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1.
为了探讨生长因子（ＥＧＦ，ＰＤＧＦ）对牛卵母细胞体外成熟与早期胚胎体外发育的影响，本研究进行了两个实验。实验１：在卵母细胞体外成熟（ＩＶＭ）中，将卵母细胞平均随机的放入表皮生长因子浓度为０，２．５，２５，５０μｇ／Ｌ的成熟培养液和对照组中。实验２：在早期胚胎体外培养（ＩＶＣ）过程中，将受精卵平均随机分配入５个不同培养液的处理组：（１）ＴＣＭ－１９９＋１０％阉公牛血清（ＳＳ）；（２）ＴＣＭ－１９９＋ＥＧＦ＋ＰＤＧＦ；（３）ＴＣＭ－１９９＋ＥＧＦ；（４）ＴＣＭ－１９９＋ＰＤＧＦ；（５）ＴＣＭ－１９９＋无生长因子、其中ＥＧＦ：５０μｇ／Ｌ，ＰＤＧＦ：０．１μｇ／Ｌ。２，３，４，５组有０．１％ＰＶＡ和０．３％ＢＳＡ，并与颗粒细胞单层协同培养。卵母细胞的体外成熟（ＩＶＭ）、体外受精（ＩＶＦ）和早期胚胎体外培养（ＩＶＣ）的方法与Ｌｕ等（１９８７）报道的相同。结果表明：浓度为５０μｇ／Ｌ的处理组分裂率与对照组无差异（８９．０％，９２．４％，Ｐ＞０．０５），而浓度为０，２．５，２５μｇ／Ｌ的处理组分裂率均显著低于对照组（７８．６％，８２．３％，８４．３％，Ｐ＜０．０５），在囊胚率和第７ｄ一级胚胎率上各组均无差异。ＥＧＦ在体 相似文献
2.
甘薯羽状斑驳病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达及特异抗血清的制备 总被引：12，自引：0，他引：12
根据已报道的甘薯羽状斑驳病毒（ＳＰＦＭＶ）外壳蛋白（ＣＰ）基因的核苷酸序列合成引物,利用ＲＴ－ＰＣＲ的方法获得ＣＰ基因后,再将其克隆到原核表达载体ｐＥＴ３０ａ（＋）中。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明,经ＩＰＴＧ诱导,ＣＰ基因在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中获得了高效表达。以含表达产物的凝胶为抗原,免疫家兔,制备了ＳＰＦＭＶ外壳蛋白的特异性抗血清。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ和点免疫（Ｄｏｔｂｏ 相似文献
3.
利用高盐法从鸡血中提取高分子量ＤＮＡ，以λＥＭＢＬ３为载体构建了鸡染色体文库，用鸡生长激素受体ｃＤＮＡ基因的部分序列作探针，从文库中筛选得到３个阳性克隆。通过对阳性克隆Ｉ插入片段的酶切和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，表明它含有全长的鸡生长激素受体基因，建立了该基因的限制性酶切图谱。将插入片段亚克隆到ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）质粒上，对含有基因５’端序列的２．５ｋｂＥｃｏＲＩ酶切片段进行了序列分析。 相似文献
4.
猪生殖和呼吸综合征病毒中国分离株B13株ORF5基因在杆状病 … 总被引：4，自引：0，他引：4
本研究将ＰＲＲＳＶＢ１３株ＯＲＦ５基因克隆到杆状病毒转移载体质粒ｐＶＬ１３９３中,构建了重组转移载体质粒ｐＶＬ１３９３－ＯＲＦ５。用该重组转移载体质粒与线性化苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＭＮＰＶ－ＳＶＩ Ｇ）基因组ＤＮＡ（ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ Ｌｉｎｅａｒｉｚｅｄ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ＤＮＡ）共转染草地夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ,ｓｆ９）细胞,得到重组病毒ＡｃＭＮＰＶ 相似文献
5.
本研究分离并提纯苏云金芽胞杆菌８０１０菌株的质粒ＤＮＡ，经ＢａｍＨＩ／ＰｓｔＩ双酶解后与ＤＩＧ标记的ｃｒｙＩ基因ＥｃｏＲＩ－Ｆ片段的ＲＮＡ探针杂交，显示出分子量分别为６．５６ｋｂ和４．４ｋｂ的阳性片段。用Ｂｌａｓｓｍｉｌｋ回收４．４ｋｂ的阳性片段并与双功能载体ｐＲＩＴ５重组，转化感受态大肠杆菌ＴＧ１细胞，通过斑点杂交和快检获得含４．４ｋｂ片段的克隆株Ｔ２，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明它表达了１３０ｋＤ 相似文献
6.
奶牛分娩前后血浆类固醇激素水平变化与胎衣不下的关系 总被引：7，自引：0，他引：7
应用放射免疫分析法（ＲＩＡ）测定了２０头怀孕奶牛（其中胎衣不下（ＲＦＭ）牛和正常（ＮＲＦＭ）牛各１０头］产前１０天到产后２天外周血浆孕酮（Ｐ４）、１７β－雌二醇（１７β－Ｅ２）和雌酮（Ｅ１）的水平。结果表明，产前６～３天，ＲＦＭ牛血浆Ｐ４水平略低于ＮＲＦＭ牛（Ｐ＞０．０５），而于产前２天突然跃升并显著高于ＮＲＦＭ牛（Ｐ＜０．０５）。血浆１７β－Ｅ２水平，ＲＦＭ牛于产前７天到分娩当天显著低于ＮＲＦＭ牛（Ｐ＜０．０５），尤其是产前７天和５天。血浆Ｅ１水平，产前１０～１天ＲＦＭ牛显著低于ＮＲＦＭ牛（Ｐ＜０．０５），尤其是产前８天和４天极显著低于ＮＲＦＭ牛（Ｐ＜０．０１）；而分娩当天，ＲＦＭ牛却显著高于ＮＲＦＭ牛（Ｐ＜０．０５）。此外，Ｐ４／１７β－Ｅ２的比值，在分娩前６天和２天ＲＦＭ牛极显著和显著高于ＮＲＦＭ牛（Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０５）。上述结果表明，分娩前６天时，雌酮水平显著下降和Ｐ４／１７β－Ｅ２比值显著升高可以作为奶牛胎衣不下的指征。 相似文献
7.
本研究克隆了萤光假单胞菌ＡＳ１．５５（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓＡＳ１．５５）的亮氨酸基因（ｌｅｕ＾＋）ＥｃｏＲＩ片段（－６．６ｋｂ）,并获得含有该片段的重组质粒ｐＢＲ３２２－ＬＥＵ。从ｐＢＲ３２２－ＬＥＵ质粒中分离出ｌｅｕ＾＋ＥｃｏＲＩ片段,将其插入到ｎｉｆＡ质ｐＭＣ７１Ａ的ＥｃｏＲⅠ位点使氯霉素抗性基因失活,从而构建了不带抗药性基因ｎｉｆＡ质粒ｐＭＣ７１Ａ－ＬＥＵ。 相似文献
8.
根据已发表的ＩＢＤＶ基因组序列设计并合成一对特异扩增ＩＢＤＶ ＶＰ２ｃＤＮＡ的引物，以纯化的ＩＢＤＶ－Ｄ７８弱毒疫苗株基因组为模板，利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增出约１．５ｋｂ产物。将ＰＣＲ产物克隆到ｐＵＣ１９的Ｓｍａｌ位点，经酶切图谱分析等方法鉴定出重组ＶＰ２ｃＤＮＡ质粒（ｐＶＰ２）。将ＶＰ２基因正向插入ＦＰＶ启动子ＬＰ２３Ｐ２下游，连同痘苗病毒启动子Ｐ１１启动的ＬａｃＺ报告基因盒插入ＦＰＶ转移载体中 相似文献
9.
用根据国外已报道的甜菜坏死黄脉病毒（ＢＮＹＶＶ）的ＲＮＡ２的序列合成的两个引物，通过对ＢＮＹＶＶ新疆分离物的ＲＮＡ逆转录获得了ＢＮＹＶＶ的外壳蛋白基因的ｃＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增后用Ｔ４聚合酶补平两端，克隆到ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）质粒的ＳｍａＩ位点，转化大肠杆菌ＤＨ５α，经筛选得到正向插入的重组质粒ｐＧＥＢ３。用ＰＣＲ扩增和酶切均得到５９０ｂｐ的ＤＮＡ片段。用ＡＢＩ３７０Ａ型ＤＮＡ全自动序列仪测出该ｃ 相似文献
10.
马铃薯Y病毒普通株系外壳蛋白基因的克隆与原核表达载体的构建 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究报道马铃薯Ｙ病毒普通株系外壳蛋白基因ｃＤＮＡ克隆,全序列分析及其原核表达载体构建的结果。从感染ＰＶＹ的烟草叶片中提取病毒粒体,ＳＤＳ－酚法提取病毒核酸。以所提核酸为模板,用一对ＰＶＰＣＰ基因引物进行ＲＴ－ＰＣＲ,扩增了０．８０ｋｂ的特异性核苷酸片段。该片段大小五国外报道的ＰＶＹ ＣＰ基因一致,将ＰＤＲ产物插入到克隆载体ｐＧＥＭ７Ｚｆ（＋）中转化大肠杆菌ＤＨ５α。 相似文献
11.
通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增了新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４８Ｅ８株核衣壳蛋白（ＮＰ）基因,并克隆到ｐＵＣＮＰ。应用分子克隆技术,将ＮＰ基因导入鸡痘病毒（ＦＰＶ）转移载体ｐＦＧ１１７５－１中Ｐ７．５启动子的下游,得到含ＮＤＶ ＮＰ基因的质粒ｐＦＧＮＰ１１７５－１。利用脂质体转染技术,将该质粒转染ＦＰＶ疫苗株２８２Ｅ４感染３－４ｈ的鸡胚成纤维细胞,采用蓝斑筛选方法纯化多次,得到稳定的重组Ｆ 相似文献
12.
脑钠肽与谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白的表达与分离纯化 总被引：1，自引：0，他引：1
用ＰＣＲ技术扩增获得脑钠肽－９５ｃＤＮＡ,再由它获得脑钠肽－３８ｃＤＮＡ（ＢＮＰ－３８ｃＤＮＡ）选用融合蛋白表达质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ作载体,构建成谷胱甘肽巯基转移酶（ＧＳＴ）和ＢＮＰ－３８的融合基因,该基因在大肠杆菌ＪＭ１０９中表达的最佳体系是：以１：１０扩大培养４ｈ加入终浓度为０．５ｍｍｏｌ／Ｌ的诱导剂ＩＰＴＧ诱导培养４ｈ,诱导表达的融合蛋白量可达５６μｇ／ｍＬ,培养液,是国外文献的３．７３倍,用 相似文献
13.
草莓主栽品种Tudla遗传转化体系的建立 总被引：23，自引：0，他引：23
本研究建立起农杆菌介导的草莓主栽品种Ｔｕｄｌａ的转化体系,获得了转化植株,试管苗叶片与携双元载体ｐＭＯＧ４１０的农杆菌菌株ＥＨＡ１０５共培养３天,共培养后叶片在附加止那霉素４０ｍｇ．Ｌ＾－１的再生培养基（ＭＳ＋ＴＤＺ２．０ｍｇ．Ｌ＾－１＋ＩＢＡ０．１ｍｇ．Ｌ＾－１）上选择培养４周后,外植株再生出明显可见的转化芽,转化芽再生频率达４．５％,转化芽在附加卡那霉素２５ｍｇ．Ｌ＾－１草莓继代培养基上分化成 相似文献
14.
马哈利樱桃PGIP基因克隆及全序列测定 总被引：12，自引：0，他引：12
以马哈利樱桃（Ｐｒｕｎｕｓ ｍａｈａｌｅｂＬ．）基因组ＤＮＡ为模板,用ＰＧＩＰ（多聚半乳糖醛酸酶抵制蛋白）基因保守序列为引物进行ＰＣＲ扩增,得到长度约为１．２ｋｂ的目的片段,将其克隆到ｐＵＣｍ－Ｔ载体上,进行序列测定,结果表明,目的片段全长１１９２ｂｐ,由２个外显子和１个内含子构成,外显子总长９９６ｂｐ,编码３３０个氨基酸,与杏的ＰＧＩＰ基因ｍＲＮＡ序列、编码的氨基酸序殓同源性分别达到９４．１％、 相似文献
15.
ＮＤＶ北京强毒株Ｆ４８Ｅ９经ＳＰＦ鸡胚增殖,超速离心纯化,异硫氰酸胍法提取病毒ＮＡ后,用ＲＴ－ＰＣＲ扩增,得到其融合糖白基因。将扩增产物与ｐＧＥＭ＾Ｒ－Ｔ载体相连接转化,经过ＡｍｐＩＰＴＧ－Ｘｇａｌ（ＡＩＸ）平板筛选,ＨｉｎｄⅢ酶切及ＰＣＲ鉴定,初步获得了含Ｆ基因的阳性克隆。用渐近法对克隆片段进行全序列分析,证明得到了作长１７４４个核苷酸的ＮＤＶ Ｆ蛋白基因。 相似文献
16.
利用苏云金芽胞杆菌转座子Ｔｎ４４３０的转座机制构建了可用于将外源基因整合到染色体的整合载体系列。将Ｔｎ４４３０的解离酶基因（ｔｎｐＩ）和转座酶基因（ｔｎｐＡ）移至两个倒转重复的反向重复序列之外,并用多克隆位点取代;将这种转移结构置入不稳定的穿梭载体ｐＢＭＢ６２２Ｎ中,获得ｐＢＭＢ－Ｆ７和ｐＢＭＢ－Ｒ１４。当红霉素抗性基因插入其中的多克隆位点后,在ＢＭＢ１７１ ｔｎｐＡ基因会随着质粒的消除而消失。 相似文献
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水稻白叶枯病菌dsp基因的克隆,同源性和功能分析 总被引：1，自引：0，他引：1
以经转座子Ｔｎ５诱变的水稻白叶枯病菌ｄｓｐ基因突变体ＸｏｏＭ３１０４为材料，构建了ｄｓｐ基因探针质粒ｐＶＩＲ３。采用分子杂交法，从基因文库克隆中筛选出１个ｄｓｐ基因克隆ｐＮＡＸ３１１１，含２２ｋｂ的外源ＤＮＡ插入片段，具有４个ＫｐｎＩ酶切位点，其中３．０，２．０ｋｂ两个片段与探针质粒中Ｔｎ５侧翼的ｄｓｐ基因序列同源。以ｐＮＡＸ３１１１为探针与Ｘｏｏ日本系统、中国系统及菲律宾系统的菌株，细菌性条斑病 相似文献
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19.
与黄原胶生物合成相关的"1.9" kb EcoRI DNA片段的序列测定分析 总被引：2，自引：0，他引：2
对Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｃａｍｐｅｓｔｒｉｓｐｖ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ（下称Ｘｃｃ）８００４菌株染色体基因组中９．４ｋｂＨｉｎｄⅢＤＮＡ的“１．９”ｋｂＥｃｏＲＩ酶切片段的测序分析结果表明,该ＥｃｏＲＩＤＮＡ片段的实际长度为１．８８ｋｂ。在核苷酸水平上与Ｘｃｃ的ｇｕｍ基因有９８％的一致性;这一ＥｃｏＲＩ片段上有两个有意义的ＯＲＦ：ＯＲＦ１和ＯＲＦ２。ＯＲＦ１是一个不完整的ＯＲＦ;在氨基酸水平上,ＯＲＦ１和ＯＲＦ２的推断性编码产物蛋白分别与ｇｕｍＡ基因编码的ＧｕｍＡ及ｇｕｍＢ基因编码的ＧｕｍＢ蛋白有１００％的一致性。因此在１．８８ｋｂＥｃｏＲＩ片段上存在一完整的ｇｕｍＢ基因。 相似文献
20.
无病毒苹果苗试管微繁技术研究 总被引：1，自引：0，他引：1
对经脱毒的优良苹果品种北海道９号、皇家嘎拉和长富２号进行了试管微繁技术的研究。结果表明：适合于３个品种试管苗增殖的培养基为ＭＳ＋６—ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ,增殖率为２５～３,≥３ｃｍ的试管苗率约为５０％。通用的生根培养基为１／２ＭＳ＋ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２５ｇ／Ｌ－肌醇,平均生根率保持在７５％左右。生根试管苗采用“一步法移栽”,平均成活率在７８％以上。 相似文献