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1.
鸡奇异变形杆菌外膜蛋白的抗血清制备及其荧光标记抗体检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
为建立鸡奇异变形杆菌(P.mirabilis)直接荧光标记抗体检测方法,本研究提取P.mirabilis外膜蛋白(OMP),以OMP免疫健康新西兰家兔制备兔抗鸡P.mirabilis OMP高免血清,纯化的IgG,用FITC标记得到兔抗鸡P.mirabilis OMP-IgG的荧光标记抗体,建立直接荧光标记抗体检测方法。应用该方法检测临床样品184份,检测结果与细菌分离法和微量平板凝集比较,结果表明提取的OMP含有6种成分,分子量分别为67.0ku、63.1ku、57.5ku、53.7ku、43.0ku和31.6ku,经过优化的OMP-IgG荧光标记抗体最佳工作浓度为0.25mg/mL,最佳感作时间为30min。临床检测结果显示该方法具有简便、快速、敏感和特异性强等优点,为鸡P.mirabilis病的流行病学调查和临床快速诊断提供了技术保障。 相似文献
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为了获得兔抗鸡碱性氨基酸转运载体b0,+AT多克隆抗体,并对多克隆抗体进行特异性分析,本试验利用鸡b0,+AT cDNA全序列(GenBank登录号HQ338713)进行生物信息学分析,预测其蛋白质理化性质、跨膜区域、二级结构及抗原表位,并设计出1段抗原多肽;构建鸡pET-32a(+)-b0,+AT质粒,原核表达融合蛋白经纯化后,注射于新西兰大白兔,经3次加强免疫后,制备兔抗鸡b0,+AT多克隆抗体,并采用酶联免疫分析(ELISA)和蛋白质免疫印迹(Westernblot)技术分析其效价和特异性。结果如下:1)鸡肠道b0,+AT分子质量为53.8 ku,等电点为8.27,编码493个氨基酸,其中含33个强碱性氨基酸残基(K、R)、28个强酸性氨基酸残基(D、E)、235个疏水性氨基酸残基(A、I、L、F、W、V)、122个极性氨基酸残基(N、C、Q、S、T、Y);经推测,b0,+AT有12个跨膜螺旋结构,由32.05%α-螺旋、25.96%延伸链和41.99%无规则卷曲组成。2)成功构建了鸡pET-32a(+)-b0,+AT质粒并获得兔抗鸡b0,+AT多克隆抗体,抗体效价可达到1∶204 800,且特异性较好。3)利用制备的兔抗鸡b0,+AT多克隆抗体作为一抗,肠道组织膜蛋白为抗原,采用Western blot验证获得预期的特异性条带,一抗稀释比例为1∶4 000。结果提示,本试验成功制备了与膜蛋白b0,+AT特异性较好的多克隆抗体,同时其在鸡肠道组织中具有较好的应用效果。 相似文献
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为分析鸡主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类抗原β亚基BLB蛋白在鸡脾脏中的表达情况,本研究采用RT-PCR技术从鸡脾细胞中扩增了BLB基因的保守区第3外显子的部分序列,大小约为380 bp.将其克隆于表达载体pET-30a(+)中.在大肠杆菌BL21 (DE3)中,经IPTG诱导表达,获得大小约为19ku以包涵体形式存在的His-BLB重组蛋白.切取含有重组蛋白的SDS-PAGE胶免疫实验兔,获得抗血清.以制备的血清通过westemblot在鸡脾脏中检测到MHCⅡ类分子特异性条带,其大小约为28 ku,与BLB天然蛋白的大小相符合.本研究为进一步分析MHC-Ⅱ类分子在鸡体内的蛋白表达水平提供了依据. 相似文献
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本研究采集了上海地区规模化蛋鸡场、林地散养鸡场、种山鸡场的健康产蛋鸡群共240份血清,进行了鸡毒支原体感染抗体的ELISA血清学检测。结果显示,规模化蛋鸡场和林地散养蛋鸡场鸡毒支原体感染抗体平均阳性率分别为97.8%和93.3%,两种饲养模式的鸡群鸡毒支原体感染率都很高,两者无显著差别;3个种山鸡场检测结果差异较大,分别为100%、0、30%,说明种山鸡对鸡毒支原体的感染并不普遍;对规模化肉鸡场鸡群鸡毒支原体抗体跟踪结果表明,在65日龄时鸡毒支原体在鸡群中已经存在,65~90日龄期间鸡群普遍感染鸡毒支原体,肉鸡上市前感染抗体阳性率达到94%。结果表明,产蛋鸡群鸡毒支原体感染情况与饲养方式没有相关性,均呈现较高阳性率,种山鸡感染并不普遍,肉鸡群感染鸡毒支原体高峰期在65~90日龄之间,预防鸡毒支原体病的最佳日龄应在30~60日龄之间。 相似文献
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建立了一种鸡传染性喉气管炎(ILT)的荧光抗体检测技术，用荧光素标记ILT兔源超免疫血清抗体，对15份人工感染ILT病鸡、5份ND病鸡和10份健康鸡的气管分泌物进行了检测，并对该技术做了特异性和敏感性测定。结果显示，人工感染ILT病鸡的阳性检出率高达100％，ND病鸡和健康鸡的阳性检出率均为0；该ILT兔源超免疫血清荧光抗体检测技术特异性强、敏感性高。 相似文献
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鸡Akirin2和GM-CSF促进传染性法氏囊病病毒VP2基因DNA疫苗免疫效果的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为提高鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因DNA疫苗的免疫效力,将IBDV VP2、鸡Akirin2和鸡GM-CSF三基因编码区串联后克隆到真核表达载体pTriEx-4上,用构建的pT-VP2-Akirin2-GM-CSF重组质粒体外转染293T细胞,然后提取表达产物进行SDS-PAGE分析。结果在58、35、22ku附近各有一蛋白条带。用pT-VP2-Akirin2-GM-CSF免疫SPF鸡,加强免疫2周后,攻IBDV BC6-85强毒,4d后统计保护率。结果发现,注射14d后,pT-VP2-Akirin2-GM-CSF质粒免疫组血清中能检测到特异性IBDV抗体和IBDV中和抗体,第28天,该组鸡的抗体滴度极显著高于空白对照组(P0.01),该组鸡外周血淋巴细胞增殖能力也极显著高于空白对照组(P0.01)。说明VP2-Akirin2-GM-CSF三基因串联DNA疫苗有很好的应用前景。 相似文献
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为制备抗分泌片多克隆抗体,采用分子筛凝胶层析、离子交换层析和硫酸铵盐析法从猪初乳中分离纯化分泌片和SIgA。SDS—PAGE鉴定表明,纯化的SIgA呈现分泌片、重链和轻链三条带,大小约为70ku;凝胶薄层扫描分析SIgA和分泌片纯度分别为90％和89％;琼脂扩散鉴定表明,SIgA和分泌片与抗分泌片单克隆抗体发生了特异反应。以纯化分泌片为抗原,制备抗分泌片多克隆抗体,琼脂扩散检测多抗的效价为1：32。高纯度分泌片的提取及高效价抗分泌片多抗的制备为粘膜负．疫研究奠定了物质基础。 相似文献
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新城疫快速诊断试纸条的研制及初步应用 总被引：5，自引：1，他引：4
以红色胶体金标记鸡新城疫(ND)抗体，兔抗鸡ND抗体和兔抗鸡二抗包被于硝酸纤维素膜上，研制出快速诊断鸡新城疫的免疫层析测试条。将试纸条插入样品中，利用滤膜的层析作用，使加在膜一端的样品，向另一端移动，在移动过程中抗原与抗体发生反应，产生肉眼可见的红色条带。该法具有操作简便、快速准确、特异性强、重复性好，无需任何仪器设备等特点，对于鸡场中快速诊断及防治本病具有重大意义。 相似文献
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通过制备兔抗鸡传染性腔上囊病病毒（IBDV）、小鼠抗IBDV和绵羊抗兔免疫血清,并纯化绵羊抗兔辣根过氧化物酶标记抗体,采用方阵滴定法测定其最佳使用浓度,建立了IBDV双夹心ELISA检测方法。结果显示,包被抗体的最适稀释度为1：160,兔抗IBDV的最佳稀释度为1：200,酶标记抗体的最佳稀释度为1：400。特异性和重复性试验结果表明,该方法特异性强,重复性好,与鸡新城疫、鸡传染性支气管炎和鸡减蛋综合征病毒抗原均不发生交叉反应。对人工感染病例的检测结果表明,建立的双夹心ELISA方法可用于临床快速诊断IBDV。 相似文献
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鸡和猪分泌型免疫球蛋白A结构蛋白的比较 总被引：11，自引：1，他引：11
通过SephadexG 2 0 0凝胶过滤和DEAE纤维素柱 ,分别从胆汁和初乳中提纯鸡和猪的分泌型免疫球蛋白A (SIgA)。SDS PAGE结果显示 ,鸡SIgA的轻链分子量约为 2 6 0 0 0～ 2 80 0 0 ,与鸡IgG的轻链分子量相似 ,而重链分子量约为 670 0 0～ 70 0 0 0 ,比鸡IgG的分子量要大。猪的SIgA与猪IgG的轻链和重链的分子量均相同。轻链的分子量约为 2 6 0 0 0～ 2 80 0 0 ;重链的分子量约为 53 0 0 0～ 570 0 0。猪SIgA中J链的分子量为 1 6 0 0 0～ 1 70 0 0。本实验证明鸡SIgA轻链的分子量与猪的SIgA的轻链相似 ,而鸡SIgA重链的分子量则高于猪的SIgA的重链 相似文献
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Cray C Villar D 《Veterinary clinical pathology / American Society for Veterinary Clinical Pathology》2008,37(3):328-331
Background: A major challenge in the serologic diagnosis of infectious diseases in exotic birds is the limited availability of species-specific antibodies. Objectives: The purpose of the current study was to determine if there is cross reactivity between commercially available anti-chicken IgY antibodies and immunoglobulins of several avian species, with particular emphasis on psittacines. Methods: To quantitate the reactivity with anti-chicken IgY, Western blot analysis was performed using plasma samples from many different avian species. Results were compared with gamma globulin fraction quantitation obtained by protein electrophoresis. Results: By Western blot, 2 protein bands corresponding to the heavy and light chains of chicken IgY were identified in species from 21 avian orders using 1 of 2 rabbit anti-chicken IgY antibodies. Densitometric analysis showed that the amount of immunoglobulin estimated from Western blots correlated strongly with data from protein electrophoresis assays. Conclusions: The results demonstrate that some commercially available anti-chicken IgY antibodies exhibit good cross-reactivity with most avian species. 相似文献
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经硫酸铰盐析、柱色谱分离得到纯化的鸡胆汁免疫球蛋白A(IgA)。然后用木瓜蛋白酶水解IgA,再经DEAE_(52)—纤维素柱色谱纯化得到IgAFc重链。用IgAFc重链免疫家兔制得兔抗鸡IgAFc重链抗血清。 相似文献
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经硫酸铵盐析、柱色谱分离得到纯化的鸡血清IgG。继用2-巯基乙醇还原、碘乙酰胶烷化拆开IgG的轻、重链,再经Sephadex G100凝胶过滤柱色谱分离得到IgG轻链。以IgG轻链免疫家兔制得兔抗鸡IgG轻链抗血清。 相似文献
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Fibronectin (Fn) is a high molecular weight glycoprotein and acute phase reactant that contributes to a variety of cellular activities including proliferation and wound healing. Production of Fn is influenced by cytokines such as IL-1alpha, IL-6 and TNF -alpha, and in serum Fn levels can function as an indicator of sepsis and reticulo-endothelial function. Here we describe the production of a panel of mAb to chicken Fn and give evidence that a chicken hepatocellular carcinoma cell line, LMH, constitutively expresses Fn. A capture ELISA to measure chicken Fn was developed using an IgG1 mAb (AV62) as the capture Ab, and biotinylated AV63 (IgG2b) as the detecting Ab. This study identified a single commercially available mAb directed against human Fn that also recognised chicken Fn. By contrast, the anti-chicken Fn mAbs did not cross-react with either human or bovine Fn. 相似文献
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试验旨在研究肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）基因在拜城油鸡中的多态性及其与生产性能的关系,探寻可用于拜城油鸡选育的分子遗传标记。选取96只6周龄的拜城油鸡公鸡,随机分为3组,每组32只,分别在12、18和24周龄时对其生产性能指标进行测定,同时采用PCR-RFLP方法检测MSTN基因的多态性,分析MSTN基因多态性与拜城油鸡生产性能的关系。结果显示,在拜城油鸡公鸡中MSTN基因存在多态性,检测到3种基因型:AA、GA、GG,GA为优势基因型,等位基因A为优势等位基因,不符合哈代－温伯格平衡定律（P<0.05）。在12周龄时,AA基因型个体的体重、屠体重、半净膛重、全净膛重、胸肌重和腿肌重均显著高于GA基因型个体（P<0.05）;在18周龄时,GA基因型个体的体重、胸肌重和腿肌重均显著高于GG基因型个体（P<0.05）;在24周龄时,AA基因型个体的体重、屠体重和半净膛重均极显著高于GG基因型个体（P<0.01）,全净膛重和腿肌重显著高于GG基因型个体（P<0.05）,GA基因型个体的体重、屠体重、半净膛重和腿肌重均显著高于GG基因型个体（P<0.05）,其余指标在不同周龄不同基因型个体间差异不显著（P>0.05）。MSTN基因多态性与拜城油鸡部分生产性能指标密切相关,推测该基因可以作为拜城油鸡选育的分子遗传标记之一。 相似文献
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In this study, the single nucleotide polymorphism(SNP) of MSTN gene and its correlation with the production performance was tested, and explored the molecular genetic marker of breeding in Baicheng fatty chicken. 96 Baicheng fatty chicken roosters were selected randomly and divided into 3 groups, there were 32 chicken in each group. The indexes of production performance were measured in 12, 18 and 24 weeks old and the SNP of MSTN gene was detected by PCR-RFLP method, and analyzed the relationship between gene polymorphism and production performance indexes.The results showed that 3 genotypes of AA,GA and GG were found in Baicheng fatty chicken, GA was the dominant genotype, and allele A was the dominant allele, the allele frequency was not in the Hardy-Weinberg equilibrium (P<0.05). At 12 weeks old,AA genotype was significantly higher than GA genotype in body weight, carcass weight,semi-eviscerated weight, eviscerated weight, breast muscle weight and leg muscle weight (P<0.05). At 18 weeks old,GA genotype was significantly higher than GG genotype in body weight, breast muscle weight and leg muscle weight (P<0.05). At 24 weeks old,AA genotype was extremely significantly higher in body weight, carcass weight and semi-eviscerated weight than GG genotype (P<0.01),and AA genotype was significantly higher in eviscerated weight and leg muscle weight than GG genotype (P<0.05). GA genotype was significantly higher in body weight, carcass weight,semi-eviscerated weight and leg muscle weight than GG genotype (P<0.05), there were no significant difference in the other indexes among different genotypes at different ages (P>0.05). MSTN gene polymorphism was closely related to the production performance indexes of Baicheng fatty chicken, it was speculated this gene could be used as one of the molecular genetic markers for the breeding of Baicheng fatty chicken. 相似文献
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利用小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞系与纯化鸡IgG免疫的BALB/C小鼠脾细胞融合,成功地建立了5株能持续分泌抗鸡IgG单克隆抗体(McAbs)的杂交瘤细胞株。选择产生抗体效价高、生长快的C_(44)株,扩大培养后注射于小鼠制备腹水,经硫酸铵盐析粗提后,用HRP标记,制备出McAbs酶结合物。将制备的McAbs酶结合物和多克隆抗体(PcAbs)酶结合物,采用间接ELISA,对35份鸡血清中鸡新城疫病毒(NDV)抗体以及19份鸡血清中鸡嗜血杆菌(HG)抗体进行检测,McAbs和PcAbs两者的相关系数分别为0.928和0.921,证明制备的抗鸡IgG McAbs具有特异性强、效价高的特点. 相似文献
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经硫酸铵盐析、DEAE 32-纤维素和Sephadex G 200柱色谱法分离得到纯化的鸡血清IgG。然后用木瓜蛋白酶水解IgG,再经DEAE 32-纤维素柱色谱纯化制得IgG Fc片段,并以IgG Fc片段免疫豚鼠制备豚鼠抗鸡IgG Fc血清。 相似文献