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旨在建立猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)抗体胶体金免疫层析检测方法,从而快速地对Mhp的感染和免疫情况进行监测,预防和控制猪支原体肺炎传播。通过柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,确定Mhp特异性抗原P46蛋白的最适标记pH和标记浓度并进行标记,作为金标液。将P46蛋白包被检测线T线,抗P46蛋白单抗包被质控线C线,组装检测试纸条。经优化,建立可同时用于Mhp血清抗体和黏膜抗体检测的胶体金免疫层析检测方法。利用该检测方法对76份临床血清样品和40份临床鼻拭子样品进行检测,并与ELISA检测结果进行比较。用该试纸条检测血清样品时,灵敏性、特异性、重复性较好,与商品化Mhp ELISA抗体检测试剂盒符合率为96.1%;该方法检测呼吸道鼻拭子样品时,存在微弱的非特异性反应,检测结果与本实验室建立的sIgAELISA检测方法符合率为87.5%。本研究成功建立了Mhp抗体胶体金免疫层析检测方法,整个过程只需10 min。检测血清样品具有较好的特异性和灵敏性,检测鼻拭子样品时特异性还有待提高。 相似文献
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为了对一例规模化猪场发病病例所患疾病进行诊断,同时了解该猪场的抗体水平及病原感染情况,试验对该猪场的血清样品、鼻拭子、粪便样品及组织样品进行血清学和病原学检测。结果表明:发病猪组织样品中蓝耳病病毒阳性率为71. 4%、猪圆环病毒2型阳性率为85. 7%、肺炎支原体阳性率为85. 7%、伪狂犬病病毒阳性率为14. 3%、副猪嗜血杆菌阳性率为71. 4%。鼻拭子中猪肺炎支原体阳性率为16. 3%。血清样品中猪瘟病毒抗体、蓝耳病病毒抗体阳性率达到80%以上,抗体水平较高;伪狂犬病病毒g E抗体阳性率达到34. 8%;肺炎支原体疫苗只免疫了仔猪,全群抗体阳性率为59. 3%;猪圆环病毒2型疫苗全场未免疫,而抗体阳性率却高达77. 1%。粪便样品中A群轮状病毒阳性率为66. 7%;球虫阳性率为100%。说明蓝耳病病毒、猪圆环病毒2型、肺炎支原体、伪狂犬病病毒、副猪嗜血杆菌、轮状病毒和球虫是该场的主要病原,应加强防控,提高猪群的免疫水平,降低猪群的感染风险。 相似文献
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猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae ,Mhp)引起的猪的一种慢性呼吸道疾病,严重影响养猪业发展,活疫苗气溶胶免疫是防治该病的新措施。为研究猪肺炎支原体活疫苗(168株)经气溶胶免疫后,疫苗株在免疫猪肺内的占位存留规律,选用3周龄不吃初乳猪27头,随机分为3组,G1气溶胶免疫组12头,G2肺内免疫组12头,同时设立阴性对照3头。分别于免疫后第2 h、7 d、14 d及28 d进行鼻拭子Mhp sIgA检测以及血清抗体检测。另外在上述时间点分别宰杀G1和G2组各3头,对照组在实验组免疫后第28 d宰杀,采集肺泡灌洗液,分别进行Mhp sIgA检测及Mhp疫苗株含量检测。结果显示:(1)所有试验猪至实验结束,Mhp血清抗体未出现转阳现象;(2)鼻拭子sIgA水平G1组在免疫后第14 d与对照组相比上升,差异具有显著统计学意义(p <0.05);G2组在免疫后第7 d和14 d与相应的对照组相比上升,差异具有显著统计学意义(p <0.05),各时间点G1组与G2组sIgA水平差异不具备统计学意义(p >0.05);(3)G1组肺泡灌洗液中的 sIgA在免疫后14 d部分转阳(阳性率33.33%),28 d全部转阳(阳性率100%);G2组在免疫14 d时已全部转阳(阳性率100%),各时间点G1组与G2组sIgA水平差异不具备统计学意义(p >0.05);(4)气溶胶免疫组肺泡灌洗液内Mhp疫苗株浓度在免疫后第2 h、7 d、14 d和28 d分别是相应肺内免疫组的0.37倍、1.01倍、0.88倍以及0.52倍。猪支原体肺炎活疫苗(168株)经气溶胶免疫后,和肺内免疫一样可以诱导免疫猪的局部黏膜免疫以及具有同等的占位效应,且经气溶胶免疫的疫苗株在免疫仔猪体内的增殖水平可能与其诱导的黏膜免疫水平相关。 相似文献
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检验猪肺炎支原体强毒株与弱毒株感染后呼吸道sIgA抗体活性,并比较其抗体分泌规律差异。分别使用猪肺炎支原体强毒JS株和弱毒168株接种实验猪,同时设置健康猪为对照组,按时采集鼻拭子样本。通过ELISA检测0,2,4,7,14,21,28,35,42,49和56d特异性sIgA抗体滴度,比较两组抗体分泌规律。结果显示,在接种4~7d之间,强毒组已出现阳性猪,14d时所有猪呈感染阳性。而弱毒组在14~21d之间开始逐渐出现阳性猪,35d时80%左右的猪呈阳性感染,随后下降。并且强毒组抗体平均滴度高于弱毒组。结果显示,强毒转阳更早,抗体滴度更高,持续时间更长;弱毒为猪支原体肺炎弱毒疫苗株,该菌株同样保持了良好的免疫原性,可刺激呼吸道黏膜产生特异的sIgA,但黏膜抗体转阳时间较晚,滴度较低。强弱毒株在黏膜抗体分泌方面的差异有助于临床上对猪肺炎支原体的感染以及活疫苗免疫进行区别鉴定。 相似文献
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为深入了解猪源新型甲型流感病毒的流行情况,本研究对山东省9个地市40个猪场进行了猪源新型甲型流感病毒的感染情况调查。在养猪场采集有流感症状猪的血液样品(263份)和鼻咽拭子(235份),分别用HI试验来检测血清抗体滴度和荧光定量PCR技术检测鼻咽拭子中的流感病毒的含量。结果表明,血清阳性率为23.07%～63.33%,总阳性率为41.6%;荧光定量PCR检测鼻咽拭子阳性率为10.0%～64.28%,总阳性率为30.63%。这为了解山东省猪源新型甲型流感病毒的发生和分布,并采取相应的公共卫生措施提供了依据。 相似文献
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为了调查地方猪种与引进猪种肺炎支原体的流行情况,本试验以姜曲海猪、苏姜猪、长白猪为调查对象,通过不同猪群发病情况、血清学、鼻拭子病原检测和屠宰肺部病变情况了解不同品种间肺炎支原体流行病学情况。结果表明:姜曲海猪、苏姜猪、长白猪的猪群发病率分别为17.43%、3.27%、2.41%,死亡率分别为7.71%、0.92%、0.60%,姜曲海猪发病率和死亡率明显高于苏姜猪和长白猪;姜曲海猪群血清阳性率达36.84%,比苏姜猪群高约22百分点,比长白猪群高约24百分点;姜曲海猪群肺部病变指数评分极显著高于长白猪群和苏姜猪群(P0.01);而从猪群鼻拭子肺炎支原体病原检测结果看,3个品种猪群之间携带病原情况并不存在显著差异(P0.05)。说明不同品种猪群间存在流行病学差异,中国地方猪种的易感性明显高于引进猪种。 相似文献
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研究旨在初步了解蓬莱地区猪肺炎支原体流行情况,为该病的进一步防制奠定基础。应用ELISA方法对采集于该地区4个镇、12个猪场共324份血清样品进行猪肺炎支原体抗体检测。结果显示,该地区猪肺炎支原体抗体检测阳性样品183份,阳性率为56.48%;不同地区猪群抗体阳性率存在一定差异,为45.78%~62.5%;其中哺乳仔猪抗体阳性率为27.08%,保育猪为45.0%,肥育猪为63.41%,繁殖母猪为86.49%;春冬季高于夏秋季。结果表明,猪支原体肺炎在该地区分布广泛,且流行情况较为严重,需要采取积极的措施进行有效防制。 相似文献
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该研究旨在初步了解山东蓬莱地区猪肺炎支原体流行情况,为该病的进一步防制奠定基础。应用ELISA方法对采集于该地区4个镇、12个猪场共324血清样品进行猪肺炎支原体抗体检测。结果显示,该地区猪肺炎支原体抗体检测阳性样品183份,阳性率为56.48%;不同地区猪群抗体阳性率存在一定差异,范围在45.78%~62.5%;其中哺乳仔猪抗体阳性率为27.08%,保育猪为45.0%,育肥猪为63.41%,繁殖母猪为86.48%。结果表明猪肺炎支原体在该地区分布广泛,且流行情况较为严重,需要采取积极的措施进行有效防制。 相似文献
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四川省部分地区猪传染性胸膜肺炎的流行病学调查 总被引：1，自引：0，他引：1
为弄清猪传染性胸膜肺炎在四川省的流行状况,笔者利用猪传染性胸膜肺炎抗体检测正向间接血凝试剂盒对在不同时间采集的、不同地区和不同来源的1062份非免疫猪血清进行了检测。结果不同地区猪群的猪传染性胸膜肺炎抗体阳性率不同,从1%-37%,平均阳性率为18.5%。其中,30日龄以内未断奶仔猪阳性率为1%、30-70日龄保育仔猪阳性率为23%、70-150日龄育肥猪阳性率为27%、后备母猪阳性率为8%、经产母猪阳性率为3%。以上结果表明猪传染性胸膜肺炎在四川省各地都有发生,且发生与猪的日龄、饲养方式有关。 相似文献
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《养猪》2016,(1)
用PCR方法对从湖南省长沙市515头屠宰猪收集的1 204份样品(120份猪鼻拭子、254份猪支气管拭子、515份猪支气管肺泡灌洗液和235份猪肺、80份血液)进行了猪肺炎支原体和猪鼻支原体检测,并对部分PCR产物进行序列分析。结果发现,猪肺炎支原体在猪支气管灌洗液中检出率最高(23.3%,120/515),猪鼻拭子和血液中检出率最低(0);猪鼻支原体在猪鼻拭子中检出率最高(24.3%,125/515),在猪支气管拭子中检出率最低(2.5%,3/120)。序列分析表明:试验的PCR产物与国内已出版的相关序列有97%~100%的同源性。试验探明了猪肺炎支原体和猪鼻支原体在猪呼吸道与血液中的分布情况,为这两种支原体的分离鉴定提供了依据。 相似文献
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本研究旨在确诊一起来自具有地方性呼吸系统病史的哺乳和断奶仔猪的下呼吸道猪肺炎支原体感染的疾病。试验收集来自50个猪群的500头(每群10头)临床感染仔猪的肺泡灌洗液,利用套式PCR检测猪肺炎支原体。在12.3%的哺乳仔猪和10.6%的断奶仔猪的肺泡灌洗液中检测到了猪肺炎支原体。猪肺炎支原体阴性猪群的比例是72%,只有2组猪群所有样本均为阳性。通过系统调查了解猪群的卫生条件及饲养管理状况,数据分析结果表明,仔猪中猪肺炎支原体病的感染与猪群的生产管理及猪群对环境的适应性有关。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2015,(12)
为了解安徽地区猪传染性胸膜肺炎(PCP)的流行情况,本研究采用ApxIV-ELISA试剂盒对1 288份猪血清样品中胸膜肺炎放线杆菌(APP)感染抗体进行检测,并采用PCR方法对573份母猪鼻腔棉拭子样品和92份屠宰生猪肺脏样品的APP核酸检测。结果显示,APP感染抗体总阳性率为26.40%,母猪/后备母猪/公猪APP感染抗体阳性率(45.47%)高于哺乳仔猪(28.02%)、保育猪(6.16%)、育肥猪(7.20%);夏季(41.42%)高于春季(29.75%)、秋季(26.35%)、冬季(19.26%);淮北地区(30.73%)和江淮地区(28.57%)高于皖南地区(13.77%);中型猪场(47.16%)高于大型猪场(19.28%)和小型猪场及散养户(23.15%);屠宰生猪肺脏样品APP核酸阳性率(11.96%)高于母猪鼻腔棉拭子(1.92%)。ELISA试剂盒与PCR同步检测的符合率为49.77%。表明PCP在安徽地区普遍存在,为引起猪呼吸道疾病综合征的主要原因之一。本研究结果为PCP的有效防控提供了现地调查依据。 相似文献
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猪肺炎支原体和猪鼻支原体双重荧光定量PCR检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
《畜牧兽医学报》2017,(8)
建立同时检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体的双重荧光定量PCR方法。根据猪肺炎支原体P97序列和猪鼻支原体P37序列的特异性引物,分别标记FAM和Texas Red荧光报告基团的2条TaqMan探针,建立和优化双重实时荧光定量PCR反应条件和体系,同时检测其敏感性、特异性和重复性。建立的双重荧光定量PCR对猪肺炎支原体和猪鼻支原体的最低检测值均为10copies·μL-1;与猪源致病菌、病毒和其他常见细菌均无交叉反应;各浓度标准品的Ct值变异系数小于5%,重复性好。检测72份临床样本,其中猪肺炎支原体的肺阳性率为80%,鼻拭子阳性率22%,支气管肺泡灌洗液阳性率58.33%;猪鼻支原体的肺阳性率为40%,鼻拭子阳性率66%,支气管肺泡灌洗液阳性率41.67%。建立的双重荧光定量PCR方法比普通PCR更加敏感,实用性强,可用于临床样品的检测。该方法能同时快速和定量地检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体,在短时间内获得样品的多个信息,快速地解决了多次检测所需的时间以及经济消耗,为猪肺炎支原体和猪鼻支原体的监测和防控提供了新型、可靠的检测技术。 相似文献
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为了选择非洲猪瘟病毒感染早期、中期和晚期3个阶段诊断的最佳样品,试验选取50头临床表现为采食量下降或不食、发烧、流产的母猪为研究对象,采集其环境样品、咽拭子、鼻拭子、肛拭子、静脉血和尾根血等6种样品共900份,采用定量PCR方法检测非洲猪瘟病毒核酸,比较6种样品中核酸的阳性率和Ct值。结果表明,感染早期的咽拭子非洲猪瘟病毒核酸阳性检出率最高为42%;中期血液中非洲猪瘟病毒核酸阳性检出率为25%;后期环境样品中非洲猪瘟病毒核酸阳性检出率最高为54%,血液病毒载量最高。综合现场操作,认为非洲猪瘟诊断中,不同时期选择的最佳样品分别是:感染前期采集咽拭子进行检测,中期采集尾根血进行检测,后期采集环境样品进行检测。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2019,(3)
为研究猪支原体肺炎(MPS)弱毒活疫苗与灭活疫苗联合免疫的免疫效果,本研究选取40头10日龄猪肺炎支原体(Mph)阴性仔猪,随机平均分为4组。A组肌肉注射灭活疫苗;B组喷鼻弱毒活疫苗;C组肌注灭活疫苗同时喷鼻弱毒活疫苗;D组为空白对照。疫苗免疫后每天观察猪群的整体状态,于免疫后3 d、30 d、90 d、180 d,分别采集鼻腔棉拭子和血液样品,进行应激相关指标以及相关疾病的抗体检测,并于免疫后180 d进行MPS病原检测。仔猪屠宰时称重,采集其完整肺脏,计算其平均增重并进行肺脏病变评分。结果显示:C组猪生长状况最好,猪群支原体感染率低、抗体水平高、平均增重高并且肺脏病变程度低,表明采用MPS灭活疫苗和弱毒活疫苗联合的免疫效果更好,并且未引起严重的应激反应。本研究对MPS疫苗的合理应用提供了实验依据。 相似文献
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本试验对北京郊区5个规模化猪场断奶仔猪、育成猪、育肥猪和怀孕母猪采集血清共507份,同时采集密切接触饲养人员、仔猪、育肥猪的喉头拭子、母猪阴道拭子及公猪的精液共183份。分别使用间接血凝诊断试剂盒、法国ELISA试剂盒检测抗体;利用直接荧光染色法检测抗原,包括166份猪喉头拭子、阴道拭子和精液以及17份饲养人员喉头拭子。结果发现间接血凝诊断试剂盒、ELISA试剂盒抗体阳性率分别为4.14%和2.17%;抗原平均阳性率为14.8%,其中精液阳性率达到37.5%,母猪阴道拭子阳性率为27.5%,饲养人员阳性率为23.5%。本试验证实北京郊区猪嗜流产衣原体在种公猪、母猪群和饲养员呈高流行趋势。同时研究结果显示,5个被调查的规模化猪场嗜流产衣原体抗体阳性率显著低于有报道的其他省市,这与间接血凝诊断试剂盒检测结果高于ELISA试剂有关。针对发现的问题,必须采取有效措施控制种公猪精液污染衣原体现象,阻断向母猪和饲养人员传播,以降低人兽共患病发生的风险。 相似文献
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