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香蕉枯萎病菌双向电泳体系的建立及蛋白质组学初步研究 总被引：1，自引：1，他引：0
旨在对香蕉枯萎病菌胞内蛋白的提取方法进行优化,建立菌体胞内蛋白质双向电泳体系。在原有的基础上优化菌体胞内蛋白提取方法,提取蛋白质进行双向电泳,并应用质谱技术鉴定一些蛋白质来验证提取蛋白质的质谱兼容性。通过扩大培养的方法获得足够的生物量,采用过滤法收集菌体用来提取蛋白质,涡旋振荡30 min能有效破胞,提高蛋白质提取效率。甲醇和丙酮各清洗2次能有效的清除蛋白质中的杂质,得到了高质量的蛋白质图谱,选取了10个蛋白质点进行质谱鉴定,成功的鉴定了8个蛋白质点,代表了8种蛋白质。这些结果表明提取的蛋白质和采用的胶内酶解方法具有良好的质谱兼容性,能为进一步研究不同菌体之间的差异表达蛋白质提供技术支持。 相似文献
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盐胁迫下棉花叶片差异蛋白表达的分析 总被引：2，自引：0，他引：2
以耐盐的陆地棉品种中07为研究材料,在其生长的三叶期,用未处理和0.4%NaCl胁迫处理24h的幼苗,分别提取其叶片全蛋白。通过等电聚焦和第二向SDS-PAGE技术获得完整的棉花叶片总蛋白图,利用ImageMaste-2DElite5.0软件分析各个差异蛋白在对照和0.4%NaCl胁迫24h后棉花叶片中的相对表达量,并选取质量好、实验重复性高的10个特异的差异表达蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF/MS)鉴定。结果表明,从对照和盐胁迫处理的双向电泳图谱中共检测到24个差异蛋白质点,这些差异蛋白质点的等电点分布集中在5.0～6.5之间,分子量分布集中在40.0～110.0kD之间;进一步质谱(MALDI-TOF-TOF/MS)分析鉴定的10个差异蛋白质点,其中4个蛋白质点获得了鉴定结果,这4个差异表达蛋白质点分别为1,5-二磷酸核酮糖羧化/氧化激酶α2(编号4)、1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/氧化酶大亚基(编号5)、未知蛋白产物(编号19)和OEE2(编号32)。我们初步推测OEE2和1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/氧化酶可能与棉花耐盐胁迫特性有关。 相似文献
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为了研究谷子和小麦的淀粉、蛋白质结构、性状的差异,探索改良谷子品质的新思路,通过籽粒总蛋白提取法提取小麦与谷子的总蛋白,通过小麦谷蛋白提取方法提取小麦与谷子的谷蛋白,通过醇类物质提取小麦和谷子中的醇溶蛋白,并通过SDS-PAGE对总蛋白及谷蛋白条带进行鉴定、A-PAGE对醇溶蛋白带谱进行鉴定,并通过扫描电镜观察籽粒内部结构,分析小麦与谷子蛋白和淀粉的结构差异。结果表明,谷子谷蛋白含量低,存在一定量的醇溶蛋白,且存在一定的多态性;小麦淀粉包含A、B、C 3种淀粉粒,淀粉体间隙紧密填充蛋白体,谷子淀粉体呈多边形,体积小于小麦淀粉体,且仅含有2种类型的淀粉粒。谷子、小麦的淀粉类型、谷蛋白含量存在明显差异,醇溶蛋白具有品种间特异性,谷子的醇溶蛋白带谱数量明显低于小麦,为从淀粉发育、蛋白质含量等方面改良谷子品质提供了新的思路。 相似文献
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为了鉴定巴西橡胶树胶乳中大小橡胶粒子之间的差异表达蛋白质以及揭示橡胶生物合成的分子机制,采用差速离心的方法,从橡胶树的新鲜胶乳中分离纯化总橡胶粒子、大橡胶粒子和小橡胶粒子,用扫描电镜和SDS-PAGE以及质谱等方法分别检测和鉴定大小橡胶粒子的分离效果及其差异表达蛋白。结果表明,大小橡胶粒子可用差速离心法得到有效的分离和纯化,它们在SDS-PAGE电泳图谱上表现出差异表达的橡胶粒子蛋白,如分子量为22.0 kDa、24.5 kDa和120 kDa蛋白等,并对其中分子量为24.5 kDa的小橡胶粒子蛋白（SRPP）进行了质谱分析。橡胶树大小橡胶粒子差速离心法的建立,为大小橡胶粒子差异表达蛋白质的分离和鉴定奠定了一定的基础,将进一步促进橡胶树橡胶粒子的起源和发育,以及橡胶生物合成分子机制的研究。 相似文献
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以甜菜抗病和感病材料为试验材料,对田间产量进行了比较。通过比较蛋白质垂直电泳图谱,比较了TCA/丙酮沉淀法、可溶性蛋白提取法和酚提取法3种不同蛋白质提取方法,水培进行病毒胁迫处理后,通过Image Master 2D Platinum Trial 5. 0软件分析,扣除差异蛋白点,进行胶内蛋白质鉴定分析。结果表明:3种蛋白质提取方法中的TCA/丙酮沉淀法提取效果较好。田间产质量比较显示,抗病材料在苗期及生长后期长势要优于感病材料,收获后块根产量和含糖量也要高于感病材料,抗病材料表现良好。蛋白质双向电泳后通过软件分析,扣除具有明显差异的蛋白点78个,总共鉴定出了34个有效蛋白质ID,通过NCBI和The Beta vulgaris Resource数据库Blast比对发现,病1和病2主要表达的功能蛋白以光合作用、糖代谢、呼吸抗氧化作用、信号转导、脂代谢及一些未知蛋白为主,而病5和病6主要表达光合作用蛋白和呼吸抗氧化蛋白,即自身应激反应所表达的蛋白质。 相似文献
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黄曲霉毒素B_1胁迫相关小鼠肝脏线粒体蛋白的初步研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为了加强经黄曲霉毒素B1感染后肝脏线粒体差异表达蛋白的检测,以助于预防中毒的爆发和扩散,以黄曲霉毒素感染小白鼠,10周后提取小白鼠的线粒体蛋白,通过蛋白质双向电泳技术研究黄曲霉毒素对小鼠线粒体蛋白组差异表达的影响。双向电泳结果发现有31个蛋白质点发生显著变化,其中有新出现或明显上调的7个蛋白质点以及缺失的或明显下调的6个蛋白质点。这些点大多处于5.2~9.0pI值范围内,分子量处于8~165ku之间。据此推测,毒素可能通过改变这些蛋白表达量,从而影响线粒体的功能,进而对小鼠产生毒性作用。 相似文献
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超级稻花后强、弱势粒灌浆相关蛋白质表达的差异 总被引：2，自引：0，他引：2
为进一步揭示水稻强、弱势粒灌浆差异的机理,以2个超级稻品种两优培九(两系杂交籼稻)和淮稻9号(粳稻)为材料,通过双向电泳观察花后强、弱势粒灌浆相关蛋白质表达的差异并对差异蛋白进行质谱分析。结果表明,弱势粒花后3~15 d的灌浆速率和最终粒重均显著低小于强势粒。花后3 d、8 d和15 d弱势粒中蛋白质表达的点少于强势粒,花后25 d则弱势粒多于强势粒。花后强、弱势粒间差异蛋白质表达量在2倍以上的点有类似变化趋势。选择有显著差异的27个蛋白点进行质谱分析,其中14个点的功能得到鉴定。这些蛋白质分别参与籽粒的淀粉合成、蛋白合成、光合作用、能量代谢、环境适应以及细胞信号转导等。说明强、弱势粒间多种灌浆相关蛋白质表达的差异是其灌浆和粒重差异的重要原因。 相似文献
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为揭示复等位基因遗传的大白菜雄性不育分子机制,通过基于质谱的蛋白质组学同位素相对标记与绝对定量技术技术(i TRAQ),开展了大白菜核基因雄性不育蛋白质组学研究,以找到不育与可育材料中差异表达蛋白,从蛋白水平来进一步揭示大白菜雄性不育的分子遗传机制。通过研究,共发现了358个差异蛋白,其中可育中上调表达的蛋白有226个,下调表达的蛋白有132个,GO分析结果表明,鉴定的蛋白质组数据具有较好的生物学功能覆盖范围。通过双向电泳验证,差异蛋白点差异特性与i TRAQ结果类似,表明i TRAQ用于差异蛋白分析结果可靠。 相似文献
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《分子植物育种》2017,(10)
以导入红海榄总DNA的耐盐番茄及其野生型番茄为材料,于3~4片真叶期分别用调和海水(约1%盐度)和自来水进行灌溉,处理14 d后,采用BPP法提取番茄叶片的全蛋白质,通过等电聚焦和第二向SDSPAGE电泳得到清晰的番茄叶片全蛋白质双向电泳图谱。利用Image Master 2D platinum 6.0软件对海水处理及对照条件下耐盐番茄及野生型番茄差异表达的蛋白进行分析发现,蛋白质双向电泳图谱大约有800个蛋白点,共检测到123个差异蛋白点,每张图谱的匹配率达90%。海水处理下的耐盐番茄与野生型番茄的叶片全蛋白质图谱中共检测到82个高丰度的差异蛋白点,其中42个蛋白点的表达量为上调,40个蛋白点的表达量为下调。对差异表达的蛋白质点进行了基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF/MS)鉴定,得到了相关的差异蛋白质信息,为揭示耐盐番茄的耐盐机理、为克隆相关耐盐基因提供了帮助。 相似文献
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采后嘎拉苹果果实细胞壁代谢及关键酶基因表达特性研究 总被引：2，自引：0，他引：2
以嘎拉苹果为试材,研究其果实细胞壁代谢及关键酶基因表达特性及受1-MCP、乙烯利和低温的影响效应。结果表明,常温下,嘎拉果实硬度变化与WSP显著正相关,与CSP和半纤维素显著负相关,与ISP的关系不大;1-MCP和低温处理显著抑制了WSP含量上升,减缓了CSP和半纤维素降解。嘎拉果实细胞壁酶中,β-Gal活性最高、增加最快,其基因表达亦迅速增加,α-L-Af活性和基因表达虽增加速率低于β-Gal,但二者变化规律相似,均显著受到1-MCP和0℃低温的抑制;PG和PME活性和基因表达量亦呈增加趋势,但未能完全被1-MCP处理和0℃低温所抑制;相关性分析表明,其细胞壁酶活性变化均与硬度呈显著负相关性,并显著受到1-MCP和低温的影响。但是,乙烯利处理虽对嘎拉果实软化有一定的促进作用,但效果不显著。 相似文献
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XIONG Lan~ 《保鲜与加工》2004,(11):22-25
The paper Inspects the Bcl-2 and Bax protein expressions in vivo Wistar mice cells stimulated by steep pulse field, and puts forward the mechanism of steep pulse inducing apoptosis. Bcl-2/Baxprotein expression positive rate and apoptotic cell rate are determined by using immunohistochemical technique and TUNEL in 18 Wistar mice transplanted with Walker-256 cell line. Compared with control group, protein expressions of Bcl-2 and Bax in treated group decrease and increaserespectively. Apoptosis occurrswhen tumor tissue are impulsed by steep pulse field. 相似文献
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Hongshun Yang Fusheng Chen Hongjie An Shaojuan Lai 《Postharvest Biology and Technology》2009,51(3):391-398
Firmness is an important postharvest quality property of fruit. To investigate the reasons for firmness differences between soft and crisp fruit cultivars, two peach (Prunus persica L. Batsch) cultivars (soft and crisp) were selected to compare the nanostructures of pectins. Water-soluble pectin (WSP), chelate-soluble pectin (CSP) and sodium carbonate-soluble pectin (SSP) were extracted and nanostructures were conducted and analyzed using atomic force microscopy (AFM). The results show that SSP chain lengths were different between the two cultivars with average SSP lengths of 249 nm and 57 nm for fruit of the crisp and soft cultivars, respectively, while the WSP and CSP chain lengths were not much different. There were no statistical differences for chain heights and widths in the three kinds of pectins between fruit of the two cultivars. All the chain heights were about 1–5 nm. The results indicate that neutral sugar-rich pectins from the primary cell wall of peach flesh might be the cause of the main differences in pectin nanostructures between the two cultivars. The neutral sugar-rich pectins in primary cell walls of peach might also be the reason for firmness differences. 相似文献
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为了提高茶树菇的贮藏品质,通过采用硅窗气调包装与普通气调包装对茶树菇进行贮藏,研究硅窗气调包装与普通气调包装的茶树菇总糖含量、原果胶含量、可溶性果胶含量、蛋白质含量及总氨基酸含量、游离氨基酸含量和粗纤维含量的变化情况。结果表明：与普通气调包装相比,硅窗气调包装贮藏的茶树菇总糖含量、原果胶含量、蛋白质含量及总氨基酸含量下降较慢,而粗纤维含量、可溶性果胶含量及游离氨基酸含量增加较少。由此得出,硅窗气调包装是一种贮藏茶树菇比较好的方法,用这一方法贮藏的茶树菇保持了较多的糖类和蛋白质,保持了较好的口感和相应的脆度,具有更好的贮藏品质。 相似文献
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为了提高基因工程疫苗对新城疫病毒F蛋白的表达能力,从而为研制高效基因工程疫苗奠定了基础。利用Western blot技术检测含有不同启动子与表达元件的重组杆状病毒,在中国仓鼠卵巢细胞中其F蛋白的表达量的差异。Western blot结果显示,含有CMV立即早期增强子区与鸡肌动蛋白启动子区的复合启动子的质粒表达F蛋白量较含人巨细胞病毒立即早期启动子(CMV)的质粒提高了24.52%~231.18%,含有土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)能够提高F蛋白表达量2.9~8.6倍,而腺伴随病毒末端反向重复序列(ITRs)对质粒F蛋白表达量提高1.95%~9.27%。CBA启动子的启动能力远高于CMV的启动能力,调控元件WPRE能够显著提高F蛋白的表达量,而ITRs元件对于F蛋白的表达量未产生显著提高。 相似文献
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动物的性别在畜牧业是一项很重要的经济性状,而哺乳动物的性别决定受睾丸决定基因Sry的启动,获得SRY蛋白并探索它与其他相关因子之间的相互关系对于深入了解该因子的作用机理和寻求高效经济的性别控制方法尤为重要。本研究以小鼠为实验材料,通过PCR、质粒重组、酶切和测序等方法构建小鼠Sry的原核表达载体,使用IPTG诱导蛋白表达、SDS-PAGE电泳和western blotting等方法检测重组表达载体的原核表达。PCR、酶切和测序结果一致显示成功地构建了原核表达载体pET-21b-Sry;使用anti-Sry和anti-His特异性抗体进行的western blotting实验结果验证了蛋白表达的正确性。本实验不仅实现了哺乳动物性别决定因子的Sry原核表达,而其还获得了具有生物活性的SRY蛋白,对于深入研究Sry及其他相关基因的相互作用奠定了实验基础。 相似文献
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《Medicinal Plant》2014,(5)
[Objective] To extract and isolate the effective components from Sorbus tianschanica,and to research the hypoglycemic effects of n-Butanol part. [Methods]S. tianchanica was extracted by reflux extraction. After gradient elution,n-Butanol part was obtained. With diabetic mice induced by STZ as the model,blood glucose test was carried out. [Results]n-Butanol part in administration group had significant differences in hypoglycemic effects with that in model group(P 0. 05),showing that n-Butanol part had certain antidiabetic functions on diabetic mice induced by STZ. And the hypoglycemic effects showed a reducing trend as the administration dosage decreased,indicating that administration dosage had positive correlation with hypoglycemic effects. n-Butanol in different parts could reduce the blood glucose of diabetic mice in different degrees. And the blood glucose value in high-dosage group(8 g /kg) reduced greatly at 2 h after administration,having great differences with that in model group(P 0. 01). This showed that high dosage was helpful to the glucose tolerance of diseased mice,and could effectively protect against the rapid increase of blood glucose after meal. n-Butanol had no significant effects on the blood glucose of normal mice. However,the morality rates in high-and middle-dosage groups were both higher than that in low-dosage group; and the morality rate in administration group was lower than that in model group,showing that n-Butanol could promote the survival rate of diabetic mice. [Conclusions]S. tianchanica had certain effects of anti-diabetes. 相似文献
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分别以2,3,5 d叶龄的栽培小麦京411、偏硬001和杂交F1幼苗为材料,利用动态蛋白质组技术,对F1及双亲的蛋白质变化做了比较分析,结果表明,在双亲及F1中蛋白质差异表达现象被观察到,其中在5 d的叶子中最为明显。如在发育2 d和3 d的F1叶子中,各有15个蛋白质斑点的含量产生变化,而在5 d叶龄的叶子中,这种有变化的蛋白质斑点达27个,在这些变化的蛋白质中,偏双亲和低于双亲的为多数,如5 d的叶子中分别占41%和44%,同时,在F1叶片中观察到有蛋白质消失和新的蛋白质诱导现象产生。这些结果表明,杂种中存在蛋白质的差异表达现象,展开这方面的研究有助于对杂种优势形成机理的理解。 相似文献
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热应激小鼠附睾组织HSP70表达的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
利用化学恒温培养箱对小鼠实施42℃1h/d的热应激处理,建立持续的全身热应激动物模型。在热应激持续到8d、13d、21d和35d时,颈椎脱臼处死对照组和热应激组小鼠,应用改良巴氏染色法检测附睾精子畸形率,免疫荧光组织化学和蛋白质印迹分析的方法检测附睾组织HSP70的表达。结果显示：热应激组小鼠附睾精子畸形率随着热应激持续时间的延长而升高,且显著（P<0.05）高于对照组;对照组小鼠附睾组织HSP70呈极强表达（+++）,而热应激组小鼠附睾组织HSP70的表达随着热应激持续时间的延长而减弱,当热应激持续到35d时呈极弱的表达（±）。结果表明：热应激损伤了附睾的功能,使附睾精子畸形率增加;附睾内HSP70为非热诱导型,HSP70可能在附睾精子的成熟过程发挥特殊的作用。 相似文献