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《畜牧与兽医》2019,(12):19-24
应用体外受精(in vitro fertilization, IVF)等生物技术可以缩短种猪培育时间,地方猪精液的冷冻保存可以解决保存和运输问题。通过对不同个体冷冻前后的精子质量、获能方式、卵子质量及多精受精率对IVF的影响进行了研究。结果显示:当精子活率从83.26%降至74.20%时,IVF的卵裂率、桑椹胚率显著下降(P0.05)。不同的获能方式对IVF胚胎的卵裂率无显著影响(P0.05)。3层(及以上)卵丘细胞的卵子IVF的卵裂率、桑椹率显著高于3层以下组(P0.05)。冷冻精子的IVF中,2-细胞、4-细胞和囊胚的发育能力显著低于新鲜精子(P0.05),受精后6～12 h的多精受精率也显著高于新鲜精子组(P0.05)。猪体外受精胚胎的发育能力受精子和卵母细胞的影响。无论使用新鲜精液还是冷冻精液的IVF胚胎,在桑椹胚期后的发育能力都会受到阻碍,多精受精可能是原因之一,但具体原因还需要更多的研究。 相似文献
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为提高性控犏牛胚胎体外发育率,从性控精液的精子密度、受精时间、卵丘细胞的脱除程度、胚胎培养体系和胚胎培养环境各个环节进行优化。结果表明:(1)受精24h的卵裂率和囊胚率显著高于受精6h、18h(P0.05);(2)性控精液的精子密度0.4×10~6~0.6×10~6个/mL时的卵裂率显著低于4×10~6~6×10~6个/mL组(P0.05),但囊胚率差异不显著(P0.05),均显著高于性控精液0.04×10~6~0.06×10~6个/mL的卵裂率和囊胚率(P0.05);(3)卵丘细胞不脱除组的囊胚率(23.42%)显著高于半脱除组(13.77%)和完全脱除组的囊胚率(15.61%)(P0.05);(4)输卵管上皮细胞共培养的囊胚率(24.63%)和卵丘细胞共培养的囊胚率(23.42%)差异不显著(P0.05),但均显著高于FBS CR1aa培养液的囊胚率(P0.05);(5)性控犏牛早期胚胎在低氧培养环境下囊胚率(23.42%)显著高于高氧培养环境(11.83%)(P0.05),而孵化囊胚率差异不显著(P0.05)。结果说明,生产性控犏牛胚胎最佳的条件是性控精液的浓度0.4×10~6~0.6×10~6个/mL,受精时间为24h,采取卵丘细胞不脱除的方法,胚胎培养方式采用输卵管上皮细胞共培养的方式,胚胎培养环境采用低氧环境。 相似文献
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实验进行了精子处理方法、洗精液中添加抗生素种类及浓度、常规培养小滴(50μL)中入胚数的筛选,按照不同荷斯坦公牛个体分选的性控精液对体外生产的牛早期胚胎发育潜力的影响。结果表明:离心法处理性控精液效果最优。利用经过分选的性控精液进行体外受精(IVF)后都较易导致污染,且受精后的体外胚胎发育效果都较差。在洗精液中添加10μL/mL头孢哌酮钠的IVF胚胎体外发育较好,囊胚率达到16.9%;且在常规培养小滴中适当减少入胚数,能有效抑制利用性控精液制备的奶牛IVF胚胎自身对培养微滴的污染。利用直接离心法处理精液,在洗精液中添加头孢哌酮钠10μL/mL,可以成功进行牛性控精子的体外受精,但目前的受精效果低于用普通精子的体外受精效果。 相似文献
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为建立稳定高效的活体采卵-体外受精技术体系,提高体外胚胎生产效率,本研究先利用屠宰场采集的新鲜卵巢卵母细胞进行体外受精,通过胚胎发育潜力来筛选最佳的体外胚胎培养液;再进一步研究不同种公牛精液和供卵母牛对活体采卵-体外受精效率的影响。结果显示,CR1aa培养液和mCR1aa培养液卵裂率差异不显著（P>0.05）,但mCR1aa组的囊胚发育率显著提高（28.1% vs 20.6%,P<0.05）;选取的3头荷斯坦种公牛精液的活体采卵-体外受精胚胎的卵裂率差异不显著（P>0.05）,但1号种公牛精液体外受精后囊胚率（38.7%）显著高于2号和3号（23.8%&22.9%）（P<0.05）;随机选择的3头活体采卵供体母牛（H1、H2、H3）获得的头均可用卵母细胞数无显著差异,但H1和H2供体母牛体外受精胚胎的卵裂率和囊胚率均显著高于H3供体牛（P<0.05）,且H1供体牛体外受精囊胚率显著高于H2供体牛（P<0.05）。结果表明,mCR1aa培养液能显著提高体外受精囊胚发育率,适用于体外胚胎生产;种公牛精液和供体母牛个体差异会直接影响活体采卵-体外受精胚胎的生产效率,为奶牛活体采卵-体外受精生产技术体系的优化提供参考。 相似文献
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《中国畜牧杂志》2016,(7)
为奶牛性控精子体外受精提供具有活力的精子,筛选出高效的精子分离方法来提高体外受精效率。将市售的冷冻奶牛性控精液解冻、精子浓度调节为1×107cells/m L后,利用微流路精子分离器(microfluidic sperm sorter,MFSS)分离精子,检测分离后的精液质量并分析精子的线粒体膜电位变化。精液样本通过MFSS分离后,精子活力由35.28%提高到57.24%(P0.05);直线速度由23.91μm/s提高到32.76μm/s(P0.05)。此外,MFSS的C室中精子线粒体相对活性为1.56,显著高于分离前A室(0.28)的(P0.05)。综上结果 ,微流路精子分离器可以分离出既有较高活力又具有高活性的线粒体的奶牛性控精子,精子质量得到较大的改善。 相似文献
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《中国兽医学报》2017,(4):728-734
猪卵母细胞体外受精(in vitro fertilization,IVF)技术为受精和胚胎早期发育机理等基础理论的研究及生产实践提供了重要的研究手段。虽然猪IVF的研究已经取得了一些进展,但其囊胚发育率仍然较低,亟需建立更为稳定、高效的体外受精方法。本试验通过比较精子浓度,精子获能处理,不同精卵共孵育培养体系以及在卵母细胞成熟过程中添加不同激素等影响猪卵母细胞体外受精胚胎发育能力的因素,以求找到最佳的猪卵母细胞体外受精体系。结果显示:在精子浓度为1×10~5~1×10~7/mL,5×10~6/mL的精子浓度显著提高体外受精效率(P<0.05);以茶碱、咖啡及咖啡因联合使用肝素作为获能物质处理精子,发现2.5 mmol/L茶碱处理组体外受精效率显著提高(P<0.05);通过比较不同的受精体系,发现使用40个卵/500μL体系显著提高体外受精效率(P<0.05);在卵母细胞成熟液中添加不同激素组合,发现添加10IU/mL PMSG,10IU/mL HCG和2.5IU/mL FSH激素组合,体外受精效率显著提高(P<0.05)。本试验结果表明,在M199中添加10IU/mL PMSG,10IU/mL HCG和2.5IU/mL FSH体外成熟培养卵母细胞,以5×10~6/mL精子浓度,2.5mmol/L茶碱作为获能物质处理精子,40个卵/500μL共孵育的IVF体系效果最佳,其卵裂率为(61.33±0.77)%,囊胚率为(28.33±1.08)%。本试验将为深入研究猪IVF提供理论参考。 相似文献
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获能液及精子密度对牛性控精子体外受精成功率的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
本实验探讨了不同的精子获能添加物、精子密度、精子获能液对牛性别分离精子体外受精（IVF）的影响。结果表明：受精液中同时添加10μg/mL的肝素与5mmol／L的咖啡因,能促进牛性控精子体外获能与受精。精子密度在1．0×10^6个/mL时其囊胚发育率最高。用BO液和mTyrode’s液对牛性控精子进行获能和受精处理．其受精效果差异不显著（P〉0．05）,但BO液作用时间短对早期胚胎的发育影响较小,比较适合牛性控精子IVF。 相似文献
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《畜牧与兽医》2015,(12):17-24
精液质量参数相似公猪获得相同体外受精(in vitro fertilization,IVF)效果时所需精卵比不同的原因。常规方法鉴定公猪精液质量参数,以不同精卵比进行体外受精并确定不同公猪精液体外受精时的最佳精卵比,分别检测了各公猪精子结合透明带能力、获能及顶体反应状况。3头试验用公猪(A、B和C)精液在精子密度、活率、活力和畸形精子率上无显著差异(P0.05),17℃保存3 d内精子的活率在三者间无差异(P0.05)。3头公猪精液在IVF中达到最佳受精效率时所需的精卵比分别为500∶1、1 000∶1和200∶1。精子结合透明带能力和获能进程检测显示三者无显著差异(P0.05),但顶体反应进程检测显示三者间具有显著差异(P0.05)。顶体反应进程差异是导致相似精液质量精液之间在IVF中最佳精卵比不同的主要原因。 相似文献
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采用肝素诱导获能 ,比较了 TAL P液和 BO液处理水牛附睾尾精子进行体外受精和细管冷冻精液体外受精的效果。结果表明 ,用 BO液和 TAL P液分别处理水牛附睾尾精子 ,受精后的卵裂率分别为 4 6 .6 7%和 5 3.73% ,发育率分别为 2 1.6 7%和 2 6 .87% ,其受精效果差异不显著。综合 2种方法 ,水牛附睾尾精子的受精率为 5 7.14 % ,受精后的卵裂率为 5 0 .39% ;发育率相对于培养卵为 2 4 .4 1% ,相对于卵裂卵为 4 8.4 4 % ;与细管冷冻精液 (5 6 .0 0 % ,5 4 .31% ,2 6 .72 % ,4 9.2 1% )相比 ,差异不显著。形态学观察还表明 ,用保温干储的方法可获得活率好、存活时间长的附睾尾精子。试验结果说明水牛附睾尾精子用于体外受精可以得到与细管冷冻精液相当的效果。 相似文献
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性控体外受精(IVF)胚胎的研究进展与产业化 总被引：1，自引：0，他引：1
利用北美高产奶牛屠宰后的丰富卵巢资源采集的卵母细胞，体外培养成熟后，应用流式细胞分离仪分离的X精子进行体外受精，可有效地生产性控IVF胚胎，应用PCR方法对性控IVF胚胎抽样检测结果，雌性胚胎率为95％～96％。微滴玻璃化冷冻性控IVF胚胎，解冻后可用率为95％左右，60d检查的移植妊娠率为42．5％(59／139)；0．25ml细管常规冷冻性控IVF胚胎，解冻后可用率为85％左右，60d检查的移植妊娠率为37．6％(478／1272)，初步试验结果表明：7d性控IVF扩张囊胚移植给发情后5～5．5d的受体母牛，移植妊娠率可达到70％～75％。性控IVF胚胎生产严格按照国家动检部门签订的生产IVF胚胎的检疫和卫生条件议定书生产，控制疫病的传播。目前已初步形成性控IVF胚胎移植产业化。 相似文献
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猪冷冻精液体外受精研究 总被引：1，自引：1，他引：1
为简化猪体外受精过程中精液的来源,避免不同公猪精液和不同采精时间对猪体外受精的影响,本研究采用5mL大管冷冻精液进行体外受精（IVF）,研究IVF过程中的各项参数。结果表明：精卵共孵2～8h对多精人卵率影响不大（P〉0．05）,2-细胞率随着共孵时间的延长而增加,8h时达到72．8％,显著高于2h组（60．5％,P〈0．05）,桑椹胚和囊胚发育率以6h组最高,分别达46．1％和3．48％。多精人卵率随精子浓度的增加而增加,且各组之间差异显著（P〈0．05）,2-细胞率也以10^8组（81．2％）最高,且显著高于10^5组（63．7％）（P〈0．05）,同时10^7组和10^8组分别获得了8．11％和3．13％的囊胚发育率。以NCSU-23作为成熟培养液,并部分去除卵丘细胞的IVF卵裂率和囊胚率最高,达77．1％和7．33％。冻精和新鲜精液的IVF,无论是在卵裂率,还是桑椹胚或囊胚率上均无显著差异（P〉0．05）。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2016,(8)
旨在通过对精子动力学参数的分析,预测其在体外受精和人工授精中的受精能力。本研究采用计算机辅助精子分析系统(CASA)对3头荷斯坦公牛的性控分离精子进行动力学检测;同时进行体外受精和人工授精试验,统计体外受精的受精率、卵裂率、囊胚率、囊胚细胞数(TCN)、内细胞团细胞数/囊胚细胞数比例(ICM/TCN)和人工授精妊娠率。结果发现,精子的路径速度(102.82、91.55、80.67)、曲线速度(201.75、180.23、168.58)、侧摆幅度(9.33、8.31、7.42)在公牛A、B、C间呈显著差异(P0.05),并与其体外受精过程中的受精率、胚胎卵裂率呈显著正相关。公牛A精子的鞭打频率(20.36)、直线性(46.06)显著高于公牛B(18.05、42.00)、C(16.23、40.81),且与体外受精的囊胚率呈显著正相关(P0.05)。公牛A、B精子的活力(38.00、36.50)、直线速度(80.62、79.00)显著高于公牛C(29.00、68.20),该参数与ICM/TCN呈正相关(P0.05)。然而精子动力学的所有参数均与人工授精的妊娠率之间无相关性。综上表明,精子的动力学参数可以预测体外受精中公牛的受精能力,但对其人工授精结果的预测还需要进一步研究。 相似文献
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本研究的目的是探讨水牛分离精子与不同来源(活体采卵或屠宰场卵巢采卵)卵母细胞体外受精的效果。活体采卵是选用20头空怀河流型母水牛(其中摩拉母牛12头,尼里-拉菲母水牛8头)每间隔3 d采卵1次,连续采卵5~6周,活体采集卵母细胞;屠宰场卵巢采卵是收集屠宰场水牛卵巢,用10 mL注射器连接18 G针头吸取水牛卵巢上可视的卵泡来收集卵母细胞。将收集的AB级水牛卵母细胞在相同的条件下进行体外成熟、然后用分离或未分离精子进行体外受精以及体外培养至囊胚。结果发现:活体采卵组和屠宰场收集的水牛卵母细胞组用分离精子受精分裂率和囊胚率没有差异(P>0.05);分离精子和未分离精子的体外受精分裂率和囊胚率也没有差异(P>0.05)。由此说明,水牛分离精子可以用于体外生产性控胚胎。 相似文献
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不同因素对牛体外受精效果的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
比较公牛个体、精子密度、精卵比例、受精前机械脱除卵丘细胞及胚胎培养液体积对体外受精效果的影响。结果表明:不同公牛个体的精子受精的卵裂率差异不显著(P>0.05),但囊胚率受到极显著的影响(52.24%vs28.13%,P<0.01);精子密度在(0.5~1.5)×106/mL间的卵裂率和囊胚率差异都不显著(P>0.05),但精子密度在0.25×106个/mL时的卵裂率显著低于其他3个试验组(52.17%vs91.23%,P<0.05);受精时,精卵比控制在2 000~10 000∶1之间,受精卵的卵裂率、囊胚率均无差异(P>0.05);受精前机械脱除卵丘细胞对受精效果没有影响(45.21%vs36.46%,P>0.05);每枚胚胎培养液体积在2.5~10μL之间的群体培养,对受精胚的发育没有显著影响(51.39%vs35.06%,P>0.05)。 相似文献
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本试验对牛体外受精不同时间、不同的培养液成分和培养方法等对奶牛体外受精后的卵裂率、囊胚发育率的影响进行了研究。试验包括:(1)牛体外受精不同时间(8h、20h)对奶牛体外受精后的卵裂率、囊胚发育率的影响;(2)不同的培养液成分对奶牛体外受精早期胚胎发育的影响。研究结果表明:(1)牛体外受精时间20h对奶牛体外受精后的卵裂率(78%)好于体外受精8h组(76%),但囊胚发育率前者不如后者好(20.51%VS23.68%),两者间差异不显著(P0.05)。(2)作为早期胚胎的培养液IVD101、TCM199培养系的卵裂率分别为76%、74%,而囊胚率却分别为22.37%、22.97%,TCM199培养系好于IVD-101,但两者间差异不显著(P0.05)。 相似文献
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为了提高牛体外受精性控胚胎发育率,试验从体外受精（IVF）培养8 ｈ后的胚胎,采用不同的脱除卵丘细胞方式（机械脱除法、酶脱除法、振荡法）脱除卵丘细胞,研究影响牛性控精液体外受精效率的关键技术。结果表明,在体外受精8 h后,采用不同的脱除卵丘细胞方式（机械脱除法、酶脱除法、振荡法）脱除卵丘细胞,受精卵经体外培养48 h后统计胚胎卵裂率分别为（58.8±2.8）%、（58.5±5.7）%、（69.9±3.4）%,体外培养192 h统计囊胚率分别为（26.7±2.7）%、（26.9±3.9）%、（35.8±4.1）%,由此可见,振荡法显著优于机械脱除法和酶脱除法（P〈0.05）。性控精液体外受精时,体外受精8 h后采用振荡法脱除卵丘细胞对于提高性控精液体外受精胚胎发育率具有重要意义。 相似文献