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为建立一种能快速对羊泰勒虫（ovine and caprine theileria）和嗜吞噬细胞无浆体（A. phagocytoph-ilum）同时进行检测的双重PCR方法。根据GenBank已报道的羊泰勒虫MPSP基因和羊嗜吞噬细胞无浆体16S rRNA基因设计合成了2对特异性引物,通过条件优化,建立了双重PCR检测方法。双重PCR可特异扩增出羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体目的条带,片段大小分别为875bp和394bp。该方法具有较好的特异性,对羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体的最低检出浓度为16fg/μL和1fg/μL。对采集的60份血液样本进行双重PCR检测,羊泰勒虫阳性率为46.67%(28/60),嗜吞噬细胞无浆体阳性率为13.33%(8/60),混合感染率为10%(6/60)。结果表明,双重PCR方法可用于羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体的快速诊断和流行病学调查。 相似文献
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《云南畜牧兽医》2020,(4)
试验对博州市7个试验点的羊只血样(N=1 520)及羊体表的蜱虫(N=1 088),经18S rRNA进行PCR检测及序列比对等方法进行了羊泰勒虫感染情况调查。结果显示:血液源性和蜱源性羊泰勒虫的感染率分别为21.64%(329/1 520)和3.68%(40/1 088);经序列比对分析结果与预期片段相符,说明二者感染均为绵羊泰勒虫;放牧羊(26.81%,233/869)的感染率高于舍饲羊(14.75%,96/651);此次对采集的绵羊血液及体表蜱虫检测未发现吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫。试验结果表明:绵羊泰勒虫在新疆博州的部分地区存在不同程度的感染,可补充羊泰勒虫病的区域性流行病学数据,以期为后续该病的综合防控提供参考依据。 相似文献
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为了了解策勒县和田羊和策勒黑羊梨形虫在不同季节的感染情况,试验分别于2015年冬至及2016年春分、夏至和秋分在策勒县某牧业合作社采集和田羊和策勒黑羊血液样本共120份,应用PCR法进行梨形虫检测。结果表明:泰勒虫总感染率为69. 2%(83/120),均为绵羊泰勒虫,未发现尤氏泰勒虫、吕氏泰勒虫和巴贝斯虫感染。和田羊不同季节泰勒虫感染率无统计学差异(P0. 05),策勒黑羊不同季节泰勒虫感染率差异显著(P0. 05),均以春分感染率最低。说明应在春季开展南疆地区绵羊的灭蜱和药物防治工作。 相似文献
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山东省媒介蜱类种类鉴定及羊泰勒虫病流行病学调查 总被引：1，自引：0，他引：1
为了阐明山东省蜱类种类及羊泰勒虫病流行概况,于2012年3月-2013年11月采用形态学鉴定法鉴定收集的14 878只蜱类标本;采用梨形虫、泰勒科通用引物及种属特异性引物对617份羊血液样品进行PCR检测,并对阳性样品18SrRNA基因进行遗传进化分析;分析不同月份蜱类活动频率及羊泰勒虫感染率。结果显示山东省长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)和草原革蜱(Dermacentor nuttalli)所占比例分别为75.3%和24.7%,统计学分析显示长角血蜱显著多于草原革蜱(P0.05),为山东省优势蜱种。PCR检测结果显示山东省羊泰勒虫感染率为24.8%;其中吕氏泰勒虫感染率为12.0%、尤氏泰勒虫感染率为11.8%,混和感染率为5.3%,没有检测到绵阳泰勒虫感染,统计学分析显示吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫在羊群的感染率无统计学差异(P0.05),吕氏泰勒虫与尤氏泰勒虫单虫种感染率显著高于混合感染率(P0.05)。遗传进化分析显示山东省吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫与北京分离株分布于同一分支,而区别于西北地区和南方地区分离株,呈现区域聚集性;不同月份蜱类活动频率与羊泰勒虫感染率呈现季节相关性。上述结果表明山东省优势媒介蜱种为长角血蜱,羊泰勒虫感染虫种为吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫,感染率较高,且与媒介蜱类存在相关性,为山东省羊泰勒虫病防控提供科学实验依据。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2021,(1)
为了解四川省攀西地区羊梨形虫的感染情况及种类分布,本研究采用原虫、泰勒虫18S r RNA基因通用引物和种特异性引物对采集自凉山州和攀枝花市7个县/市的497份羊血样样品进行套式PCR检测,并对阳性样品进行测序和序列分析。结果显示,攀西地区7个县/市羊梨形虫阳性率为11.27%(56/497),其中吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫阳性率分别为10.46%(52/497)、0.20%(1/497),混合感染率为0.20%(1/497),未检出绵羊泰勒虫。分歧巴贝斯虫和Babesia sp.KO1阳性率分别为0.20%(1/497)和0.80%(4/497),Babesia sp.KO1与吕氏泰勒虫混合感染率为0.20%(1/497),未检出莫氏巴贝斯虫和羊巴贝斯虫。山羊和绵羊梨形虫阳性率分别为10.35%(47/454)和20.93%(9/43)。经卡方检验,西昌市、布拖县、会理县和米易县梨形虫阳性率均与美姑县、普格县和盐边县差异显著(p0.05),山羊与绵羊梨形虫阳性率也差异显著(p0.05)。本研究结果表明攀西地区存在羊梨形虫的感染,且以单一病原感染为主,其中吕氏泰勒虫为主要虫种,该地区应加强对羊梨形虫病的防控。 相似文献
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《中国畜牧兽医》2020,(6)
为了解吕氏泰勒虫在中国不同地区山羊和绵羊中的流行情况,本研究应用基于吕氏泰勒虫18S rRNA基因位点的PCR检测方法,对采自中国河南、甘肃、陕西、山西、贵州、云南、新疆7个地区的281份羊血液样品进行检测,并对阳性样品测序以进行序列分析。结果显示,羊吕氏泰勒虫总感染率为35.23%(99/281)。不同采样点羊吕氏泰勒虫感染率差异极显著(P0.01),其中河南省羊吕氏泰勒虫感染率最高(98%,49/50),新疆最低(0)。绵羊和山羊吕氏泰勒虫感染率分别为51.67%(31/60)和30.77%(68/221),差异极显著(P0.01);放牧羊吕氏泰勒虫感染率(41.55%,86/207)极显著高于舍饲羊(17.57%,13/74)(P0.01);羊吕氏泰勒虫感染率在春、夏、秋及冬四季分别为56.00%(28/50)、42.75%(59/138)、9.43%(5/53)和17.50%(7/40),差异极显著(P0.01);≥12月龄和12月龄羊吕氏泰勒虫感染率分别为33.50%(67/200)和39.51%(32/81),差异不显著(P0.05)。此外,遗传进化分析表明,本研究获得的羊吕氏泰勒虫分离株与中国流行的吕氏泰勒虫分离株同源性高达99.60%以上,且位于同一分支上。本研究为进一步了解中国不同地区羊吕氏泰勒虫的流行现状及分布提供了重要参考依据。 相似文献
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为了解吕氏泰勒虫在中国不同地区山羊和绵羊中的流行情况,本研究应用基于吕氏泰勒虫18S rRNA基因位点的PCR检测方法,对采自中国河南、甘肃、陕西、山西、贵州、云南、新疆7个地区的281份羊血液样品进行检测,并对阳性样品测序以进行序列分析。结果显示,羊吕氏泰勒虫总感染率为35.23%（99/281）。不同采样点羊吕氏泰勒虫感染率差异极显著（P<0.01）,其中河南省羊吕氏泰勒虫感染率最高（98%,49/50）,新疆最低（0）。绵羊和山羊吕氏泰勒虫感染率分别为51.67%（31/60）和30.77%（68/221）,差异极显著（P<0.01）;放牧羊吕氏泰勒虫感染率（41.55%,86/207）极显著高于舍饲羊（17.57%,13/74）（P<0.01）;羊吕氏泰勒虫感染率在春、夏、秋及冬四季分别为56.00%（28/50）、42.75%（59/138）、9.43%（5/53）和17.50%（7/40）,差异极显著（P<0.01）;≥ 12月龄和<12月龄羊吕氏泰勒虫感染率分别为33.50%（67/200）和39.51%（32/81）,差异不显著（P>0.05）。此外,遗传进化分析表明,本研究获得的羊吕氏泰勒虫分离株与中国流行的吕氏泰勒虫分离株同源性高达99.60%以上,且位于同一分支上。本研究为进一步了解中国不同地区羊吕氏泰勒虫的流行现状及分布提供了重要参考依据。 相似文献
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为了阐明青海海北地区患病藏羊携带蜱虫种类及蜱传病原的情况,采用PCR方法对蜱虫种类进行鉴定,并利用16S rRNA基因进行遗传进化分析,同时也利用PCR方法检测了携带的病原,对鉴定的病原进行分析。结果显示:青海海北地区主要流行西藏革蜱、森林革蜱、青海血蜱和草原革蜱,鉴定的蜱虫基因与GenBank中的参考基因的同源性均在97.00%～100.00%之间;遗传进化分析显示鉴定的蜱虫均与相应的蜱种聚类,且均与西北地区的分离株聚在同一分支上,呈现区域聚集性;蜱传病原种类丰富,包括尤氏泰勒虫、吕氏泰勒虫、绵羊泰勒虫、巴尔通体、绵羊无浆体、立克次体、贝纳特氏立克次体,流行的主要病原是绵羊无浆体和巴尔通体。通过本次的分子生物学鉴定研究,有助于研究我省蜱的生物学多样性和进化关系,丰富蜱种分子标记相关基因序列信息;同时对蜱传病原进行了分子鉴定,有助于查清蜱携带的病原谱,可为我省蜱传病的防控提供科学依据。 相似文献
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为了解吉林省延边地区流行的羊泰勒虫种类,采用血涂片镜检和PCR方法对羊泰勒虫进行鉴定和遗传学分析。血涂片镜检观察发现,血涂片红细胞中存在圆形虫体。对羊泰勒虫MPSP基因生物信息学分析显示,MPSP编码的蛋白包含3个N-糖基化位点,14个潜在抗原表位,含有信号肽结构。建立系统进化树显示,分离到的3个虫株与Theileria luwenshunli(GQ281044)同源性为100%,亲缘关系较近,分离的羊泰勒虫为吕氏泰勒虫。由该试验结果可以得出,吉林省延边地区流行的羊泰勒虫为吕氏泰勒虫。 相似文献
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《中国兽医学报》2017,(10):1900-1903
为了进一步了解吉林省牛东方泰勒虫和嗜吞噬细胞无形体的流行情况,对采自吉林省洮南,松原,珲春3个地区的103份牛血液样本,采用PCR和巢式PCR方法分别东方泰勒虫与嗜吞噬细胞无形体进行检测。结果显示,东方泰勒虫在洮南、松原和珲春地区的感染率分别为8.7%,12.5%和92.5%,嗜吞噬细胞无形体在洮南、松原和珲春地区的感染率分别为0,7.5%和12.5%。本研究首次在吉林省洮南地区和松原地区牛体内检测到东方泰勒虫,首次在松原地区和珲春地区牛体内检测到嗜吞噬细胞无形体。本研究结果为吉林省控制和预防牛东方泰勒虫病与嗜吞噬细胞无形体病提供了有效的流行病学依据。 相似文献
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《动物医学进展》2021,42(2)
为调查我国新疆北部地区蜱及牛、羊体内蜱传播性嗜吞噬细胞无浆体(Anaplasma phagocytophilum)病原的流行情况,收集了新疆北部地区13个县(市)的蜱虫样品及血液样品(蜱虫样品609只,牛血液样品670份,羊血液样品631份),提取基因组DNA, PCR检测后挑选阳性样品测序(1/3),分析其感染状况及病原分子遗传特征。结果显示,蜱虫和血液样品中共检测出183份A.phagocytophilum感染阳性,牛、羊和蜱虫感染率分别为10.0%(67/670)、9.5%(60/631)和8.2%(50/609),样品总体感染率为9.3%(177/1 910)。此次获得的新疆北部地区A.phagocytophilum 16S rRNA和MSP4基因序列遗传进化分析显示,该区牛、羊和蜱体内检测到的病原基因阳性片段与GenBank已公布的中亚、中欧地区病原基因序列同源性为96.7%～99.5%,进化树分析显示与中亚、中欧多国A.phagocytophilum基因序列聚为一支。结果可为新疆北部地区蜱与蜱传播性嗜吞噬细胞无浆体病的防控提供理论依据。 相似文献
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《动物医学进展》2021,42(3)
为了解广西牛、羊群感染梨形虫情况,以及种类分布,从广西南宁、柳州、百色、河池、贺州等地区牛、羊养殖场采集抗凝血638份,抽提血液DNA组,运用套式PCR方法对梨形虫的18S rRNA进行扩增,并抽取一部分阳性样品进行测序,构建系统发育树。结果显示,5个地区梨形虫平均感染为24.76%,其中牛平均感染率为34.30%,羊平均感染为20.19%。南宁、河池、百色等地区牛平均感染率分别为40.00%、43.24%和23.86%;南宁、柳州、河池、百色、贺州等地区羊平均感染率为0、55.34%、11.48%、4.24%和23.40%。序列对比后涉及的种类有双芽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫、环形泰勒虫、东方泰勒虫、吕氏泰勒虫,其中东方泰勒虫、吕氏泰勒虫是优势种。获得的序列与系统发育树中所有参考的种类进化树均在同一个分支上。结果表明,广西5个地区牛、羊梨形虫感染率较高,涉及5个种类,在日常监测和防治牛、羊寄生虫病中应引起足够重视。 相似文献
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马泰勒虫病PCR检测方法的建立和应用 总被引：2，自引：1，他引：1
为寻求一种快速、有效的马泰勒虫 (Theileria equi,T.equi) PCR检测方法。基于马泰勒虫18S rRNA基因序列,在其V4高变区设计特异性引物Te-18F、Te-18R,通过PCR技术获得了531 bp的核酸片段。用该引物对马泰勒虫、马泰勒虫和驽巴贝斯虫混合样本、驽巴贝斯虫、尤氏泰勒虫、中华泰勒虫、环形泰勒虫、绵羊泰勒虫、吕氏泰勒虫和瑟氏泰勒虫基因组模板进行特异性试验。同时对马泰勒虫基因组模板进行不同浓度稀释后扩增,以便于确定试验的敏感性。用本试验建立的方法与常规显微镜镜检方法对45份马属动物血样进行检测。特异性试验显示,在被检测的9个样本中,只有马泰勒虫及马泰勒虫和驽巴贝斯虫混合模板中扩增出了符合大小的特异核酸片段。驽巴贝斯虫、尤氏泰勒虫、中华泰勒虫、环形泰勒虫、绵羊泰勒虫、吕氏泰勒虫和瑟氏泰勒虫的扩增结果均为阴性。灵敏度试验结果表明,PCR对马泰勒虫的扩增效率可达到10-13。对本试验建立的PCR检测马泰勒虫方法评估结果显示,PCR对马泰勒虫的检出率为17.78%(8/45),显微镜镜检结果只有8.89%(4/45)两者的符合率为100%。本试验建立的马泰勒虫PCR检测方法不失,为一种好的检测方法。 相似文献
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《动物医学进展》2020,(4)
为了解陕西麟游县山羊吕氏泰勒虫感染情况,应用聚合酶链反应(PCR)方法对采自陕西麟游的209份山羊血液样品进行吕氏泰勒虫18S小亚基核糖体核糖核酸基因扩增,并对部分阳性样品进行遗传进化分析。调查显示,吕氏泰勒虫总感染率为61.2%(128/209);不同饲养方式、不同年龄、不同季节山羊的吕氏泰勒虫感染率均差异性显著(P0.05,P0.05,P0.05)。遗传进化分析表明,研究获得的泰勒虫分离株与吕氏泰勒虫(GenBank登录号:LC326009)位于同一分支上。该调查结果丰富了我国吕氏泰勒虫流行病学资料,并为该地区及同类地区羊泰勒虫病的防控提供科学依据。 相似文献
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从自然感染无浆体的重庆黄牛无菌采集血液,提取全血基因组,用血营养菌16S rRNA基因的通用引物进行PCR扩增,得到长约1500 bp的扩增片段,将其克隆到pMD18-T载体后进行测序,并与5条边缘无浆体、4条中央无浆体、4条牛无浆体、4条羊无浆体和3条嗜吞噬细胞无浆体16S rRNA基因序列进行系统发育分析.结果表明所克隆的基因片段长度为1412 bp,GenBank登录号为FJ169957.序列比较结果显示,所获得的序列与Kawa-hara公布的牛无浆体日本株(AB211163)同源性最高,达到99.0%,系统发育分析发现,该序列被聚类到牛无浆体群,并与嗜吞噬细胞无浆体群聚类到一个大的分支.本文从分子水平证实重庆地区存在牛无浆体,牛无浆体与嗜吞噬细胞无浆体的亲缘关系比其他3种无浆体更近. 相似文献