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为了进一步弄清鸡精子形态上发生冷冻伤害的主要原因,笔者用多种物质调节溶液的渗透压来稀释精液,用光学显微镜和扫描电镜(SEM)观察了在5℃下保存24小时的鸡精子形态。其结果是:在等渗稀释液稀释保存的液态精子中看不到冷冻精子的顶体脱离和头部末端膨大。在葡萄糖和甘油溶液的低渗、等渗、高渗组以及盐水低渗、等渗组观察到畸形精子都是头 相似文献
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德国牧羊犬冷冻精子超微结构的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
运用电子显微镜技术观察了２头德国牧羊犬冷冻精子超微结构的变化，结果表明，冷冻的犬精子畸形率明显上升，表现出不同程度的质膜破损或脱落，精核膨胀，中段膨胀，顶体膨胀、部分脱落或全部脱落，螺旋线粒体膨胀、断裂、剥离和丢失。犬精子的原生质膜、顶体、线粒体在冷冻过程中最易受到损害，２头公犬冷冻精子的顶体完整率分别为３６．９％和２５．８％。 相似文献
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为进一步降低冷冻解冻过程对山羊精子的理化损伤,本试验系统检验了肌醇类冰晶抑制剂(SIB)和海藻糖对山羊精子的冷冻保护效果。采用假阴道法采集6只云南黑山羊精液,离心洗涤去除精浆后和冷冻稀释液混合,经4℃平衡、液氮气相预冻后直接投入液氮保存。解冻后检测精子活力、顶体、质膜以及低渗耐受性。同时采用透射电镜(TEM)观察冷冻对精子超微结构的影响。结果表明:1,4-环己二醇(1,4-CHD)和海藻糖处理组精子活力(41.35%±8.14%和43.59%±6.23%)、顶体完整性(62.73%±7.62%和64.29%±7.81%)和低渗耐受性(40.29%±7.41%和39.79%±6.58%)均显著高于对照组(35.97%±6.21%、55.46%±8.91%和34.17%±5.68%,P0.05),且海藻糖可以有效抑制冷冻解冻过程导致的精子凋亡。流式分析结果表明,1,4-CHD不能降低冷冻对山羊精子质膜完整性和磷脂酰丝氨酸(PS)分布的损伤,但是海藻糖可以显著降低冷冻解冻过程中对山羊精子质膜的损伤。电镜结果表明,冷冻对精子质膜和顶体等结构损伤严重,解冻后部分精子质膜发生肿胀、脱落或断裂等现象。而且,顶体外膜存在脱落现象,顶体内容物发生部分甚至完全泄漏。电镜结果进一步证实海藻糖对冷冻精子质膜的保护效果要优于1,4-环己二醇。总之,肌醇类SIB和海藻糖可以降低山羊精子的冷冻损伤,但相对于海藻糖而言,肌醇类SIB并不能降低冷冻对山羊精子质膜的损伤。 相似文献
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冷冻保存绵羊精子质膜完整性检测的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为了探讨冷冻保存对绵羊精子质膜完整性的影响,研究采用低渗肿胀—伊红拒染(HOS-EY)法检测冷冻保存前后绵羊精子质膜的完整性。实验设计了5个HOS-EY低渗染液浓度梯度组合(110、130、1501、70、190mOsm),按精子尾部肿胀与否和头部着色与否区分为4种类型进行统计。结果表明:绵羊冻融精子头膜尾膜均完整的Ⅳ型精子率(22.36%)和头膜尾膜均损伤的Ⅰ型精子率(47.4%)与鲜精比较分别极显著减少(58.64%)和增多(20.94%)(P<0.01),表明冷冻-解冻过程对精子膜造成严重损伤;头膜损伤-尾膜完整的Ⅱ型精子率(28.82%)在冷冻过程中极显著增多(16.72%)(P<0.01),头膜完整-尾膜损伤的Ⅲ型精子在冷冻组发生率(1.72%)显著减少(2.58%)(P<0.05),表明精子头膜或尾膜的损伤是独立发生的,且头膜损伤易于尾膜,5种HOS-EY低渗染液中150 mOsm组对精子尾部肿胀的检测效果最好。 相似文献
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冷冻保存前平衡温度对猪精子结构的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
研究冷冻保存前平衡温度对精子结构的影响,为提高猪精子冷冻效果提供参考。新鲜猪精液(Ⅰ组)稀释后于17℃过夜保存(Ⅱ组),然后于冷冻Ⅰ液中4℃平衡1.5h(Ⅲ组),再加入预冷的冷冻Ⅱ液于4℃平衡45min(Ⅳ组)。通过精子形态正常率及活力检测,吖啶橙(AO)染色检测精子DNA完整性,碘化丙啶(PI)染色检测精子头部质膜完整性,低渗肿胀试验(HOS)检测精子尾部质膜完整性,异硫氰荧光素标记的花生凝集素(FITC-PNA)染色检测精子顶体完整性,并用扫描电镜(SEM)观察精子结构,评价冷冻保存前平衡温度对猪精子结构的影响。结果表明,与新鲜精液相比,Ⅱ组精液的精子DNA完整性、质膜完整性、顶体完整性等精子结构检测指标所受影响无统计学意义(P0.05);Ⅲ组和Ⅳ组的精子结构检测指标明显受到影响(P0.05),但Ⅲ组和Ⅳ组间无显著差异(P0.05)。扫描电镜检测结果表明,17℃过夜保存精子未见异常,头、颈、尾结构完整,顶体完整、光滑;Ⅲ组精子头部质膜及头颈结合部有轻微损伤;Ⅳ组精子尾部和头颈结合部有不同程度的断裂。冷冻前从17℃降低至4℃及4℃平衡对猪精子结构有一定程度的损伤。 相似文献
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早在1897年就有记载,人的精子在-17℃冷冻后仍能存活,但并未引起人们的注意和生产上的重视。继英国帕克氏(Parkes)1945年在-79℃至-196℃冷冻保存人的精液获得成功之后,史密斯(Smith)及波尔奇(Polge)等人在1949年于稀释精液中添加甘油克服了冷冻过程对精子的损害,这是长期冷冻保存家畜精液的重要技术突破。此后,尽管尚未发现有比甘油更好的防止精子冷冻时被破坏的物质,但实践证明,甘油在冷冻保存液中对精子多少是有害的,特别是对于猪、羊和禽的精子。家禽精液中加入10%的甘油会使精子丧失受精能力。B.K.米洛万诺夫等人为此提出,今后的冷冻方向,应在冷冻精液时除去甘油成分,这样可以防止和降低在冷冻过程中精子顶体和颈部的损伤及尾部弯曲的现象。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2015,(21)
为了检测冷冻对绵羊精子顶体透明质酸酶活性的影响,试验采用改良后的明胶膜片法对冷冻保存前后小尾寒羊精子顶体透明质酸酶活性变化进行研究。结果表明:冷冻保存后精子顶体透明质酸酶阳性反应率[(43.00±2.45)%]和平均成环直径[(32.86±0.32)μm]与冷冻前精子顶体透明质酸酶阳性反应率[(67.00±4.79)%]和平均成环直径[(55.05±0.47)μm]相比极显著降低和减少(P0.01),且冷冻前后精子活率与透明质酸酶活性均呈极显著正相关(P0.01),表明冷冻保存对绵羊精子顶体透明质酸酶活性造成显著损伤。说明透明质酸酶的活性可以在一定程度上预测精子活率和受精能力,可作为绵羊精液品质评价的新指标。 相似文献
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为了研究褪黑素对绒山羊精液冷冻保存效果的影响,在冷冻稀释液中外源补充不同浓度(0.125,0.250,0.500,1.000 mg/mL)的褪黑素进行冷冻试验,冷冻解冻采用计算机辅助精液分析系统(CASAS)和流式细胞仪分别检测精子活率、质膜完整率、顶体完整率以及精子细胞中活性氧(ROS)的含量。结果表明:在冷冻稀释液中添加褪黑素能够显著降低精子细胞中ROS的含量,而且在冷冻稀释液中添加浓度为0.500 mg/mL的试验组绒山羊精子活率(53.3%)、质膜完整率(44.6%)、顶体完整率(77.9%)均显著高于空白对照组(47.8%、36.3%和53.2%)(P0.05)。说明在绒山羊精液冷冻稀释液中添加0.500 mg/mL褪黑素能够显著提高绒山羊精子抗氧化能力和冷冻保存效果。 相似文献
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奶牛精子顶体与季节关系的初步研究本试验对精子顶体与季节关系进行研究，为今后的冷冻精液生产提供一些参考资料。１材料和方法冷冻精子顶体来自本站１０头荷斯坦种公牛。精子顶体依《牛冷冻精液质量检测规范》进行抹片观察。根据所测冷冻精子顶体数据的平均完整率与季节... 相似文献
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采精后2小时,将每份含6×10~9个精子的精液离心分离10分钟(300_g)。去除精清,并用BF5稀释液把精子重新稀释成5毫升的混匀精液。精液在2小时内逐步冷却到5℃,再加入5毫升含2%甘油的BF5液。将精液混匀后,立即在干冰上冷冻成0.15到0.2毫升的颗粒,然后移入液氮保存。输精时,每次从液氮中取出10毫升的颗粒,倒入泡沫塑料制的槽形容器内,静置三分钟,随即把颗粒倾入250毫升的烧杯中,杯内装有25毫升50℃的BTS液,摇动烧杯直至颗粒融化为止。解冻的精液倒入输精瓶,再用15毫升的BTS液冲洗烧杯,洗下的液体加到输精瓶中。用一头公猪的单精或用二头公猪的混精的冷冻精液给26头小母猪输精。每头小母猪输精两次,每个剂量含6×10~9个精子。26头小母猪中有22头(85%)产生受精卵,22头的卵有87%受精并正常地发育。混精输精的受胎效果并不比单精输精优异。本研究中使用的冷冻和解冻法操作简易,贮存容量小,精液活力高;妊娠率和受精率接近新鲜精液的正常指标。 相似文献
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猪精液5mL大管冷冻方法的初步研究 总被引：1，自引：0，他引：1
以5 mL大管解冻后的精子活力、质膜完整率、顶体完整率以及人工授精结果为判定指标,筛选冷冻液Ⅰ和冷冻液Ⅱ中N-乙酰-D-氨基葡萄糖(N-Acetyl-D-Glucosamine,N-AcGA)、甘油和卵黄的适宜浓度,寻找适宜的平衡时间和冷冻高度.结果显示:(1)在冷冻液Ⅰ中添加0.1%的N-AcGA,解冻后精子的活力和顶体完整率最高,分别为50.00%和56.60%;(2)冷冻液Ⅱ中以4%的甘油浓度最好,解冻后精子的活力、弯尾率和顶体完整率可分别达52.50%、52.08%和77.67%;(3)冷冻液中的卵黄终浓度以10%效果最佳;(4)在4℃中平衡2 h,冻后顶体完整率比对照组(0 h)有显著提高(P<0.05);(5)在冷冻高度方面,距液氮面1 cm处冷冻对精子活力和顶体完整性都有明显的保护作用;(6)在人工授精方面,5 mL大管冷冻精液平均获得了超过80%的受胎率. 相似文献
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《中国养兔杂志》2018,(5)
本试验的目的是分析在新西兰兔精液冷冻保存稀释液中分别添加不同浓度的海藻糖、透明质酸、维生素E(Ve)、超氧化物歧化酶(SOD)对兔精液冷冻保存效果的影响,以冻后精子活率、质膜完整性、顶体完整率等作为质量评定指标,筛选出效果较好的新西兰兔精液的冷冻保护剂种类及浓度。结果表明,精液冷冻保存稀释液中添加3种浓度的海藻糖均未提高兔精液冷冻后的精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P0.05);添加0.5%和1%的透明质酸提高了兔精液冷冻后的精子活率(P0.05),但各组间质膜完整率和顶体完整率无显著差异;添加2 g/L Ve提高了兔精子4℃平衡后的活率、冷冻后精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P0.05);添加4 000 IU的SOD提高了兔精子4℃平衡后的活率、冷冻后精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P0.05)。结果证实,在新西兰兔精液冷冻保存稀释液中添加适宜浓度的Ve和SOD可提高兔精液冷冻后的精子活率、质膜完整率和顶体完整率。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2019,(23)
为了探究蓝狐精液冷冻前后精子的运动状态及超微结构变化,试验取8只优质雄性蓝狐的精液,使用精子动力分析系统(IVOS)检测精液冷冻前后精子运动状态,并利用透射电镜观察冷冻前后精子的超微结构变化。结果表明:精子冷冻复苏后,快速直线运动的精子只有25.7%,与鲜精对比差异性极显著(P0.01),中速运动的精子占39.8%,慢速运动的精子占4.2%,不运动的精子占30.9%,精子存活率下降25.9%。不同批次冷冻精液的精子存活率及快速直线运动的精子差异性显著(P0.05)。精液冷冻后精子头部质膜结构损伤严重,顶体完整率仅占25.0%,精子赤道段、颈部、尾部、线粒体、微管结构变化不明显。 相似文献
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研究由两个实验组成:实验一探讨添加不同浓度的甘油(1%、3%、5%、7%,V/V)对冷冻精子活率的影响,实验二探讨在37℃或5℃下添加不同浓度的二甲基亚砜(DMSO)(1%、1.25%、1.5%、1.75%,V/V)对冷冻精子活率的影响.通过实验组获得蒙古羊的最优的甘油浓度稀释液条件下,测定精子解冻后的活力、直线运动率、成活率及顶体完整率.同样用DMSO代替甘油测定精子活率、直线动动率、成活率和顶体完整率,实验结果显示前一项指标得到显著的改善(P＜0.05),且在37℃添加7%甘油效果最好.但是顶体完整率随着甘油或DMSO浓度的增加而出现下降趋势,也就是顶体完整率在5℃下添加1%的甘油或1.75%的DMSO效果较好(P＜0.05).实验中在37℃中增加DMSO顶体完整率显著下降(P＜0.05),此外,在5℃时添加1%DMSO时精子顶体完整率优于其他实验组.实验中在37℃条件下加入1.75%的DMSO比在5℃下精子活力好,在37℃添加7%的甘油比在5℃下添加7%的甘油效果显著(P＜0.05).研究结果表明,对于蒙古羊甘油仍是较好的精子冷冻保护剂. 相似文献
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作者对绵羊冷冻精液的精子顶体完整率,精清中的透明质酸酶、谷草转氮酶、乳酸脱氢酶的活力与受胎率的关系进行了研究。利用电子显微镜负染色技术检查冷冻绵羊精子的顶体完整率,同时测定精清中的 Hyase、GOT 和 LDH的活力。根据统计分析,顶体完整率和受胎率之间呈显著相关(P<0.05)。Hyase 和 GOT 与受胎率呈显著负相关(P<0.05),但是 LDH 的活力与受胎率无显著相关(P>0.05)。因此,能够利用这些方法作为评定绵羊冷冻精液品质的指标之一,并在一定程度上反映了精液的受胎能力。 相似文献
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《上海畜牧兽医通讯》2019,(6)
本试验利用前期筛选的湖羊精液冷冻稀释液及冷冻保护剂制作湖羊冻精,对比冻精和鲜精的精子活力和顶体完整率。同时,对40头初产母羊和40头经产母羊进行同期发情处理,然后分组进行鲜精和冻精输精试验,跟踪受胎率。结果表明,冻精的活力和顶体完整率分别为0.396和49.2%,显著低于鲜精;初产母羊和经产母羊的冻精受胎率分别为41.7%和33.3%,也显著低于鲜精。说明湖羊精液冷冻对湖羊精子质量和母羊受胎率都存在显著影响。 相似文献