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高效液相色谱串联质谱测定水果和蔬菜中的甲基硫菌灵和多菌灵残留 总被引：1，自引：0，他引：1
建立了同时测定水果和蔬菜中甲基硫菌灵、多菌灵的液相色谱串联质谱法。选取3种代表性水果鸭梨、苹果、西瓜和3种蔬菜菜花、芦笋、胡萝卜进行研究,先用乙腈提取,经石墨化碳氨基复合柱净化后,用C18柱分离,以乙腈和水为流动相进行梯度洗脱,四极杆串联质谱采用电喷雾正离子和多反应监测模式检测。结果表明:甲基硫菌灵在0.05~0.8μg/mL质量浓度范围内,多菌灵在0.005~0.08μg/mL质量浓度范围内线性关系良好,相关系数均不小于0.99;甲基硫菌灵、多菌灵的检出限分别为10μg/kg和1μg/kg。在3个不同的加标水平下,多菌灵的回收率在85%~106%之间,甲基硫菌灵的回收率在78~89%之间,相对标准偏差为分别为6.7%~7.6%和8.7%~9.8%。该方法能有效检测出多种水果和蔬菜中甲基硫菌灵、多菌灵的残留量,且稳定性好,结果可靠。 相似文献
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褐腐病菌Monilinia fructicola是引起多种果树褐腐病的重要病原菌,前期研究发现该病原菌对甲基硫菌灵的抗性与Tub2蛋白的多个氨基酸变异有关。为明确不同类型菌株的温度适应性及乙霉威是否对所有抗性类型菌株均具有抑菌活性,本研究测定了敏感型菌株S及3种抗性类型包括R(E198A)、R(E198Q)及R(F200Y)型菌株的温度敏感性及其对甲基硫菌灵、多菌灵和乙霉威的敏感性差异,同时分析了不同突变类型菌株对苯并咪唑类药剂和乙霉威的交互抗性。结果表明,4种类型菌株的最适生长温度为21~22 ℃,其中R(E198Q)型菌株的最适生长温度最低,且其在低温13 ℃和高温28 ℃条件下,生长速率显著低于其他3类菌株,而S、R(E198A)及R(F200Y)型菌株在所有温度条件下的生长速率均无显著差异。3种抗性类型菌株对甲基硫菌灵的敏感性有所差异,其中R(E198Q)型表现较为敏感,R(F200Y)型在低浓度下与R(E198A)型无明显差异,但在高浓度下对甲基硫菌灵表现较为敏感;对多菌灵的敏感性差异与甲基硫菌灵相似;只是R(E198Q) 和R(F200Y)型菌株对多菌灵比甲基硫菌灵更为敏感。乙霉威的敏感性测定结果表明,R(E198A)型菌株表现敏感,S类型表现为不敏感性,R(E198Q)及 R(F200Y)两种类型均表现为抗性,且抗性水平差别不大。线性相关分析结果表明,仅R(E198A)型菌株和S型菌株对苯并咪唑类杀菌剂和乙霉威敏感性存在显著负相关性 (甲基硫菌灵和乙霉威:r = ?0.992,p = 0.000;多菌灵和乙霉威:r = ?0.982,p = 0.001)。综合分析结果表明,在3类抗性菌株中,仅R(E198A)型菌株对苯并咪唑类杀菌剂和乙霉威存在负交互抗性。 相似文献
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为了评估甲基硫菌灵在猕猴桃上使用的安全性，采用QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱分析方法，对甲基硫菌灵及其代谢物多菌灵在猕猴桃上的残留量进行了分析，明确了其消解规律及半衰期，通过进行膳食摄入风险评估，以推荐甲基硫菌灵在猕猴桃上的最大残留限量 (MRL)，并对其代谢物多菌灵的残留量进行了安全性评价。结果表明:在0.01、0.1和1.0 mg/kg 3个添加水平下，甲基硫菌灵的回收率为85%~102%，相对标准偏差 (RSD) 为1.0%~7.1%；多菌灵的回收率为86%~101%，RSD为2.1%~5.2%；两者的定量限均为0.01 mg/kg。甲基硫菌灵在猕猴桃上的消解符合一级反应动力学方程，半衰期为10.1~10.5 d，属易消解农药。70%甲基硫菌灵可湿性粉剂在猕猴桃上按照推荐剂量及1.5倍推荐剂量 (875和1 166.7 mg/kg) 分别施药3次和4次，推荐采收间隔期为21 d，膳食风险商为78.7%，推荐MRL值为5 mg/kg，该结果通常不会对一般人群健康产生不可接受的风险。依据GB 2763多菌灵在猕猴桃上的MRL值0.5 mg/kg，代谢物多菌灵存在较大的超标风险。建议有关部门制定甲基硫菌灵在猕猴桃上的MRL值，并重新评估多菌灵在猕猴桃上的MRL值。 相似文献
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对来自广东和海南等不同果园的芒果炭疽病菌进行了对多菌灵的抗性测定.结果表明,敏感菌株的最小抑制浓度(MIC)为0.110μg/mL,而抗性菌株在多菌灵500μg/mL下仍生长良好.抗性菌株经继代培养10代后抗性几乎不变,说明其抗性稳定.对抗、感菌株的生物学特性进行测定,然后以产孢量和致病力分别用MIC做简单相关性分析,证明病菌的生物学特性、产孢量、致病力与抗药性无关,因此可以认为病菌对多菌灵的抗药性突变并不影响其正常的生理功能.抗性菌株对甲基硫菌灵、苯菌灵、噻菌灵表现正交互抗性,而对乙霉威和咪鲜胺敏感.病菌在含药培养基上测定的敏感性与在经多菌灵处理过的离体果实上的敏感性有较好的对应关系,可用于大田抗药性的初步检测. 相似文献
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苹果轮纹病菌对多菌灵抗药性监测初报 总被引：19，自引：3，他引：16
苹果轮纹病 ( Macrophoma kawatsukai)是苹果产区重要病害之一[1 ] 。富士、金冠、元帅等品种历年发病较重 ,果实在采收期前后往往大量腐烂 ,造成很大的经济损失。以多菌灵为代表的苯并咪唑类药剂是防治该病最有效的内吸性杀菌剂 ,但是又具有高抗药风险性 ,病菌极易产生抗性使其失去防效。近期调查表明 ,河北保定郊区一些果园的轮纹病对该类药剂似有抗药性的迹象。但尚未见有关苹果轮纹病菌抗药性研究的报道。本研究的目的是筛选有效而简洁的测定苹果轮纹菌抗药性的方法 ,初步确定轮纹菌对多菌灵的敏感基线 ,为进一步查清苹果轮纹病菌的抗… 相似文献
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2007年8-10月从我国5个苹果主产省份轮纹病果上分离获得111个苹果轮纹病菌(Botryosphaeria beren-geriana f.sp.piricola)菌株,采用菌丝生长速率法分别测定了各菌株的抗性水平和抗性频率。结果表明:通过对多菌灵最敏感的泰山海棠菌系进行测定,将其EC50平均值0.0428μg/mL确定为苹果轮纹病菌对多菌灵的敏感基线;所测5个省份山西、河北、辽宁、陕西、河南都有抗多菌灵菌株出现,但大部分抗性菌株的抗药性表现为低抗水平,抗性频率分别为8.3%、18.2%、27.3%、11.1%、76.0%,均未发现中抗和高抗菌株。 相似文献
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美澳型核果褐腐病菌对甲基硫菌灵和啶酰菌胺的敏感性 总被引：4，自引：1，他引：3
采用传统检测方法测定了我国北方地区美澳型核果褐腐病菌对常用杀菌剂甲基硫菌灵和新药剂啶酰菌胺的敏感性,并采用12条ISSR引物对不同抗性水平的菌株进行了分析.结果显示:74株菌株中检测出5株对甲基硫菌灵表现高抗、2株表现低抗的菌株;我国抗性菌株的突变位点与美国加州抗性菌株的突变位点相同;啶酰菌胺对来自我国和美国、新西兰、法国的45株美澳型核果褐腐病菌的EC50分布频率呈单峰曲线,EC50在0.059～0.320 μg/mL之间,平均值为0.174±0.064μg/mL;基于ISSR分析得到的UPGMA聚类组与菌株的来源地及对甲基硫菌灵的抗性无相关性. 相似文献
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2016年,宜都市柑橘深加工企业,在出口到美国的罐头中被检测出多菌灵超标(美国标准多菌灵含量不得≥10ppb),所有产品被退回。不仅给该公司带来了较大的经济损失,而且还造成了我市柑橘严重滞销,严重影响了我市柑橘声誉。为了检验在柑橘挂果期使用甲基硫菌灵对柑橘果实中的多菌灵残留值,探索出符合美国食品药品监督管理局(FDA)对食品中多菌灵10ppb的安全间隔期,指导柑橘深加工企业柑橘原料基地建设,为桔农提供安全用药技术指导,特进行了甲基硫菌灵药剂在柑橘上的安全间隔期试验。试验结果表明:70%甲基硫菌灵可湿性粉剂的安全间隔期为90d,即在6月20日后停止使用该农药,使用次数全年以1次～2次为宜。 相似文献
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Es konnten 132Bacillus-Stämme isoliert und gegenüber7 Rhizoctonia-solani- und 6Pythium-Stämmen auf Antagonismusin vitro untersucht werden. Die gefundenen Antagonisten hemmten die Pilzisolate unterschiedlich stark, so daß Gemische von Antagonisten für die Praxis zu empfehlen sind.There were 132Bacillus-strains isolated and tested for antagonism against 7 strains ofRhizoctonia solani and 6 strains ofPythium spp. The isolated antagonists didn't show a uniform effect against the tested strains ofRhizoctonia solani andPythium spp. For an application in practice it will be better to use a mixture of antagonists.
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Es konntenBacillus-Isolate gefunden werden, die sich in Keimungsversuchen an Samen als antagonistisch gegenüberPythium aphanidermatum undRhizoctonia solani erwiesen. Die Versuche wurden mit Bohnen- und Gurkensamen durchgeführt. Die wirksamsten Antagonisten konnten in infizierter Erde Auflaufraten bei Gurken von 40–60% erzielen.Die Wirksamkeit der Antagonisten an Bohnen war niedriger, hier lagen die Keimraten kaum höher als 30%. Offenbar hängt die Wirksamkeit derBacillus-Antagonisten von der Fähigkeit ab Antibiotika zu produzieren und in Konkurrenz zu anderen Mikroorganismen zu treten. 相似文献
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为建立简单、快速和灵敏地检测瓜类细菌性果斑病菌Acidovorax avenae subsp. citrulli(Aac)和番茄细菌性溃疡病菌Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis(Cmm)的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,以Aac的ugpB基因和Cmm的micA基因为靶标,分别设计、合成和筛选特异性引物,摸索和优化各项反应条件和反应体系,成功建立了以钙黄绿素颜色为指示且只需要金属浴恒温反应30～60 min的LAMP扩增体系。特异性分析表明该LAMP方法可以快速检出5株不同的Aac菌株和2株不同的Cmm菌株,其它对照菌株如燕麦嗜酸菌燕麦亚种A. avenae subsp. avenae、丁香假单胞菌Pseudomonas syringae、水稻黄单胞菌水稻致病变种Xanthomonas oryzae pv. oryzae和茄科雷尔氏菌Ralstonia solanacearum则呈现阴性反应;引物比目前报道的LAMP引物有更高的DNA样品检测灵敏度,Aac和Cmm的灵敏度分别为1.72×10~2fg/μL和1.26×10~2fg/μL。研究结果表明,所设计的Aac和Cmm引物特异性好、灵敏度高,更有利于从源头上控制这2种检疫性细菌病害的流行和传播。 相似文献
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为快速、准确地对番茄枯萎病菌Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici(FOL)和番茄颈腐根腐病菌F. oxysporum f. sp. radicis-lycopersici(FORL)进行检测,基于尖孢镰刀菌F. oxysporum多聚半乳糖醛酸外切酶基因pgx4的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）位点,设计FORL、FOL生理小种1(FOL-R1)、2(FOL-R2)和3(FOL-R3)的竞争性等位基因特异性PCR-SNP(kompetitive allele specific PCR-SNP,KASP-SNP)引物,建立番茄颈腐根腐病菌和番茄枯萎病菌KASP-SNP检测技术,并通过与常规PCR比对及ITS与pgx4序列分析对该检测技术的可靠性进行验证。结果显示,在FORL、FOL-R1、FOL-R2和FOL-R3中存在35个变异SNP位点,设计出18对KASP-SNP引物,筛选出FORL＿KASP、FOLrace1＿KASP、FOLrace2＿KASP和FOLrace3＿KASP共4对分型清晰的... 相似文献
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应用苏芸金杆菌 HD-1制剂,进行防治小菜蛾(Plutella xylostella L.)技术方法的研究,求出了 HD-1制剂对小菜蛾2、3、4龄幼虫杀虫曲线的回归直线方程分别为 y=8.18+2x,y=7.92+2x,y=6.93+2.1x。田间试验结果说明:每亩应用 HD-1制剂0.1～0.15公斤加水75～100公斤,防治小菜蛾效果达90%,高于常用化学农药,防治费用在0.3元左右,低于常用化学农药。HD-1制剂对天敌昆虫、蜘蛛等无不良影响。 相似文献
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番茄枯萎病菌和青枯病菌拮抗细菌的评价 总被引：3，自引：1，他引：2
为筛选出对番茄枯萎病和青枯病有较好防效的生防菌,采用平板对峙法,以番茄枯萎病菌Fusarium oxysporum和番茄青枯病菌Ralstonia solanacearum为靶标菌,从江苏沭阳、宿迁、溧水及内蒙古海拉尔分离到的2 062株细菌菌株中筛选拮抗菌株,并采用平板对峙法、拮抗菌液灌根法、分子生物学方法进行拮抗物质检测、盆栽试验及种属鉴定。结果表明:从2 062株细菌中共筛选到21株对番茄枯萎病和青枯病具有很强拮抗作用的菌株,均能分泌蛋白酶,具有解磷作用;不能分泌几丁质酶和纤维素酶,仅4株细菌能分泌嗜铁素。拮抗细菌SY290对番茄枯萎病和番茄青枯病防效最高,分别达到74.2%和75.0%,SQ728和LS536次之,但防效均大于60%。结合各菌株形态特征、16S r DNA与gyr-B序列分析结果,菌株SY177、SY290和SQ728鉴定为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens,菌株LS536为枯草芽胞杆菌B.subtilis。 相似文献
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凸脐蠕孢菌玉米、高粱专化型的细胞壁降解酶活性及基因表达分析 总被引：1，自引：1，他引：0
为探明玉米专化型和高粱专化型凸脐蠕孢菌的细胞壁降解酶在致病过程中的作用,采用酶活性检测方法测定了2种专化型的细胞壁降解酶活性,并检测了相关基因的表达。结果表明:高粱专化型凸脐蠕孢菌的聚甲基半乳糖醛酸酶(PMG)活性为115.84 U/mg,略高于玉米专化型;玉米专化型的多聚半乳糖醛酸酶(PG)和纤维素酶(Cx)的活性分别为151.76 U/mg和168.53 U/mg,略高于高粱专化型;且同一种专化型菌株的细胞壁降解酶活性存在差异。2种专化型的细胞壁降解酶基因表达量存在差异,Cx基因在2种专化型互作过程中均随病程的延长而大幅度上调表达;高粱专化型的PG基因随病程的延长大幅度上调表达,而玉米专化型的PG基因随病程的延长上调表达量有所下降;高粱专化型的PMG基因随病程的延长大幅度上调表达,而玉米专化型的PMG基因随病程的延长下调表达。推测产酶能力、基因表达和基因时间表达的差异可能是引起凸脐蠕孢菌专化型致病专化性的诱因之一。 相似文献
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RsmA属于CrsA/RsmA蛋白家族成员,是一类RNA结合蛋白,作为一类全局性的转录后调控因子,调控碳代谢、生物膜形成、游动性以及致病性相关基因的表达等。同源性搜索结果显示,水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)RS105中存在rsmA基因,其与白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)PXO99A的rsmAXoo同源性为100%。但是,r smAXoc基因在致病性中的功能未知。本研究构建了Xoc的rsmA缺失突变体RΔrsmA。寄主水稻和非寄主烟草接种结果显示,RΔrsmA在水稻上仍具有致病性,在非寄主烟草上也能够激发HR反应,这些结果与已鉴定的Xoo rsmA突变体表型不一致。但是,与野生型菌株相比,RΔrsmA在感病水稻上的毒性显著降低;在丰富和贫乏的培养基中,RΔrsmA的生长能力也明显减弱。其他毒性相关表型的测定结果显示,与野生型菌株相比,RΔrsmA在半固体培养基上的游动能力减弱,生物膜形成能力增强,胞外多糖产量明显降低,胞外蛋白酶的活性增加。这些结果暗示在Xoc中rsmA为重要的毒性相关基因,在Xoo和Xoc中RsmA在致病性中的功能存在一定的差异,RsmA下游调控基因的鉴定可能为解析其在2个水稻致病变种中功能的差异提供线索。 相似文献
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选择合适的内参基因是采用实时定量PCR研究基因表达获得可信数据的关键。以小麦在条锈病菌及温度双因素胁迫为研究对象,采用实时荧光定量PCR评价了CDC、RLI、ACTIN和26S基因的表达情况,采用geNorm和NormFinder软件进行了比较分析。结果表明,小偃6号小麦在常温(15℃±1℃)未接种条锈病菌,以及接种条锈病菌并培育至花斑期分别在高温(20℃±1℃)、变温(20℃到15℃)条件处理中,基因RLI表达不稳定,基因ACTIN在常温条件下以及在条锈病菌及高温处理条件下的表达量相对稳定,但在变温条件下波动较大。表达最稳定的基因是26S,其次是CDC基因,它们可以作为小偃6号-CYR32-温度互作体系中基因表达实时荧光定量PCR研究的内参基因,26S和CDC是最佳内参基因组合。 相似文献