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转基因延熟番茄"华番一号"的品系特异性检测方法 总被引：3，自引：0，他引：3
本文使用反向PCR方法克隆了转基因延熟番茄"华番一号"(Bioscein)的外源基因和番茄基因组之间的一段边界序列,并依据此段序列设计了具有品系特异性的引物和荧光探针,以实时荧光PCR技术建立了华番一号的品系鉴定检测方法,扩增片段长108bp,横跨在Nos启动子和番茄基因组之间.以转基因大豆(RR)、转基因玉米(Mon810)、转基因抗草甘膦油菜、转基因棉花(保龄棉)、非转基因番茄、马铃薯、茄子、大椒、大米、小麦、烟草等为试材,证明本方法同其它转基因作物及其它蔬菜无非特异性反应.本方法在检测华番一号番茄时,相对检测灵敏度可达到0.1%,绝对灵敏度达到20个拷贝.由于本方法的PCR扩增产物长度只有108bp,因此该方法也可以用于检测加工产品中的转基因成分,或作为常规PCR定性检测后的确证实验方法. 相似文献
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本文针对大豆内源基因Lectin和转基因大豆DAS81419品系的5′端插入位点序列,设计特异性引物及探针,建立了同时检测转基因大豆DAS81419品系和大豆内源基因Lectin的二重荧光定量PCR方法,运用15种转基因大豆、3种转基因玉米、1种转基因油菜、1种转基因水稻和非转基因大豆对该方法进行了特异性评价,并分析了该方法的灵敏度和稳定性。结果显示,该方法能准确从20种转基因样品和1种非转基因样品中检出靶目标,检测结果与待检样品信息一致,表明本方法具有良好的特异性;灵敏度高达0.01%;并具有良好的重复性。该方法特异性强、灵敏度高、稳定性强,适用于各口岸实验室进行转基因大豆DAS81419的快速、准确的检测。 相似文献
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康乃馨（Dianthus caryophyllus L.）是全球贸易量最大的鲜切花之一。转基因康乃馨因颜色新奇、花型丰富、插瓶期长等特点深受消费者喜爱。现有19个转基因康乃馨品系列入全球商业化种植，其中18个品系因转入了类黄酮-3’,5’-羟化酶（flavonoid-3’,5’-hydroxylase,F3’5’H）基因而产生了蓝紫色花瓣的性状。18个品系转入的F3’5’H基因中11个来源于大花三色堇（bp40基因），还有7个来源于矮牵牛（hf1基因）。我国目前没有批准转基因康乃馨进口，更缺乏相关检测方法。建立转基因康乃馨外源基因筛查方法，用以防范转基因康乃馨种苗、鲜切花等非法进入我国显得至关重要。本研究针对转基因康乃馨中最常见的两种不同来源F3’5’H基因，建立了普通PCR和实时荧光PCR检测方法，构建了适于两个基因检测的质粒分子，并将这两种方法应用于进境产品检测。结果表明，建立的bp40基因和hf1基因检测方法均具有特异性，普通PCR方法的检测下限（LOD）可分别达到25拷贝和12.5拷贝，实时荧光PCR方法的LOD均为10拷贝，在进境康乃馨种苗等样品中未检出该基因。综上，本研究建... 相似文献
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基于微滴式数字PCR平台,研究建立了一种在同一个微滴反应体系中同时测定样品中两种靶序列的双重微滴式数字PCR定量方法。结果表明,所建立的T25品系双重PCR方法能特异性检出转基因玉米T25,而其他转基因玉米、油菜、水稻等作物品系均没有扩增。灵敏度实验数据表明,所建立的T25双重数字PCR方法,在相对标准偏差≤25%时可以检测到4.6个T25特异性边界序列分子,在不考虑各重复间相对标准偏差的情况下可以检测到1个拷贝。定量结果准确性比较研究显示,与采用分别定量内源基因和T25边界序列来定量转基因成分结果相比较,所建立的T25双重数字PCR定量结果因消除了取样误差结果更准确,以上研究结果表明双重微滴式数字PCR定量方法比单重微滴式数字PCR定量方法更适用于进出境农产品转基因成分的定量检测。 相似文献
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应用环介导等温扩增技术建立一种快速灵敏的转基因番木瓜GM YK品系检测方法。针对转基因番木瓜GM YK品系外源基因与内源基因结合处序列设计1组特异性引物,利用SYBR Green荧光PCR仪实时监测扩增过程,对反应体系进行优化。用优化后的反应体系检测LAMP方法的灵敏性、特异性,并对市售番木瓜进行检测。LAMP检测方法反应速度快,在60 min内即可完成扩增,检测结果易于观察,通过肉眼观察染色情况即可分辨,该方法灵敏度高,检测限可达到5.78 pg,并且具有良好的特异性。LAMP检测方法可快速、灵敏、特异的检测转基因番木瓜GM YK品系,并适用于基层和现场检测。 相似文献
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玉米褪绿斑驳病毒实时荧光RT-PCR检测方法研究 总被引：2，自引：0，他引：2
玉米褪绿斑驳病毒(Maize chlorotic mottle virus,MCMV)是我国对外公布的检疫性有害生物。本研究根据该病毒外壳蛋白基因的保守序列,设计得到特异性引物及Taqman荧光探针,建立了MCMV的实时荧光RT-PCR方法,并对其灵敏度与特异性进行了研究。该方法针对2个不同来源的毒株均能得到典型扩增曲线,而没有从小麦线条花叶病毒、玉米粗缩病毒和玉米矮花叶病毒的RNA得到扩增曲线,表明引物与荧光探针具有良好的特异性。针对玉米褪绿斑驳病毒RNA不同稀释度样品,实时荧光RT-PCR检测低限达到10-5稀释度,检测灵敏度要比普通RT-PCR高出100倍。因此,本研究建立的MCMV实时荧光方法具有特异性强、灵敏度高和快速有效的优点。 相似文献