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1.
试验旨在探究黄芪多糖（Astragalus polysaccharide,APS）对LPS诱导的鸡巨噬细胞（HD11）炎症模型的抗炎效果和作用机制。用不同浓度的LPS刺激鸡巨噬细胞（HD11）,通过CCK8法检测细胞活力,实时荧光定量PCR检测白细胞介素-1β（IL-1β） mRNA表达的变化,以确定构建细胞炎症模型的LPS最适添加浓度。将HD11分为对照组（C）、脂多糖（LPS）组（L）、黄芪多糖（APS）组（A）和黄芪多糖抑制脂多糖组（A+L）,在LPS刺激后的2、6、12、24、48 h用实时荧光定量PCR法检测IL-1β、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、核转录因子（NF-κBp65）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和细胞因子信号转导抑制因子3（SOCS3） mRNA表达的变化,Western blotting法检测NF-κBp65、p38MAPK和SOCS3蛋白含量变化,ELISA检测IL-1β和TNF-α蛋白含量变化。细胞活力和IL-1β检测结果表明,构建细胞炎症模型的LPS最适添加浓度为0.5 μg/mL。实时荧光定量PCR结果表明,与对照组相比,L和A组IL-1β、TNF-α、NF-κBp65、p38MAPK和SOCS3 mRNA表达均显著升高（P<0.05）;与L组相比,A+L组在LPS刺激后的IL-1β、TNF-α、NF-κBp65和p38MAPK mRNA表达含量均显著降低（P<0.05）,SOCS3 mRNA表达显著增加（P<0.05）。Western blotting结果表明,与对照组相比,A组P-NF-κBp65/NF-κBp65、P-p38MAPK/p38MAPK和SOCS3/α-tubulin比值均显著增加（P<0.05）;与L组相比,A+L组P-NF-κBp65/NF-κBp65和P-p38MAPK/p38MAPK比值均显著降低（P<0.05）;A+L组SOCS3/α-tubulin比值显著升高（P<0.05）。ELISA结果表明,与对照组相比,L组IL-1β和TNF-α蛋白含量在2~48 h均显著增加（P<0.05）;与L组相比,A+L组IL-1β和TNF-α的蛋白含量在LPS刺激后12~48 h均显著降低（P<0.05）。以上结果表明,在LPS诱导的HD11细胞炎症模型中,APS通过促进SOCS3的表达抑制NF-κBp65和p38MAPK信号通路的过度活化,从而发挥抗炎作用。 相似文献
2.
研究旨在探讨单宁酸对猪卵母细胞体外成熟质量及其胚胎发育能力的影响。在猪卵丘卵母细胞复合体（COCs）体外成熟培养液中添加不同浓度（0、1、10、100 μg/mL）单宁酸培养42 h后,检测COCs的扩散程度和卵丘细胞扩散指数,统计COCs的体外成熟率,检测成熟卵母细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）、活性氧（reactive oxygen species,ROS）和生长分化因子9（growth differentiation factor 9,GDF9）的水平,并统计孤雌激活及体外受精胚胎48和168 h的卵裂率、囊胚率及囊胚总细胞数。结果显示,与对照组相比,10 μg/mL单宁酸组卵丘细胞扩散指数显著提高（P<0.05）,100 μg/mL单宁酸组显著降低（P<0.05）;1和10 μg/mL单宁酸组卵母细胞成熟率差异不显著（P>0.05）,100 μg/mL单宁酸组卵母细胞成熟率显著降低（P<0.05）;1和10 μg/mL单宁酸组GSH和GDF9水平显著提高（P<0.05）,ROS水平显著降低（P<0.05）。孤雌胚胎和体外受精胚胎发育能力结果显示,与对照组相比,各单宁酸组卵裂率差异不显著（P>0.05）,10 μg/mL单宁酸组孤雌胚胎囊胚率及体外受精胚胎囊胚率显著提高（P<0.05）,100 μg/mL单宁酸组孤雌胚胎囊胚细胞数及体外受精胚胎囊胚细胞数均显著低于其他各组（P<0.05）。以上结果表明,10 μg/mL单宁酸可通过提高卵丘细胞扩散能力及GSH和GDF9水平、降低卵母细胞内ROS水平,改善猪卵母细胞成熟质量,提高孤雌胚胎及体外受精胚胎的发育能力。 相似文献
3.
本研究旨在通过高效液相色谱-质谱联用（LC-MS）和高效液相色谱（HPLC）技术对沙冬青种子总黄酮主要活性成分进行分析及含量测定,并探索沙冬青种子总黄酮对小鼠免疫功能的影响。采用LC-MS分析沙冬青种子总黄酮主要活性成分,在HPLC优化条件下用标准品对主要活性成分的含量进行测定;采用MTT法和ELISA试剂盒检测沙冬青种子总黄酮对小鼠脾淋巴细胞增殖和IL-2、IL-4生成的影响,以及总黄酮对肝脏KCs细胞的增殖和NO、NOS含量的影响;运用定量溶血分光光度法和血清溶血素HC50测定法检测不同浓度沙冬青种子总黄酮对小鼠抗体生成细胞和血清溶血素的影响。结果显示,沙冬青种子总黄酮中主要活性成分为芒柄花素、7,3'-二羟基-4'-甲氧基黄酮、黄豆黄素和穗花杉双黄酮,其中,芒柄花素含量高达52.48%,其次为7,3'-二羟基-4'-甲氧基黄酮,含量为11.20%。在2.5~100 μg/mL总黄酮作用下,沙冬青种子总黄酮对脾淋巴细胞的增殖和细胞因子的产生具有明显的促进作用,尤其在20 μg/mL时脾淋巴细胞增殖率和IL-2的分泌量分别高达217.62%和159.661 pg/mL,与空白对照组相比差异极显著（P<0.01）;在40 μg/mL时,脾淋巴细胞IL-4的分泌量高达149.274 pg/mL,极显著高于空白对照组（P<0.01）。沙冬青种子总黄酮对KCs细胞的增殖及NO和NOS分泌也具有明显促进作用,在60 μg/mL时,与空白对照组相比,KCs细胞增殖率达67.77%,NO和NOS的分泌量分别达180.106和29.942 μmol/L（P<0.01）。此外,沙冬青种子总黄酮能明显促进小鼠体内抗体生成细胞和血清溶血素含量的增加。综上表明,沙冬青种子总黄酮主要活性成分为芒柄花素和7,3'-二羟基-4'-甲氧基黄酮。沙冬青种子总黄酮对小鼠免疫活性细胞的增殖、相关免疫细胞因子和抗体的产生与释放等都具有显著的促进作用。 相似文献
4.
试验旨在探索α7烟碱乙酰胆碱受体（α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR）的高亲和力激动剂烟碱对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导的兔子宫内膜上皮炎症的作用机制。分离发情后期兔的子宫内膜上皮细胞,用100 ng/mL LPS对细胞进行炎性刺激12 h。用CCK8法检测不同浓度烟碱（5、10和20 μg/mL）对细胞存活率的影响,筛选合适浓度的烟碱进行后续试验。将细胞分为对照组（CON）、LPS、LPS+烟碱、LPS+烟碱+甲基牛扁碱（MLA）（α7nAChR的特异性颉颃剂）组,通过ELISA法检测细胞培养上清液中白细胞介素-1β（interleukin 1β,IL-1β）、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）、前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）和前列腺素F2α（PGF2α）的含量。试验成功分离兔子宫内膜上皮细胞,且传至第5代仍保持良好的生长状态。CCK8检测结果显示,20 μg/mL烟碱组细胞存活率显著降低（P<0.05）,10 μg/mL烟碱对细胞存活率无显著影响（P>0.05）,所以选择10 μg/mL烟碱进行后续试验。ELISA结果显示,与对照组相比,LPS组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、PGE2和PGF2α的含量显著增加（P<0.05）;与LPS组相比,LPS+烟碱组显著降低IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、PGE2和PGF2α的含量（P<0.05）,LPS+烟碱+MLA组炎性因子和前列腺素的含量差异不显著（P<0.05）。以上结果表明,烟碱对LPS诱导的兔子宫内膜上皮细胞分泌IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、PGE2和PGF2α具有下调作用,推测烟碱通过α7nAChR介导炎性因子和前列腺素分泌下调而发挥抗炎作用,该结果可为研究α7nAChR作为子宫内膜炎治疗靶点的药物选择提供参考。 相似文献
5.
为探究白藜芦醇（RSV）对玉米赤霉烯酮（ZEA）中毒小鼠肝脏损伤是否具有保护作用,试验将40只清洁级雄性BALB/c小鼠随机分为5组：对照组（生理盐水）、ZEA组（40 mg/kg）、不同浓度的RSV （50、100或200 mg/kg）与ZEA （40 mg/kg）共处理组,每组8只,各组均灌胃给药,试验期12 d。试验结束后采集小鼠肝脏样品,计算肝脏系数,采用苏木素-伊红（HE）染色和免疫组织化学染色法观察各组肝脏病理变化;检测肝脏NF-κB蛋白表达;比色法检测肝脏组织中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性及血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和乳酸脱氢酶（LDH）活性,ELISA法检测血清中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和IL-1β含量。结果显示,与对照组相比,ZEA组小鼠肝组织发生明显病理学变化;与ZEA组相比,不同浓度RSV与ZEA共处理组小鼠肝脏组织病理学变化都有所减轻。免疫组织化学结果显示,与对照组相比,ZEA组肝脏NF-κB蛋白表达增多;与ZEA组相比,不同浓度的RSV与ZEA共处理组肝脏NF-κB蛋白表达均有下降。与对照组相比,ZEA组肝脏系数和肝脏组织MDA含量极显著升高（P<0.01）,肝脏组织SOD和CAT活性显著或极显著降低（P<0.05;P<0.01）,血清中AST、ALT和LDH活性,IL-6、TNF-α和IL-1β含量均极显著升高（P<0.01）。与ZEA组相比,不同浓度RSV与ZEA共处理组肝脏组织CAT活性显著或极显著升高（P<0.05;P<0.01）,血清中AST、ALT和LDH活性及IL-6和IL-1β含量显著或极显著降低（P<0.05;P<0.01）;50 mg/kg RSV与ZEA共处理组肝脏组织SOD活性和血清中TNF-α含量分别显著升高（P<0.05）和极显著降低（P<0.01）;100和200 mg/kg RSV与ZEA共处理组肝脏系数和肝脏组织MDA含量显著或极显著降低（P<0.05;P<0.01）。结果表明,ZEA对小鼠肝脏有严重的氧化及炎症损伤作用,RSV对ZEA中毒的肝损伤具有一定保护作用,尤其以100 mg/kg RSV保护效果最佳。 相似文献
6.
【目的】 研究c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125对仔猪原代肝细胞药物性损伤的缓解作用及机理。【方法】 通过二步灌流法获得仔猪原代肝细胞，将肝细胞分为对照组(C)、JNK抑制剂组(SP)、模型组(M)和治疗组(T)，每组6个重复。对照组细胞不添加药物，SP组用2 μmol/L SP600125处理细胞，M组用80 μg/mL脂多糖(LPS)+20 μg/mL恩诺沙星(ENR)处理细胞，T组用80 μg/mL LPS+20 μg/mL ENR +2 μmol/L SP600125处理细胞，处理12 h后，收集上清测定谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性，收集细胞测定谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性、丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量及肝细胞核因子-1(hepatocyte nuclear factor 1，HNF-1)和谷胱甘肽-S-转移酶A1(glutathione S-transferase alpha 1，GSTA1)mRNA的相对表达量。【结果】 与对照组相比，M组肝细胞培养液上清中ALT和AST活性均显著升高(P<0.05)，M组肝细胞中GSH-Px和SOD活性、HNF-1和GSTA1 mRNA的相对表达量均极显著降低(P<0.01)，MDA含量极显著提高(P<0.01);与M组相比，T组肝细胞培养液上清中ALT、AST的活性均显著下降(P<0.05)，T组肝细胞中GSH-Px和SOD活性、HNF-1和GSTA1 mRNA的相对表达量均显著提高(P<0.05)，MDA含量显著降低(P<0.05)。【结论】 JNK抑制剂SP600125可通过调控细胞的抗氧化能力及HNF-1和GSTA1的表达缓解由LPS/ENR导致的仔猪原代肝细胞的药物性损伤。 相似文献
7.
旨在探讨肾复康颗粒对鸡肾肿的抗炎机制。将90只健康雏鸡分为空白组（15只）和试验组（75只）,试验组通过饲喂自制高钙高蛋白饲料人工复制鸡肾肿模型,造模成功后,随机分为模型组、阳性药物组、肾复康颗粒高、中、低剂量组,每组15只,肾复康颗粒高、中、低剂量组分别饮水给药肾复康颗粒2.0、1.0、0.5 g·L-1,阳性药物组饮水给药苍蓝口服液1.0 mL·L-1,模型组饮水给予生理盐水1.0 mL·L-1,2次·d-1,连用5 d。分别于造模前、后以及末次给药后2 d进行翅下静脉采血,分离血清,采用ELISA法检测血清IL-1、TNF-α、MCP-1、TGF-β1的含量变化;采用RT-PCR法检测肾IL-1R、IκBα、NF-κBp65 mRNA的转录。结果显示：与空白组相比,模型组雏鸡血清IL-1、TNF-α、MCP-1、TGF-β1含量显著升高（P<0.05）,肾中IL-1R、NF-κBp65 mRNA转录量极显著升高（P<0.01）,肾中IκBα mRNA转录量极显著降低（P<0.01）。饮水给药治疗后,肾复康颗粒高、低剂量组和阳性药物组雏鸡血清IL-1、TNF-α、MCP-1、TGF-β1含量显著降低（P<0.05）;肾复康颗粒中剂量组肾中IL-1R、NF-κBp65 mRNA转录量极显著降低（P<0.01）,肾中IκBα mRNA转录量极显著增加（P<0.01）。肾复康颗粒通过降低肾肿鸡血清中IL-1、TNF-α、MCP-1、TGF-β1中含量,抑制IL-1R/NF-κB信号通路,从而发挥抗炎作用。 相似文献
8.
为研究沙门菌引致IPEC-J2损伤的分子机制,试验用沙门菌刺激IPEC-J2,在特定时间收集细胞及其培养上清液,采用荧光定量PCR或ELISA检测细胞紧密连接蛋白、炎症反应相关蛋白和细胞增殖相关蛋白的表达以及乳酸脱氢酶（LDH）含量,以确定该沙门菌能够引起IPEC-J2损伤,并进一步采用NF-κB抑制剂和小干扰RNA预处理IPEC-J2,分析了NF-κB/β-catenin信号通路在沙门菌引起IPEC-J2损伤中的调控作用。结果显示,与对照组相比,沙门菌感染组紧密连接蛋白ZO-1和Occludin mRNA表达量在感染后6和24 h呈极显著下降（P<0.01）;促炎性细胞因子TNF-α和IL-8的生成量以及LDH释放量在感染后6、12和24 h呈极显著上升（P<0.01）,NF-κB p65的mRNA表达在感染后1、3和6 h也呈极显著上升（P<0.01）;细胞增殖蛋白cyclin D1和c-Myc的mRNA表达在感染后6、12和24 h呈显著下降（P<0.05）,其转录调控因子β-catenin的mRNA表达在感染后24 h呈极显著下降（P<0.01）。与沙门菌感染组相比,抑制剂+沙门菌感染组ZO-1和Occludin的mRNA表达量在12和18 h呈极显著增高（P<0.01）,而NF-κB p65、TNF-α和IL-8的表达以及LDH释放量在各时间点均呈极显著降低（P<0.01）;siRNA-β-catenin+沙门菌处理组的β-catenin、cyclin D1和c-Myc的表达量在各时间点均呈极显著降低（P<0.01）,LDH释放量在6和12 h均呈极显著增加（P<0.01）,但在18 h增加不显著（P>0.05）。本试验结果表明,沙门菌激活了NF-κB信号通路,促进了促炎性细胞因子的生成,加重了细胞损伤;同时,沙门菌抑制了β-catenin信号通路,降低了细胞增殖蛋白和紧密连接蛋白的表达,影响了细胞修复,从而出现细胞损伤与细胞修复之间的失调,最终呈现出细胞损伤。本试验从NF-κB/β-catenin信号通路的角度揭示了沙门菌引致IPEC-J2损伤的分子机制。 相似文献
9.
本研究旨在探索免疫抑制剂环孢菌素A（CsA）对LPS诱导的子宫内膜基质细胞中促炎症细胞因子白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素6（IL-6）表达的影响。母兔子宫内膜基质细胞经过体外培养和鉴定后,用1 μg/mL脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导构建子宫内膜基质细胞炎症模型,0 μg/mL LPS处理作对照组。用0、50、100、200和500 ng/mL CsA处理后,分别检测IL-1β和IL-6的表达水平。结果显示,与对照组相比,添加LPS显著诱导IL-1β和IL-6在子宫内膜基质细胞中的表达（P<0.05）,CsA对子宫内膜基质细胞IL-1β和IL-6的表达无影响,但50、100、200和500 ng/mL CsA均极显著地抑制1 μg/mL LPS诱导的IL-1β和IL-6表达的上调（P<0.01）。因此,在子宫内膜基质细胞中,一定剂量的CsA能够有效抑制LPS诱导的子宫内膜基质细胞的免疫应激。本研究为雌性生殖道遭受革兰氏阴性菌感染引起免疫应激后用CsA治疗的可行性提供了依据,但在临床上的应用及其机制尚需进行深入研究。 相似文献
10.
试验旨在探讨藏红花素（crocin）的抗氧化应激作用对小鼠卵母细胞体外成熟及后续胚胎发育能力的影响。在体外成熟（IVM）培养液中添加不同浓度藏红花素（0、5、10、15、20、25、30 μmol/L），小鼠卵母细胞在体外成熟培养12 h后，检测卵母细胞第一极排出情况、卵母细胞胞质内活性氧（ROS）和谷胱甘肽（GSH）含量，并进行体外受精（IVF）；体外受精后6 h统计受精率，24 h统计卵裂率，96 h统计囊胚率。结果显示，与对照组相比，10、15 μmol/L藏红花素显著提高了卵母细胞第一极体排出率（P<0.05）；当藏红花素浓度继续增加时，卵母细胞的第一极体排出率下降，30 μmol/L藏红花素显著降低了卵母细胞第一极体排出率（P<0.05）；5、10、15 μmol/L藏红花素均显著降低了卵母细胞ROS含量（P<0.05），10、15 μmol/L藏红花素均显著提高了卵母细胞GSH含量（P<0.05）。与对照组相比，10 μmol/L藏红花素组受精率、卵裂率、囊胚率差异均不显著（P>0.05），15、20、25、30 μmol/L藏红花素均显著降低受精率和囊胚率（P<0.05），对卵裂率影响不显著（P>0.05）。结果表明，在小鼠卵母细胞体外成熟培养液中添加10 μmol/L藏红花素可以显著增加第一极体排出率，显著降低卵母细胞ROS含量、提高卵母细胞GSH含量，但对受精后的胚胎发育无显著影响。 相似文献
11.
CHEN Mutian REN Yan ZHANG Lei LI Jing XIE Sijie ZHANG Yan ZHANG Ming MEI Xiuli 《中国畜牧兽医》2007,47(10):3351-3360
The aim of this study was to investigate the effect of immunosuppressant cyclosporine A (CsA) on the expression of proinflammatory cytokines interleukin 1 beta (IL-1β) and interleukin 6 (IL-6) in LPS-induced uterine endometrial stromas cells (ESCs).After cultured and identified in vitro,the inflammation model of the ESCs of female rabbits were successfully constructed by 1 μg/mL lipopolysaccharide (LPS),and 0 μg/mL LPS was used as the control.Then the expression levels of IL-1β and IL-6 were detected after treatment with 0,50,100,200 and 500 ng/mL CsA.The results showed that LPS significantly induced the expression of IL-1β and IL-6 in ESCs (P<0.05).Although CsA had no effect on the expression of IL-1β and IL-6,but 50,100,200 and 500 ng/mL CsA extremely significantly inhibited the upregulation of IL-1β and IL-6 induced by 1 μg/mL LPS (P<0.01).It suggested that a certain dose of CsA could effectively inhibit the LPS-induced immune stress in ESCs.This study provided a basis for the feasibility of CsA treatment after the genital tract of female infected by gram-negative bacteria,but its clinical application and mechanism still need to be further studied. 相似文献
12.
紫锥菊是一种重要的免疫增强剂,常作为替抗药物用于饲料添加剂,但其作用机制有待进一步研究。本试验旨在研究紫锥菊对免疫抑制鸡免疫功能的影响及其机制。将120羽7日龄的雏鸡随机均分为：对照组、环磷酰胺组、紫锥菊组、紫锥菊+环磷酰胺组(联合组)。环磷酰胺组和联合组雏鸡连续3 d胸肌注射生理盐水配制的环磷酰胺溶液(80 mg·kg-1),同时对照组和紫锥菊组连续3 d注射等量生理盐水,除紫锥菊组和联合组每天饲喂含紫锥菊全草粉末(含量为1%)的基础日粮外,其余各组雏鸡饲喂基础日粮,每天称重并记录,连续饲喂21 d。试验结束时,分析体重及脾脏指数的变化,检测炎性因子(NF-κB、IκB、IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、IFN-γ)和TLR家族(TLR2、TLR4、TLR7、MyD88)基因mRNA及蛋白的表达含量。结果显示,紫锥菊处理提高了雏鸡的生长性能,环磷酰胺抑制了雏鸡的生长并显著降低了脾脏系数(P<0.05),且环磷酰胺组脾组织病理变化明显,而在联合组中上述病理变化得到缓解。与对照组相比,环磷酰胺组的NF-κB、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TLR2、TLR4、TLR7、MyD88的mRNA水平均显著下调(P<0.05、P<0.01或P<0.001),而联合组相比于环磷酰胺组,除TLR7外,上述基因mRNA表达量均显著上调(P<0.05、P<0.01或P<0.001)。此外,紫锥菊的添加显著提高了炎性因子和TLR家族相关蛋白的表达水平。结果表明：紫锥菊可通过调控TLR4/NF-κB通路增强免疫抑制鸡的免疫功能。 相似文献