猪流行性腹泻病毒SD201604株的分离鉴定及致病性研究     

《中国畜牧兽医》2018,(11)

本研究旨在获得猪流行性腹泻病毒(PEDV)分离株,并对其致病性进行研究。应用Vero细胞从山东某猪场腹泻病料中进行病毒分离,通过细胞病变、免疫荧光试验、电镜观察和RT-RCR进行鉴定,并对分离株的S基因序列进行分析;应用10~(3.5) TCID_(50)/mL分离株口服接种3日龄仔猪并观察临床症状和病理变化;用不同滴度的分离株分别口服接种3日龄仔猪(3mL/只),统计各组仔猪的死亡率,确定最小致死量。结果显示,成功分离到1株PEDV,命名为PEDV SD201604株。该分离毒株能在Vero细胞上增殖,产生细胞病变,传代至F6代时病毒滴度可达10~(3.5) TCID_(50)/mL,免疫荧光试验和RT-RCR检测均为PEDV阳性。电镜观察可见直径大小约为100nm的病毒粒子,有明显的囊膜和纤突,具有PEDV病毒粒子典型的形态特征,确定分离株为PEDV。S基因序列分析显示,分离株为国内流行的PEDV变异株。动物回归试验结果显示,口服感染该分离株的5头3日龄仔猪全部出现典型的PED临床症状和病理变化,其中3头死亡。最小致死量试验结果表明,口服感染3 mL病毒含量为10~(4.5) TCID_(50)/mL的分离株可使仔猪全部死亡。本试验结果可为PEDV的分离鉴定及生物学研究提供参考与借鉴。  相似文献   

一株变异型猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及其灭活疫苗的免疫效力试验     

常小云  赵润泽  同珂  陈少贤  刘国平 《中国畜牧兽医》2020,47(11):3651-3658

本研究旨在分离猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）变异株,通过悬浮培养工艺制备成高效价的PEDV灭活疫苗。2017年从中国多个规模化猪场采集腹泻病死仔猪的小肠及其内容物200份,通过RT-PCR方法进行PEDV检测并测序,筛选一株PEDV变异株,将其在2 L反应器里悬浮培养的Vero细胞上进行病毒分离与传代培养,收获的病毒液鉴定后测定TCID₅₀,经甲醛灭活后加入氢氧化铝胶佐剂配制成PEDV灭活疫苗,对其物理性状、稳定性、黏度、无菌等进行检验,检验合格后免疫妊娠母猪及所产仔猪,对其安全性和免疫效力进行研究。结果显示,200份病料中有86份为PEDV阳性,将筛选的PEDV变异株病料在Vero细胞上传至第5代时出现细胞病变,传至第10代收获病毒液,经鉴定后确定为PEDV变异毒株,并命名为PEDV-GF10株。收获的病毒液浓缩后测得病毒滴度可达1×10^8.0 TCID₅₀/mL。疫苗检验合格后在母猪产前40和25 d时试验组后海穴肌内注射4 mL疫苗,空白组不免疫,结果显示试验组与空白组母猪的生产情况无明显差异,所产3日龄仔猪分别免疫不同剂量后体温无显著差异,表明该疫苗对母猪和仔猪均安全性良好。随机挑选试验组与空白组母猪所产3日龄仔猪各20头,分别口服4 mL PEDV-F10病毒培养物,空白组母猪所产仔猪在攻毒24 h后PEDV发病率为100%,抗体均为阴性;试验组母猪所产仔猪只有10%出现了轻微的腹泻症状,仔猪获得了高达90%保护率,且仔猪被动免疫后抗体能持续至35 d以上。以上结果表明,PEDV-GF10变异株通过悬浮细胞培养后病毒滴度显著提高,研制的PEDV-GF10株灭活疫苗安全有效,能够对中国的PEDV变异株达到有效防控,为国内PED防控提供了理论依据。  相似文献   

一株猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及其致病性研究     

《动物医学进展》2021,42(7)

应用Vero细胞对江苏省某猪场腹泻病料进行病毒分离,通过细胞病变观察、RT-PCR扩增、动物回归试验对病毒进行鉴定,通过半数致死量测定病毒的致病性。结果显示,成功分离到1株猪流行性腹泻病毒(PEDV),命名为PEDV JS14株。该毒株在Vero细胞上盲传至4代出现细胞病变,主要表现为细胞面粗糙、颗粒增多,细胞多核呈空斑样,细胞脱落等病变特征;分离株口服感染5头7日龄仔猪全部出现典型的临床症状,其中4头死亡。F6代培养物以不同滴度口服接种15头7日龄的仔猪,其半数致死量为10~(5.0)TCID_(50)/mL。结果表明,本次分离的PEDV为强毒株,为进一步的生物学特性研究奠定了基础。  相似文献   

猪流行性腹泻病毒JX16株的分离鉴定及体外传代对其毒力的影响     

唐融志  陈智  焦安琪  赵鲁  于江  张玉玉  孙文博  张树金  曾昊  彭军  吴家强 《中国畜牧兽医》2019,46(6):1783-1791

2010年中国新出现了以新生仔猪高发病率、高死亡率为主要特征的变异株。为了明确山东地区猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）变异株特征，本试验利用Vero细胞对莒县某猪场的腹泻病料进行了病毒分离和体外传代培养。通过光学显微镜和细胞超薄切片观察、RT-PCR检测、间接免疫荧光试验、S基因序列进化分析、滴度测定和致病力试验进行病毒序列及特征分析，并探究接毒后细胞脱落时间的变化。光学显微镜观察发现，该病毒感染Vero细胞后能引起典型的合胞体病变；细胞超薄切片观察发现，病毒粒子多呈致密核芯，能引起宿主细胞线粒体肿胀，溶解；RT-PCR检测和间接免疫荧光试验结果证实其为PEDV，最终通过测序证实该毒株为变异毒株。体外传代培养至100代过程中，随着病毒代次升高，其对细胞适应性不断增强。接毒后细胞脱落时间由48 h逐渐缩短至17 h，病毒滴度由6代时的10^5.3TCID₅₀/mL逐渐升高至100代的10^7.5TCID₅₀/mL。致病力试验结果显示，病毒毒力随代次升高逐渐下降，40代时对仔猪已无致病力。本试验结果为PEDV突变株致病基因的确定及疫苗的研发奠定了基础。  相似文献   

Ⅰ群4型禽腺病毒Y17215-1株体外增殖规律及免疫原性研究     

李秀丽  王利丽  李富强  田向学  路超  任卫科  江珊  张莉  鄢明华 《中国动物传染病学报》2024,(2):21-26

为探讨禽腺病毒4型分离株Y17215-1的体外增殖特性和免疫原性,本研究以LMH细胞为模型,摸索Y17215-1株最佳接种剂量和收获时间;通过活毒滴鼻接种和灭活疫苗肌肉注射的方式免疫SPF鸡,测定其免疫原性。结果显示：Y17215-1株0.1 MOI接种LMH细胞,培养48～72 h病毒滴度达到峰值10^8.625 TCID₅₀/mL。该病毒经肌肉注射对42日龄SPF鸡具有较强致病性,LD₅₀为10^3.000 TCID₅₀/0.2 mL。以10^7.676 TCID₅₀的Y17215-1株滴鼻免疫21日龄SPF鸡,免疫后7 d 100%试验鸡产生中和抗体,14 d达到高峰。以Y17215-1株制备灭活疫苗肌肉注射免疫21日龄SPF鸡(10^7.676 TCID₅₀/羽),免疫后7 d 70%试验鸡产生中和抗体,21 d达到高峰。在免疫后21 d用1000LD₅₀的Y17215...  相似文献   

猪德尔塔冠状病毒TJ1株的分离鉴定及生物学特性分析     

郑丽  李秀丽  鄢明华  任卫科  张蕾  路超  田向学  韩伟 《中国畜牧兽医》2018,45(1):219-224

本研究旨在获得猪德尔塔冠状病毒（porcine deltacoronavirus,PDCoV）分离株,并对其生物学特性进行探讨。将RT-PCR检测PDCoV阳性样品无菌处理后接种猪肾（PK-15）细胞并连续传代培养,通过细胞病变、M基因序列分析及耐热、耐酸等试验对细胞培养物进行鉴定,采用Reed-Muench法测定PDCoV的TCID₅₀,应用5×10^4.0 TCID₅₀/mL的病毒悬液接种11日龄仔猪并观察临床症状。结果显示,试验成功分离到1株PDCoV,将其命名为TJ₁株,该病毒的第5代病毒效价为10^4.5 TCID₅₀/mL;TJ₁株对脂溶剂氯仿和乙醚不敏感,耐酸,在pH 3.0的环境下稳定,对热较敏感,在50℃条件下1 h便可将其灭活;其M基因和GenBank中已发表的PDCoV M基因核苷酸序列同源性为94%~99%;致病力试验结果显示,该病毒可引起仔猪发生腹泻,发病率100%。本研究成功分离了1株PDCoV毒株TJ₁株,对该分离株生物学特性进行初步研究,为进一步开展PDCoV相关研究奠定了基础。  相似文献   

两株猪伪狂犬病病毒变异株的分离鉴定及gB、gC和gE基因的分子特征分析     

李翔  郭振华  阮海宇  乔松林  张以芳  张改平 《中国畜牧兽医》2019,46(3):881-890

为探明近年来河南省猪伪狂犬病病毒(PRV)的遗传变异情况,本研究于2017年采集河南漯河和中牟地区疑似伪狂犬病发病养殖场送检的脑组织病料,通过细胞盲传、噬斑纯化、间接免疫荧光试验、Western blotting和透射电镜技术进行病毒分离鉴定。TCID₅₀法测定分离毒株的病毒滴度、生长曲线,通过小鼠感染试验测定分离毒株对小鼠的致死性。对gB、gC和gE基因进行PCR扩增、测序,并与参考毒株序列进行比对分析。结果显示,对PCR鉴定阳性的病料在PK-15细胞盲传后,两份病料在6代内均出现细胞病变,通过间接免疫荧光试验、噬斑纯化和透射电镜技术,成功分离鉴定了两株PRV,分别命名为HeN-LH株及HeN-YM株。分离毒株在PK-15细胞上的生长曲线显示,HeN-LH和HeN-YM株在感染后36 h病毒滴度分别可达10^8.35和10^6.63 TCID₅₀/mL。用不同浓度的病毒接种小鼠,结果显示,HeN-LH和HeN-YM株LD₅₀分别为10^2.13及10^3.25 TCID₅₀。对gB、gC和gE基因全长扩增测序后构建遗传进化树,结果显示,两株PRV毒株与Bartha、Fa和Ea等经典株的亲缘关系相对较远,而与2011年以来国内不同省份分离的PRV变异株亲缘关系较近。氨基酸序列比对分析显示,与其他变异株相似,gB、gC和gE基因均发生了多个氨基酸的变异,且在特定的位点存在特征性的氨基酸插入和缺失。本研究成功分离鉴定了两株PRV变异株,分离株对小鼠均表现出一定的致病性,本试验结果可为河南省伪狂犬病的防控工作和疫苗株的选择提供科学依据。  相似文献   

猪流行性腹泻病毒CH/GX/2015/750A株的分离鉴定及全基因组序列分析   总被引：2，自引：2，他引：0  

秦毅斌  卢冰霞  何颖  段群棚  李斌  陈忠伟  梁家幸  周英宁  苏乾莲  蒋冬福  赵武 《中国畜牧兽医》2018,45(1):178-188

本研究旨在获得可在细胞培养中稳定、有效生长增殖的猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）分离毒株,并对其全基因组序列进行测定分析。应用Vero细胞从广西腹泻仔猪肠道内容物中进行病毒分离,通过细胞病变和RT-PCR对细胞培养物进行鉴定,应用下一代测序技术对分离毒株全基因组序列进行测定。结果显示,成功分离到1株PEDV,命名为CH/GX/2015/750A。该毒株可稳定有效地在Vero细胞生长增殖,并引起典型的细胞病变;已在Vero细胞连续传代25代,病毒滴度随着传代次数的增加逐渐提高并稳定在10^7.50TCID₅₀/mL。该毒株全基因组序列长28 038 bp;与22个参考毒株的全基因序列比对显示,核苷酸同源性为96.8%~99.8%,其中与YC2014株同源性最高,为99.8%。全基因组和S基因系统进化分析显示,PEDV CH/GX/2015/750A分离毒株属于Ⅱa亚群,与YC2014、PEDV-WS等变异毒株亲缘关系密切。结果表明,本研究分离获得的CH/GX/2015/750A毒株是PEDV地方流行变异毒株。  相似文献   

猪伪狂犬病病毒LC株的分离鉴定及其重要功能基因的进化分析     

刘志成  李新建  张建峰  沈海燕  孙俊颖  张春红 《中国畜牧兽医》2017,44(11):3278-3286

为确诊广东某猪场母猪流产发病原因,本研究收集该猪场流产死胎的脑、淋巴结、肺脏混合液,进行PCR鉴定、病毒分离培养、半数组织培养感染剂量（tissue culture infective dose,TCID₅₀）测定、猪伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）重要功能基因（gB、gC、gD、gE）序列测定和进化分析及动物回归试验。结果显示,病料混合液为PRV阳性,接种Vero细胞传至第3代即出现稳定的细胞病变（CPE）,第5代TCID₅₀达到10^-6.8/0.1 mL,PRV gB、gC、gD、gE基因序列测定、同源性及进化树分析显示为,PRV中国变异株,命名为LC株。动物试验显示,LC株对12周龄猪具有一定致病性,可形成PRV典型临床症状及病理变化。本研究分离到一株PRV流行毒株,推测当前使用疫苗Bartha-K61株尚无法完全控制新毒株的流行。  相似文献   

新生仔猪大批死亡疫情诊断及HP-PRRSV的分离鉴定     

陈冰  马玲  刘金凤  林俊  张健  吴健敏  白安斌 《中国畜牧兽医》2016,43(2):520-526

本试验通过对高发病率、高死亡率的新生仔猪腹泻病例进行诊断与控制,以期为该病的防控提供参考和借鉴.2013年1月初广西玉林某规模猪场发生以2~3日龄仔猪腹泻、呕吐、精神不振为主的疫情,发病率80%,死亡率80%~100%.为确定此次疫病的病因,本研究从发病猪群中采集10 份病死猪小肠、脾脏、肺脏、淋巴结等组织进行细菌分离、PCR检测、病毒分离、病毒效价(TCID₅₀)测定、基因测序与分析.检测结果显示猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)均为阳性,猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PRoV)均为阴性,未分离到致病菌.克隆测序分离株的ORF7和Nsp2全基因序列,结果显示分离株为美洲型PRRSV,ORF7基因全长为372 bp,编码123个氨基酸;Nsp2基因全长为2 850 bp,编码950个氨基酸,其中Nsp2基因在第481、532—560位发生了共30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV(HP-PRRSV) JXA1株Nsp2基因缺失特征一致,属于HP-PRRSV分离株.匀浆病料接种Marc-145 细胞,48 h开始出现 PRRSV 特征性病变,TCID₅₀为10^-5.75/0.1 mL.推测此次新生仔猪大批死亡主要是PEDV感染后继发高致病性猪繁殖与呼吸综合征所致.  相似文献   

Isolation and Identification of a Variant Porcine Epidemic Diarrhea Virus and the Immune Efficacy of Its Inactivated Vaccine     

CHANG Xianyun  ZHAO Runze  TONG Ke  CHEN Shaoxian  LIU Guoping 《中国畜牧兽医》2007,47(11):3651-3658

This study was aimed to isolate a mutant strain of porcine epidemic diarrhea virus and prepare a PEDV inactivated vaccine with high valence by suspension culture process for immunizing against PEDV effectively in China.200 small intestines and theirs contents of diarrhea piglets died of diarrhea,collected from many large-scale pig farms in China,were detected by RT-PCR and sequenced,a mutant strain of porcine epidemic diarrhea virus was selected and put on the suspension-cultured Vero cells in a 2 L reactor for virus isolation and continuous cell culture,the harvested virus suspension,which was identified and determined TCID₅₀,was inactivated by formaldehyde and mixed with aluminum hydroxide gel adjuvant to prepare PEDV inactivated vaccine.After its physical behavior,stability viscosity,sterility test were checked out,the safety and immune efficacy were studied by immunizing the pregnant pigs and theirs piglets.The results were as follows:86 samples were detected positive in 200 samples,cytopathy occurred after the mutant strain samples screened were passaged to 5th generation,the virus suspension was harvested in 10th generation and identified as a mutant strain of PEDV,named PEDV-GF10 strain.The virus titer of harvested virus suspension was measured up to 1×10^8.0 TCID₅₀/mL after concentrated.After the vaccine was checked out,the sows,40 and 25 days before delivery in experimental groups,were injected into Xuehai acupoint with 4 mL vaccine and the pigs in blank group were free of immunifications.The results showed that there were no obvious differences in the production status of the sows in experimental groups and blank group and the temperature of theirs 3-day-old healthy piglets injected different doses of vaccine,and the vaccine was safe to the sows and piglets.Forty 3-day-old piglets producted by pregnant sows in experimental groups and blank group were randomly selected and taken 4 mL 1×10^8.0TCID₅₀/mL F10 virus culture.The PEDV morbidity of piglets in blank group was 100% after injection and the antibodies were negative;10% piglets in blank group had mild diarrhea symptoms,the protection rate was up to 90%,antibody of passive immunity in piglets lasted for more than 35 days.Virus titer of mutant strain of PEDV-GF10 improved a lot by suspension cell culture,the PEDV-GF10 inactivated vaccine was safe,and could effectively prevent and control the variation strain of PEDV in China.  相似文献   

猪δ冠状病毒HeN10株的分离鉴定及致病性研究     

汪志艳  孙玉洁  徐鑫  黄柏成  田克恭 《中国畜牧兽医》2021,48(8):2982-2989

本研究旨在获得猪δ冠状病毒（Porcine deltacoronavirus，PDCoV）地方分离株，并对其生物学特性和致病性进行初步研究。使用猪睾丸（ST）细胞分离来自河南某猪场PDCoV阳性病料中的病毒，并通过观察细胞病变效应（cytopathic effect，CPE）、反转录PCR、间接免疫荧光试验（indirect immunofluorescence assay，IFA）、电镜观察、S基因序列分析等方法进行鉴定，同时评价分离毒株在仔猪上的致病性。结果显示，阳性病料接种ST细胞后，病毒稳定增殖并连续传代至第10代；自第4代开始，感染细胞发生CPE，呈圆缩、拉网、碎裂、脱落状态；IFA鉴定为PDCoV阳性，且电镜观察可见带有刺突的冠状病毒粒子。将分离到的PDCoV命名为HeN10，其S基因序列与中国SD株相似性最高，达99.8%，与国内报道毒株CHN-JS-2017株和CHN-HeB1-2017株等处于同一分支。将HeN10株以5×10^6.3 TCID₅₀/头的剂量口服感染5头10日龄健康易感仔猪，可导致所有感染仔猪发生水样腹泻。本研究成功分离了PDCoV HeN10株，其与SD株等国内流行毒株处于同一分支，攻毒后可引起仔猪典型腹泻症状，可为下一步诊断方法及疫苗相关研究奠定一定的基础。  相似文献   

鸡新城疫病毒LaSota株在BHK-21细胞上增殖条件的优化     

董炳梅  孙培娇  苗立中  沈志强  韩文瑜 《中国畜牧兽医》2019,46(3):858-864

本研究旨在对鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)LaSota株在BHK-21细胞上的增殖条件进行优化,为实现应用细胞系生产NDV提供参考。在确定BHK-21细胞TPCK-胰酶耐受浓度的基础上,在培养基中添加不同浓度的TPCK-胰酶、新生牛血清及调节不同pH,通过对细胞培养液细胞半数感染量(TCID₅₀)的测定,确定最适胰酶浓度、血清浓度及pH;通过固定接毒量而添加不同数量细胞或固定细胞数量而接种不同量的病毒,确定最适细胞量及接毒量;将BHK-21细胞接种NDV LaSota株后,通过测定不同时间细胞上清液TCID₅₀绘制增殖曲线,确定最佳收毒时间;应用转瓶对该病毒进行扩大培养,并进行TCID₅₀、鸡胚半数感染量(EID₅₀)与血清凝集价(HA)的测定。结果显示,NDV LaSota株在BHK-21细胞上增殖的最适TPCK-胰酶浓度为3μg/mL,最适接毒量为10^6.375 EID₅₀,细胞数量为1×10~6个,培养基pH为7.2,且可用无血清培养基进行培养,BHK-21细胞接种NDV LaSota株后最佳收毒时间为34～36 h。应用BHK-21细胞采用转瓶培养的方式对NDV LaSota株进行增殖,结果显示,细胞培养液TCID₅₀值为10^7.0/0.1 mL,EID₅₀为10^7.5/0.1 mL,HA效价为1∶256。因此,应用以上条件增殖培养NDV LaSota株,完全适用于该病毒的规模化生产,且符合现行的兽医生物制品与检验制造规程。  相似文献   

Isolation and Identification of Variant HeNZK-2014 of Pseudorabies Virus and Sequence Analysis of gE Gene     

MA Zhen-yuan  LI Ning  YAN Ruo-qian  BAN Fu-guo  WANG Shu-juan  ZHAO Xue-li  XIE Cai-hua  WANG Dong-fang  WANG Hua-jun  CAO Wei-wei 《中国畜牧兽医》2017,44(7):2086-2095

In order to learn the situation of pig pseudorabies virus (PRV) variant in this study, tissue samples such as lymph nodes which were collected from clinical pigs with suspected PRV infection were identified by PCR. PRV positive sample were inoculated on PK-15 cells after grinding and degerming, with further experiment including virus isolation, plague purification, PCR and IFA identification, TCID₅₀ confirmed by Reed-Muench method, inoculation test and observation of clinical symptoms in mice. The gE gene of purified PRV and brain tissue samples of dead mice were identified by sequencing analysis. The results showed that the virus grown on PK-15 cells could produce typical cytopathic effect (CPE) after 24 h; After three rounds of plaque purification,the isolate was PRV positive identified by PCR and IFA, and nominated as HeNZK-2014; The TCID₅₀ of the isolate was 10^-9.77/0.1 mL; The virus in 1×10⁸ TCID₅₀ inoculation was able to cause itching, tearing, death in infected mice, and PRV could be detected in tissues of dead mice; The molecular genetic variation analysis of gE gene by PCR amplification and clone sequencing indicated that the gE gene from brain tissue of infected mice shared 100.0% homology with HeNZK-2014, and located in a relatively independent branch with newly pandemic isolates in recent years after 2011, but was far from the classical strains before 2011, and both had two insertion of aspartic acid (D) at sites of 48 and 496 amino acids, which were considered to be the typical characteristics of PRV variants. This study successfully isolated a PRV variant, which laid a foundation for further research on vaccine development, prevention and control against PRV variants.  相似文献   

槲皮素对PEDV感染幼龄仔猪的生长性能、血液生化指标和肠道吸收与屏障功能的影响     

汪曼丽  谭子涵  王帅杰  李倩  曾一桐  王蕾  赵迪  张倩  侯永清 《中国畜牧兽医》2022,49(9):3411-3418

【目的】 试验旨在探讨槲皮素在防治仔猪感染猪流行性腹泻病毒（PEDV）中的作用。【方法】 选取18头体重相近、健康的7日龄仔猪（杜×长×大）,随机分为3组（对照组、PEDV组和PEDV+槲皮素组）,每组6个重复,每个重复1头猪,试验期共11 d。经过3 d适应期后,于试验第4~10天给PEDV+槲皮素组仔猪口腔灌服10 mg/kg BW的槲皮素,其他组仔猪口腔灌服等体积的人工乳,于试验第8天给PEDV组与PEDV+槲皮素组仔猪口腔灌服1×10^4.5TCID₅₀的PEDV,对照组灌服等体积的PBS溶液。试验第11天早上空腹称重,全部仔猪灌服D-木糖（0.1 g/kg BW）,1 h后经前腔静脉采血,检测血液生化指标、血浆二胺氧化酶（DAO）活性和D-木糖含量;将所有仔猪屠宰取空肠黏膜,检测肠道屏障相关基因,包括肠绒毛蛋白（villin）,紧密连接蛋白-1（claudin-1）,闭合蛋白（occludin）和肠型脂肪酸结合蛋白（iFABP）的相对表达量。【结果】 与对照组相比,PEDV组仔猪平均日增重显著下降（P<0.05）,粪便评分显著升高（P<0.05）;血液中高密度脂蛋白含量显著降低（P<0.05）,肌酐和尿素氮的含量显著提高（P<0.05）;血浆中D-木糖含量显著降低（P<0.05）;空肠claudin-1、iFABP基因的相对表达量显著下调（P<0.05）。与PEDV组相比,PEDV+槲皮素组仔猪平均日增重和血浆D-木糖含量显著升高（P<0.05）;血液中肌酐和尿素氮的含量显著降低（P<0.05）;空肠claudin-1、villin和iFABP基因的相对表达量显著上调（P<0.05）。【结论】 10 mg/kg BW槲皮素可在一定程度上缓解PEDV感染导致的仔猪生长抑制和肾功能损伤,增强肠道吸收与屏障功能。  相似文献   

猪轮状病毒VP4基因重组腺病毒的构建及抗体水平评价     

肖莉  牛小杰  刘庆庆  王月丽  陈创夫  易继海 《中国畜牧兽医》2023,50(1):260-269

【目的】构建猪轮状病毒（Porcine rotavirus,PoRV）流行株PoRV G9P[23]型的VP4基因重组腺病毒,为开发PoRV候选基因工程疫苗奠定基础。【方法】参考GenBank中流行株PoRV G9P[23]型的VP4基因序列（登录号：MH898990.1）合成PoRV VP4基因,将得到的目的基因与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV进行重组,转化大肠杆菌Top10感受态细胞,构建腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-VP4;腺病毒穿梭载体经过Pme Ⅰ内切酶线性化处理后与含有腺病毒骨架pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞进行同源重组获得重组质粒pAd-VP4,对重组质粒进行Pac Ⅰ酶切鉴定,并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。将重组质粒转染HEK293A细胞获得重组腺病毒rAd-VP4,对该重组腺病毒进行扩大培养并测定重组腺病毒的半数组织培养感染剂量（TCID₅₀）;通过RT-PCR检测其体外表达情况,Western blotting检测其反应原性;将制备的重组腺病毒用不同病毒滴度和不同免疫次数对小鼠进行腹腔免疫,收集血清通过ELISA法测定IgG抗体水平。【结果】RT-PCR扩增出1条大小为2 343 bp的rAd-VP4重组腺病毒条带,测序结果正确,表明重组腺病毒rAd-VP4构建成功,测得rAd-VP4病毒滴度为10^6.5 TCID₅₀,Western blotting结果表明,重组腺病毒rAd-VP4在蛋白水平上得到了正确表达,蛋白的分子质量约为87 ku。小鼠IgG抗体检测结果表明,在用10^6.5 TCID₅₀ rAd-VP4免疫后的第35和42天,小鼠血清中的IgG抗体水平显著高于10^5.3 TCID₅₀ TGE-PED-PRV三联活疫苗IgG抗体水平（P<0.05）;10^6.5 TCID₅₀ rAd-VP4在免疫后第35和42天产生的抗体水平显著高于10^5.5和10^4.5 TCID₅₀ rAd-VP4（P<0.05）,而10^5.5 TCID₅₀ rAd-VP4在免疫后第28天产生的抗体水平显著高于10^6.5和10^4.5 TCID₅₀ rAd-VP4（P<0.05）。10^6.5 TCID₅₀ rAd-VP4的2次免疫和3次免疫产生的IgG抗体在不同免疫时间均差异不显著（P>0.05）。【结论】本研究成功构建了重组腺病毒rAd-VP4,其病毒滴度为10^6.5 TCID₅₀。10^6.5和10^5.5 TCID₅₀ rAd-VP4分别在第42和28天产生较高的IgG抗体水平,2次免疫和3次免疫对产生IgG抗体水平均无显著影响。试验结果可为开发PoRV重组腺病毒候选疫苗提供参考。  相似文献   

猪流行性腹泻病毒变异株CH/GX/750A/2015在Vero细胞上转瓶培养条件的优化试验     

卢冰霞  陶明华  赵硕  秦毅斌  刘磊  陈忠伟  何颖  段群棚  梁家幸  周英宁  李斌  蒋冬福  杨思仪  赵武 《中国畜牧兽医》2020,47(5):1506-1513

本研究旨在确定猪流行性腹泻病毒（PEDV）变异株CH/GX/750A/2015株在Vero细胞上转瓶培养的最佳条件，为大规模生产高效PEDV变异株疫苗提供技术支撑。试验以10 L转瓶培养病毒，对接毒时细胞维持液中胰酶浓度（0、2、4、6、8和10 μg/mL）、细胞密度（40%、60%、80%、100%、200%）、接毒剂量（MOI分别为1、0.1、0.01和0.001）、吸附时间（0、30、60、90、120、240 min）、收毒时间（接毒后12、24、36、48、60、72 h）、维持培养温度（35、36、37和38 ℃）和转瓶转速（6、8、10、12、14、16 r/h）7个条件进行优化。结果显示，PEDV CH/GX/750A/2015株在10 L转瓶中的最佳培养条件为：细胞刚铺满单层时接毒，接毒量为MOI=0.01，维持液（无血清DMEM培养液）中胰酶质量浓度为6 μg/mL，不需吸附，维持培养温度为37 ℃，12 r/h 旋转培养48 h后收获病毒液可获得较高效价的病毒液，效价可稳定达到10^6.50 TCID₅₀/0.1 mL。本试验为 PEDV 变异株大量培养提供了参考，为变异株疫苗研发奠定了基础。  相似文献