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以转发根农杆菌741杨为材料,在继代和移栽过程中对其残存农杆菌进行追踪检测。结果表明:培养基中附加头孢噻钨纳300 mg/L可将农杆菌基本抑制;随着转化植株在含抗生素培养基中继代时间的延长,残存农杆菌的数量和活性逐步下降,在继代18个月后,无法培养出目的菌落,但转化植株一旦脱离抗生素环境,农杆菌数量和活性又将得到恢复;残存农杆菌主要分布于植株体表和茎中,且影响组培苗PCR检测结果;将转化株系组培苗移栽到花盆半月和田间6个月后,植株体表、体内均未检测到目的农杆菌,但在室内培养半个月后2个株系根际土壤中检测到目的菌落。 相似文献
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转BG2基因黑杨植株的获得 总被引：9，自引：0，他引：9
利用根癌农杆菌介导法将β-1，β-葡聚糖酶基因(BG2)转人黑杨G1。本研究建立了黑杨G1的继代及高频再生系统，对传统农杆菌侵染方法进行了改良，通过抗生素筛选获得大量抗性植株。对抗性植株进行了PCR和PCR-Southem杂交鉴定，证实BG2基因已整合人杨树核基因组中。 相似文献
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大豆基因型对农杆菌介导大豆胚尖遗传转化体系的转化效率有很大影响,同时有效地抑制农杆菌是该体系的重要环节。研究选择3个东北地区主栽的大豆品种,以胚尖为外植体进行农杆菌介导的遗传转化,比较3个大豆品种的诱导率、伸长率和生根率,并在芽诱导、伸长及生根阶段采用不同的抗生素浓度配比,优化抑菌条件。实验结果表明3个品种中,黑农37为最佳受体品种;抗生素浓度对大豆胚尖遗传转化有很大影响。在芽诱导和伸长阶段添加头孢霉素300mg/L+羧苄青霉素150mg/L抑菌效果较好;而在生根过程中,不添加抗生素为最佳条件。 相似文献
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抗生素诱导下的农杆菌耐药性及RAPD分析 总被引：1，自引：0，他引：1
用头孢噻肟、亚胺培南和关罗培南等抗生素对农杆菌EHA101、LBA4404和GV3101进行诱导,检测其对诱导后3种农杆菌的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)和耐药性变化.结果表明,3种农杆菌在含一定浓度抗生素的培养基上培养12～18 d后.表现出MIC和MBC值的增加.经耐药性标准鉴定,达到中度敏感或耐药.对筛选到的耐药菌株基因组进行RAPD-PCR随机扩增,探讨其基因组DNA多态性是否存在差异.结果RAPD-PCR扩增产生的条带多态性发生变化,出现特异性条带的增加和缺失.所筛选到的特异性片段的产生和缺失可能与农杆菌耐药性产生相关. 相似文献
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抗生素对根癌农杆菌抑制作用及对大豆子叶节再生的影响分析 总被引：1，自引：0，他引：1
以周豆12大豆子叶节为材料,研究了头孢呋辛钠、头孢曲松钠、头孢噻肟钠和头孢唑林钠4种抑菌抗生素对农杆菌的抑制作用和对大豆子叶节再生的影响,以及卡那霉素对大豆子叶节再生的影响。结果表明:随着卡那霉素浓度的增加,子叶节分化率逐渐降低,当浓度达到45 mg/L时,分化芽的生长几乎完全受到抑制,植株出现白化现象;4种抑菌抗生素中,头孢曲松钠对农杆菌的抑制作用最好,头孢呋辛钠和噻肟钠抑菌效果次之,结合抑菌抗生素对子叶节再生的影响作用,确定在大豆子叶节的遗传转化中,使用头孢曲松钠或头孢噻肟钠作为抑菌抗生素,临界浓度分别为200 mg/L和300 mg/L。而卡那霉素使用的临界浓度为45 mg/L。 相似文献
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以鄂马铃薯（Solanum tuberosum L.）3号为试验材料，将含有来源于黄芪的硒代半胱氨酸甲基转移酶基因（AbSMT）的质粒pBinAr进行PCR扩增以及酶切连接构建重组转化子pBI121-AbSMT，运用农杆菌转化法，设置农杆菌菌液浓度梯度、侵染时间以及共培养时间组合进行遗传转化，并且通过PCR鉴定以及GUS组织化学染色进行基因表达验证。结果表明，筛选抗生素是50.00 mg/L的Kan，农杆菌菌液浓度为0.50(OD600 nm)，侵染时间为8 min，共培养时间为3 d，能够实现鄂马铃薯3号高效遗传转化，同时成功构建了AbSMT基因转化的鄂马铃薯3号。 相似文献
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慈姑蛋白酶抑制剂基因转化小白菜获抗虫转基因植株 总被引：14，自引：0，他引：14
通过根癌农杆菌的介导将慈姑蛋白酶抑制剂基因导入小白菜。Ｋａｎａｍｙｃｉｎ筛选浓度为１０－１５ｍｇ．Ｌ＾－１,抑制农杆菌生长的抗生素选用Ｃ浓度为３００－５００ｍｇ．Ｌ＾－１。小白菜带柄子叶被农杆菌感染后,抗性芽的诱导频率为０．２％－２．０％。加入适量的ＡｇＮＯ３不仅可以抑制过度生长的农杆菌,还可以使抗性芽的诱导频率约提高到５％。试验获得转基因植株９７株。 相似文献
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利用已构建的番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)基因,通过农杆菌介导法,建立美中红番木瓜(Carica papaya L.)体胚的转化体系。结果表明:共培养时,当农杆菌EHA105携带pCAMBIA2300质粒时,农杆菌的浓度(OD600 nm)应小于或等于0.1,其共培养后抑制农杆菌的羧苄青霉素浓度应以750 mg/L为宜;当农杆菌EHA105携带pBI121质粒时,则农杆菌的浓度(OD600 nm)应小于或等于0.8,其共培养后抑制农杆菌的羧苄青霉素的浓度则为500 mg/L;加上滤纸处理,抗生素洗涤以及洗涤后的干燥处理,可完全抑制体胚表面的农杆菌生长。对再生的番木瓜体胚进行PCR检测,结果表明PRSV基因已转入体胚中,但还需要成苗后的进一步检测。 相似文献
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抗生素对新疆棉花愈伤组织诱导和生长的影响 总被引：3，自引：0，他引：3
通过抗生素对新疆３个棉花品种愈伤组织形成和生长影响的试验,结果表明头孢霉素和羧苄青霉素对其都有影响,其中羧苄青霉素的抑制作用较强,头孢霉素作为抑制农杆菌的抗生素较为适宜。 相似文献
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提高植物农杆菌转化效率辅助策略研究进展 总被引：4，自引：0，他引：4
农杆菌介导是目前转基因植物研究采用的主要方法,不同植物间利用农杆菌转化的转化效率差异很大,高效农杆菌转化体系对于转基因植物产业化和功能基因组学等研究具有重要意义。总体而言,影响农杆菌转化效率的因素主要包括基因型、外植体及其生理状态、农杆菌菌株、培养基成分、共培养条件等。对于一些难转化的植物来说,辅助因素对转化效率的提高起着至关重要的作用。本文综述了影响农杆菌转化效率的一些辅助因素及其作用,包括植物材料微创伤处理和干燥处理、培养基中抗氧化剂和表面活性剂使用、农杆菌中额外拷贝Vir和植物细胞中VIP(VirE2 interacting protein)过表达、载体上核基质附着序列引入等,以期为进一步改进难转化作物如小麦、大豆等农杆菌介导的遗传转化效率提供参考。 相似文献
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建立并优化了农杆菌介导转化瓜类炭疽菌(Colletotrichum lagenarium)获得T-DNA插入突变体体系,包括农杆菌使用浓度、农杆菌与炭疽菌孢子共培养时间、抗生素配合使用抑制农杆菌污染等.所用的转化载体pBIG2RHPH2-GUS-GFP除了抗生素选择标记外还携带有融合GFP-GUS报告基因.转化106个孢子平均可获得约150～200个潮霉素抗性转化子.PCR检测表明,所有潮霉素抗性转化子菌株都能从其基因组DNA中扩增到转化载体中的GUS基因片段,而且都能产生GFP荧光或GUS染色阳性.转化子菌株经过连续继代培养后保持稳定.随机对36个转化子菌株进行致病性测定,发现1个转化子菌株对黄瓜致病性下降,1个丧失致病性,而大多数表现为野生型致病性.农杆菌介导转化瓜类炭疽菌体系的建立,为进一步构建大库容量的T-DNA插入突变体库、致病性突变体筛选以及致病性相关基因的克隆鉴定奠定了基础. 相似文献
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通过根癌农杆菌介导，将抗虫基因-豇豆胰蛋白酶抑制剂(Cowpea Trypsin Inhibitor，简称CpTI)基因导入花椰菜无菌苗的下胚轴和子叶中。卡那霉素(Kanamycin，简称Kan)的筛选浓度为15mg／L，抑制农杆菌生长的抗生素选用羧苄青霉素(Carbencillin，简称Carb)，浓度为500mg／L。对所获得的14株Kan抗性植株进行PCR扩增，结果显示有8株为阳性；对PCR阳性植株进行Southern分子杂交检测，结果证明CpTI基因已被整合到花椰菜植株的基因组中。 相似文献
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银白杨遗传转化中抗生素浓度优化的研究 总被引：8，自引：0，他引：8
该文探讨了卡那霉素、G418、羧苄青霉素和头孢霉素4种抗生素对银白杨不同培养阶段外植体生长、分化或生根的影响,确立了由农杆菌介导的银白杨遗传转化研究中抗生素种类和转化体的筛选浓度.结果表明:在叶片转化筛选阶段,卡那霉素和G418的适宜浓度分别为15和10 mg/L,羧苄青霉素和头孢霉素的适宜浓度为200～600 mg/L和200～400 mg/L;在抗性芽生根培养时,卡那霉素和G418浓度分别为20～25 mg/L和15～20 mg/L,羧苄青霉素和头孢霉素浓度为200～800 mg/L和200～600 mg/L.头孢霉素或羧苄青霉素的抑菌效果因农杆菌菌株的不同而存在差异,羧苄青霉素对农杆菌LBA4404抑制效果好,头孢霉素对农杆菌C58抑制效果理想. 相似文献
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旨在寻找一种应用于农杆菌介导的甘蓝型油菜转化体系中能替代羧苄青霉素(Carb)和头孢霉素(Cef)的高效抗生素。以甘蓝型油菜杂交种青杂5号的恢复系"1831R"为试验材料,对苗龄4~5 d的下胚轴进行侵染,培养并观察抑菌效果、芽再生状况以及对转化效率的影响。结果表明,较高浓度(500~600 mg/L)处理下,4种抗生素[Carb、Cef、特美汀(Tim)、阿莫西林(Amo)]都可以很好地抑制农杆菌的生长,浓度低于500 mg/L时,抑菌效果由大到小为CarbAmoCefTim。随着4种抗生素浓度的增加,芽再生率呈先增加后降低趋势,300 mg/L时达到最大,且在相同浓度下,芽再生率由大到小为AmoCarbTimCef。经草甘膦抗性筛选及PCR检测,转化体系中使用Amo的转化效率为1.9%,比Carb、Cef转化效率分别高58.33%、90.00%。因此,阿莫西林在有效脱除农杆菌的同时,对芽再生的抑制作用最小,并具有较高转化效率。本研究对提高农杆菌介导的油菜遗传转化效率、加快油菜种质资源创新将具有重要的作用和意义。 相似文献