictable manner, can be increased in size by the insertion of foreign DNA without its transferring ability being affected. The tumor-causing genes can be removed so that they no longer interfere with normal plant growth and differentiation. This modified Ti plasmid can thus be used as a vector for the transfer of foreign genes into plants. 相似文献
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对构建的适于转基因油菜RT73品系特异性检测标准分子pEASY-RT73在普通PCR和实时荧光PCR检测中的适用性进行了实验室间协同实验验证。对8家实验室结果的统计分析表明,标准分子pEASY-RT73对转基因油菜RT73品系特异性检测及油菜内源基因HMG和PEP检测具有高特异性。在普通PCR扩增中,标准分子对PEP和RT73品系特异性序列的检测下限均为20拷贝,对HMG基因的检测下限为50拷贝;在实时荧光PCR扩增中,HMG和RT73品系特异性序列的检测下限均为10拷贝,PEP检测下限为50拷贝。虽然各实验室所用仪器和试剂有较大差异,但对检测结果影响不大。因此,标准分子pEASY-RT73可稳定的作为新型标准物质用于转基因油菜RT73品系特异性普通PCR和实时荧光PCR检测。 相似文献