RT-PCR快速检测3种烟草病毒技术     

谷瑞华王进忠  文思远王升启张爱环  魏艳敏 《华北农学报》2007,22(B08):21-23

为了快速提取植物叶片的总RNA,并对烟草病毒进行检测,对提取及检测方法进行了研究。结果表明：以黄瓜叶片、白肋烟叶片为试材,用TRIzol试剂盒在1 h内提取到纯度高、完整性好的总RNA。设计烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒的特异性引物,RT-PCR检测,从感病叶片中分别扩增出313,326,392 bp的目的片断,而健康叶片中无此扩增带。构建这3种病毒重组质粒,对核苷酸序列与GeneBank中报道的进行比较,同源性分别为99.36%,97.55%,98.21%。用这种方法快速、可靠,为烟草病毒的检测提供科学依据。  相似文献   

基因芯片技术检测黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒和马铃薯Y病毒   总被引：5，自引：0，他引：5  

贾慧  王艳辉  王进忠  王升启  董金皋 《华北农学报》2011,26(1):83-86

黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒和马铃薯Y病毒是世界性分布的重要植物病毒,对农业生产危害较大.农作物感病多为复合侵染,症状表现较为复杂,急需建立快速、准确、能够一次检测多种病毒的检测方法.本研究根据3种病毒的外壳蛋白基因序列,设计引物和探针,制备基因芯片;用Cy3标记下游引物,RT-PCR扩增产物与芯片杂交,荧光扫描仪检测并...  相似文献   

“一种烟草花叶型病毒的快速灵敏检测方法”发明专利获公开     

刘刚 《农药市场信息》2014,(12)

<正>日前,国家知识产权局公开一件由云南省烟草农业科学研究院和云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所共同申请的发明专利:一种烟草花叶型病毒的快速灵敏检测方法。该发明公开了一种烟草花叶型病株中烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒、烟草脉带花叶病毒3种病毒的检测方法。通过  相似文献   

“芜菁花叶病毒的逆转录环介导等温扩增快速检测方法”发明专利获公开     

刘刚 《农药市场信息》2014,(4)

<正>近日,国家知识产权局公开一件由山东农业大学和山东烟草研究院有限公司共同申请的发明专利:芜菁花叶病毒的逆转录环介导等温扩增快速检测方法。该发明根据芜菁花叶病毒核酸序列,设计了一套特异引物(F3、B3、FIP、BIP,如SEQIDNO.1~4所示)样品提取总RNA后,进行LAMP反应,反应产物经电泳或者荧光染料的方法实现芜菁花叶病毒的检测。据称,该发明的方法,对  相似文献   

山东葫芦科蔬菜上病毒病种类检测及黄瓜花叶病毒分离物的亚组鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

孙晓辉  王树森  高利利  乔宁  刘永光  赵静  竺晓平 《华北农学报》2016,(2):211-217

为了检测和鉴定山东地区葫芦科蔬菜上病毒病种类,从山东诸地11个蔬菜种植区采集了867个葫芦科蔬菜疑似感病样品。利用黄瓜花叶病毒、黄瓜绿斑驳花叶病毒、西瓜花叶病毒、烟草花叶病毒、小西葫芦黄花叶病毒、南瓜花叶病毒、甜瓜黄斑病毒、瓜类褪绿黄化病毒、李属坏死环斑病毒及甜瓜坏死斑点病毒等特异性引物对疑似感病样品分别进行RT-PCR检测,各病毒检出率分别为34.8%,10.4%,20.0%,41.7%,27.0%,7.8%,2.6%,1.7%,0,0.9%。表明除PNRSV外,其他9种病毒在山东各地均有发生,且CMV和TMV发病率较高,2种或2种以上病毒复合侵染也很普遍。同时为明确山东地区CMV分离物的株系分化状况,选取11个地区有代表性的CMV阳性样品,测定其外壳蛋白(Coat protein,CP)和RNA3核苷酸序列并进行序列比对和进化分析,结果显示侵染山东地区葫芦科蔬菜的CMV分离物均属于IB亚组,与韩国分离物As(AF013291)相似性最高,未发现其他株系。  相似文献   

作物病虫害分类介绍及其防治图谱——黄瓜病毒病及其防治图谱     

王永崇 《农药市场信息》2014,(15)

<正>黄瓜病毒病又叫黄瓜花叶病,在各蔬菜产区均有发生,是黄瓜生产中极其重要的一种常见性病害,在黄瓜生长过程中可单独或复合侵染引起危害。不同年份以及不同地区之间发生程度有所差异,春季保护地栽培和秋季露地栽培黄瓜发生较重,病株率达30%以上,对黄瓜产量和品质均有明显影响。发病原因:黄瓜病毒病主要由颗粒状的黄瓜花叶病毒(图1)、甜瓜花叶病毒和杆状RNA类的烟草花叶病毒(图2)等三种病毒引起。黄瓜花叶病毒有很宽的寄主范围,可侵染1000多种双子叶和单子叶植物。甜瓜  相似文献   

应用RNA沉默技术获取抗黄瓜花叶病毒(CMV)和烟草花叶病毒(TMV)转基因烟草   总被引：1，自引：0，他引：1  

牛颜冰  王德富  姚敏  闫钊  由文鑫 《作物学报》2011,37(3):484-488

RNA沉默是迄今最为有效的抗病毒策略,利用该策略不但能获得免疫转基因植株,且所得植株不易与其他病毒基因重组或异源包壳、生物安全性较高。将本实验室已构建的携带有烟草花叶病毒(TMV)部分移动蛋白基因(ΔMP)和黄瓜花叶病毒(CMV)部分复制酶基因(ΔRep)反向重复结构的植物表达载体pBIN438-MP-Rep(i/r),用农杆菌浸润法转化普通烟草品种K326,共得196株转化植株,经卡那霉素筛选和PCR检测发现128株为阳性转基因株;PCR-Southern和RT-PCR分析表明外源基因已整合到烟草基因组并在转录水平上得到表达;ELISA结果显示20.3%的转基因植株对CMV和TMV复合侵染表现免疫性。本结果为利用RNA沉默技术进行植物抗多种病毒育种提供重要数据,为防治其他多种病毒复合侵染提供借鉴。  相似文献   

利用RT-PCR对黄瓜病毒病毒原种类进行检测   总被引：1，自引：1，他引：0  

李淑菊  王惠哲  霍振荣  庞金安 《华北农学报》2004,19(3):100-102

根据黄瓜花叶病毒(CMV)的复制酶序列和西瓜花叶病毒2号(WMV-2)、烟草花叶病毒(TMV)、黄瓜绿斑花叶病毒(CGMMV)的外壳蛋白基因序列以及南瓜花叶病毒(SQMV)的运动蛋白序列设计、合成引物,以感病组织和健康组织总RNA为模板,进行cDNA合成和PCR扩增。对2002～2003年采集的98份黄瓜病毒病样本进行了检测,结果表明,天津地区黄瓜主要毒原种类有CMV,WMV-2和TMV,感染率分别为样本数的96．94％,77．55％和38．67％,CMV和WMV-2 2种病毒的复合感染率为76．53％,3种病毒的复合感染率达到14．67％。  相似文献   

黄瓜绿斑驳花叶病毒低风险参照物质的研制     

黄峰  陈青  陈红运  白静  李桂芬  余芳平  陈洪俊 《中国农学通报》2009,(4)

采用RT-PCR方法扩增黄瓜绿斑驳花叶病毒的外壳蛋白基因与3,非编码区,并将其构建到马铃薯X病毒(PVX)载体中.重组质粒经线性化及体外转录后接种烟草,获得含有病毒外壳蛋白基因的感病植株.感病组织可用于分子检测的质控,也可作为毒源来繁殖阳性参照物质.基于PVX载体制备的参照物质可降低检疫性病毒的生物安全风险,尤其对稳定性强、可造成严重经济损失的高风险病毒的检疫更具实用价值.  相似文献   

实时荧光RT-PCR方法检测黄瓜绿斑驳花叶病毒     

邓丛良  黄峰  吕玉峰  张凯  郭育林  赵焕生 《中国农学通报》2009,(4)

根据黄瓜绿斑驳花叶病毒不同分离物外壳蛋白基因(CP)的保守序列,设计合成引物和TaqMan荧光探针,建立了黄瓜绿斑驳花叶病毒的实时荧光RT-PCR(Real time RT-PCR)检测方法.该方法利用TaqMan探针水解产生的荧光信号实时监测目标基因的扩增,实现PCR扩增与检测同步进行.结果表明,实时荧光RT-PCR方法检测灵敏度比普通RT-PCR高约10倍,并且具有快速、简便、准确的优点,适合于CGMMV的快速、高效检测.  相似文献