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适用于RAPD分析的蚕卵基因组DNA快速提取方法的探讨 总被引：2，自引：0，他引：2
目前所报道的家蚕基因组DNA的提取方法(Sharp et a1,1988;Yang et al,1993;夏庆友等,1996;王韵等,1997)基本上都是先应用离子型表面活性剂(SDS)及蛋白酶K去除结合在核酸上的蛋白质,然后用酚、氯仿变性除去蛋白,RNase去除RNA,最后乙醇沉淀DNA获得.这些方法操作过程繁复、耗时多,需用酚、氯仿等有毒试剂.本实验尝试进行改良,寻找适用于大量样品作RAPD分析并简单、快捷、低成本的蚕卵基因组DNA的提取方法. 相似文献
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为了对新分离到的大口黑鲈溃疡综合征病毒(Largemouth bass ulcerative syndrome virus,LBUSV)的特征作进一步了解,促进LBUSV、DFV(Doctor fish virus)和LMBV(Largemouth bass vires)这类病毒的深入研究,本文克隆了LBUSV DNA甲基转移酶(DNA MTase)基因约200 bp的保守核心片段,用基因组步移的方法扩增到了核心片段的侧翼序列,获得了DNA MTase基因的编码区全长序列.序列分析表明,DNA MTase基因开放阅读框共663 bp(GenBank登录号:GU256634),编码220个氨基酸.结构域分析显示,LBUSV DNA MTase蛋白具有4个保守的DNA MTase结构域Ⅰ、Ⅳ、Ⅵ和Ⅷ,以及辅酶结合位点、底物结合位点和DNA结合位点等DNA MTase活性位点,其中的脯氨酸-脯氨酸-半胱氨酸三肽是潜在的催化位点.另外,本文还根据DNA MTase基因开放阅读框设计引物,PCR扩增和酶切后插入到pBV220载体中,经转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5a,温度诱导和SDS-PAGE检测,重组菌在分子量25 kD处有一条特异蛋白带,重组蛋白约占菌体总蛋白的30%.研究结果推测,该基因编码的蛋白具有DNA甲基化的功能,该病毒的分类地位为虹彩病毒科蛙病毒属. 相似文献
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为了找到提取土壤微生物总DNA的最佳方法,通过OD值检验、凝胶电泳、PCR和DGGE分析,比较了Reddy法、基于DNAout kit试剂盒改进的实验方法、以及Kuske修订法、Edgcomb改进法、SDS高盐提取法、Eichner调整法等常用的不同土壤微生物基因组的DNA提取方法在亚热带地区长期免耕紫色水稻土水稳性团聚体0.25～2.0 mm粒径上的提取效果.结果表明,6种方法都可以从团聚体中提取到长度大于23.1 kb的DNA片段,但不同方法提取的DNA的产量存在明显差异,土壤总DNA均不需纯化就可以用于PCR扩增,使用细菌16S rDNA基因V3区的通用引物可扩增得到相应的片段.研究表明,改进的DNAout kit试剂盒法是长期免耕紫色水稻土水稳性团聚体中微生物基因组DNA的最佳提取方法. 相似文献
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坛紫菜DNA的提取与快速纯化(简报) 总被引：2，自引：0，他引：2
由于藻胶(多糖) 的干扰,紫菜DNA 的提取、纯化非常困难. Kitade 等( 1996)曾建立了一个提取条斑紫菜高纯度DNA的程序,其中包括液氮破碎、CsCl密度梯度离心及CTAB处理等复杂的步骤,不是一个简便的常规方法.本研究以中国特有的坛紫菜为材料,拟建立其简便可靠的DNA提取与纯化方法,以获得高纯度紫菜DNA,为进行紫菜RFLP及AFLP等研究打下基础. 相似文献
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自1980年国外多名学者采用外源DNA直接导入技术,成功地实现了矮牵牛花色变异子代,玉米叶斑病抗性转移等.70年代中期,我国学者周光宇首先提出外源DNA导入高等植物的受精胚囊,以创造变异的设想.据此,将不同品种、不同种、不同科的外源DNA或目的基因导入棉花、水稻等获得突破性进展.作者从1992年开始,以人参为受体,西洋参种子的DNA为供体,进行了外源DNA直接导入方法的研究,旨在探讨药用植物分子育种的新途径,为人参抗病分子育种奠定基础. 相似文献
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为研究纳米银对PCR体系中DNA合成的影响及其作用的分子机制,把不同粒径(38、61、83和130nm)、不同浓度(5、10、25、50、100和250 μg/mL)的纳米银加入PCR体系中,观察纳米银粒子对DNA合成量的影响;并用紫外可见光谱方法分析其作用机制.结果显示,38和61 nm纳米银对PCR体系中的DNA合成的影响明显强于83和130nm纳米银组,抑制作用呈现较为明显的粒径-效应关系.在不同浓度纳米银对PCR体系中DNA合成量的影响中发现,纳米银浓度≥10 μg/mL时,纳米银可明显抑制PCR体系中的DNA合成,且其抑制作用呈现较为明显的剂量-效应关系.综合琼脂糖凝胶电泳和紫外可见光谱,认为纳米银抑制DNA合成的主要原因是对聚合酶、引物和模板的吸附作用.并认为纳米银粒子释放的少量的Ag+是纳米银影响DNA合成的又一关键性的因素. 相似文献
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以扁桃（Amygdalus conmmuis L.）幼叶为试材,通过7种保存方法并采用改良2×CTAB法、3×CTAB法和SDS法对其DNA进行提取,用琼脂糖凝胶电泳检测其DNA完整性,分光光度计测其产量和纯度,以探讨不同保存方法和不同提取方法对扁桃DNA提取质量的影响。结果表明,扁桃新鲜幼叶、压干幼叶后在-75℃保存、45℃烘干幼叶后在-75℃保存以及硅胶干燥幼叶后在-75℃保存三个月均可以用三种提取方法可获得完整的DNA,纯度和产量均高,其保存和提取方法简便易行且获得高质量DNA。扁桃鲜叶直接放在-20℃保存比-75℃保存更易获得DNA,而压干后的扁桃叶片-20℃保存三个月并采用SDS法提取,获得高产量、高纯度的DNA,不影响提取效果。SDS法和改良3×CTAB法均可获得扁桃DNA,但SDS法优于3×CTAB法,其操作简单、耗时少;改良2×CTAB法提取扁桃成功率较低,不稳定,产量比其它两种方法低。 相似文献
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牛支原体(Mycoplasma bovis是感染牛的一种重要的致病性病原体.本研究利用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立了牛支原体的快速检测方法.该方法以牛支原体保守性基因uvrC为靶序列设计了5条特异引物,在58℃等温条件下,60 min即可完成反应.LAMP方法能检测出20 pg牛支原体DNA,较PCR方法高100倍,用牛鼻支原体(M.bovirhinis)、无乳支原体(M.agalactiae)、精氨酸支原体(M.ariginini)、牛副流感病毒(BPIV)、牛腺病毒(BADV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)作特异性检测,两种方法均有很高的特异性.本研究还将荧光显色剂钙黄绿素(calcein)和Mn2+用于LAMP反应结果的可视化检测.临床鼻拭子样品煮沸后,可直接进行等温扩增,省去了DNA提取步骤.在对167个临床鼻拭子样本的检测中,LAMP方法检测结果阳性率(26.95％)高于PCR方法检测出阳性率(19.16％),这证明本研究所建立的方法,与PCR法比较更适于临床样品的检测.研究结果表明,LAMP方法具有操作简便、快速、高效、敏感、特异、经济等特点,适于基层实验室监测的广泛使用. 相似文献
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DNA技术在农业上的应用 总被引：1，自引：0，他引：1
房经贵 《农业生物技术学报》2014,(12)
随着分子生物学的发展,基于DNA分子的多种技术在提高作物育种效率、保护种质资源、改善农产品品质、提高农产品产量和保护生态环境等方面都显示出很大潜力,在农业生产中的作用日趋重要。为更好地了解DNA技术在农业上的应用情况,并达到促进DNA技术为现代化农业服务的目的,本研究对DNA分子标记技术、转基因技术以及基因信息等在农业上的应用进行了较有特点的介绍,并对其发展前景作了进一步展望。 相似文献