小鼠胎胚卵巢体外无血清培养体系的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

李美玲  夏国良 《农业生物技术学报》2000,8(4):13-13

调节原始卵泡形成、起始生长的信号目前仍知之甚少。一个重要的原因就是缺乏一个良好的研究模型。我们以妊娠１３ｄ昆明白小鼠胚胎卵巢为研究对象，在５ｄ的贴壁培养后分别用ＦＢＳ培养液继续培养共计２１ｄ，探讨在不同培养条件下胚胎卵巢泡发育和内分泌功能的差异。结果发现在以ＩＴＳ、ＢＳＡ和胎球蛋白为血清替代物的无血清培养体系中小鼠胚胎卵巢卵泡发育要优于其在含２％ＦＢＳ的培养体系中的发育状况。两种培养条件下胚胎卵巢  相似文献   

表皮生长因子对卵泡刺激素促进的小鼠胚胎卵巢卵泡发育和雌二醇分泌的影响   总被引：2，自引：0，他引：2  

王海滨  夏国良  李美玲  郭勇  谢辉蓉 《农业生物技术学报》2001,9(1):37-40

FSH、EGF是参与卵巢功能调节的重要因素，关于EGF对FSH促进的胚胎卵巢卵泡发育和类固醇激素发生的影响报道甚少。本实验经单个卵巢的总卵泡数、生长卵泡数和5个最大卵母细胞的平均直径为卵泡发育优劣的衡量指标，利用我们早期研究建立的无血清培养体系研究EGF对FSH促进的小鼠胚胎卵巢卵泡发育和分泌雌二醇的作用。结果发现：①EGF＋FSH＋雄烯二酮（A）处理组的胚胎卵巢总卵泡数在培养第7－9d显著高于FSH＋A处理组，而且生长卵泡数和卵巢内5个最大卵母细胞平均直径在培养后期也显著高于FSH＋A处理组（P＜0.05);②FSH＋A处理组的胚胎卵巢在培养第7－9d分泌大量雌二醇，而GF和FSH联合使用时胚胎卵巢的培养早期雌二醇分泌水平显著低于FSH＋A处理组（P＜0.05）。结果提示EGF协同FSH促进小鼠胚胎卵巢卵泡体外生长发育；同时EGF抑制SH诱导的雌二醇分泌，其促卵泡发育作用可能与雌二醇的合成不相关联。  相似文献   

山羊卵母细胞无血清体外成熟培养     

王国华  刘凤军  权富生  赵明涛  张玉玲  林慧  张涌 《农业生物技术学报》2007,15(3):424-428

为研究无血清培养系统对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌激活胚胎早期发育力的影响,分别以0.3%牛血清蛋白(BSA)(mV)、1%聚乙烯醇(PVA)(mV)和1%胰岛素转铁蛋白亚硒酸钠(ITS)(VV)代替成熟培养液中胎牛血清(FBS),以添加5?S的OM为对照组,对来源于屠宰场的卵巢卵母细胞复合体(COCs)进行体外培养。成熟率PVA添加组(50.00%)显著低于FBS组(83.23%)(P<0.01)、BSA组(71.19%)和ITS组(76.79%),与FBS组无显著差异(P>0.05);成熟卵母细胞用离子霉素联合6-DMAP激活,在SOFaa中进行孤雌胚培养,BSA、PVA、ITS及FBS各组的卵裂率依次为61.90%、46.97%、79.07%和83.58%,囊胚率分别为25.00%、19.70%、55.81%和60.45%。结果表明:在OM基础培养液中添加BSA或PVA,卵母细胞的成熟率明显低于添加FBS,且卵裂率和囊胚发育率也低于对照组(P<0.05或P<0.01);添加ITS,卵母细胞成熟率虽低于对照组,但孤雌胚卵裂率和囊胚发育率与对照组接近(P>0.05)。表明以ITS代替FBS,可用于山羊卵母细胞体外成熟培养。  相似文献   

山羊卵母细胞无血清体外成熟培养研究     

王国华刘凤军  权富生赵明涛 张玉玲 《农业生物技术学报》2007,15(3)

摘要：为了研究无血清培养系统对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌激活胚胎早期发育力的影响，分别以0.3% BSA(m/v)、1% PVA(m/v)、1% ITS(v/v)代替成熟培养液中FBS，以添加5% FBS的OM为对照组，对来源于屠宰场的COCs进行体外培养。成熟率PVA添加组（50.00%），显著低于FBS组（83.23%）（P﹤0.01），BSA组（71.19%）和ITS组（76.79%）与FBS组无显著差异（P＞0.05）；成熟卵母细胞用离子霉素联合6-DMAP激活，在SOFaa中进行孤雌胚培养，BSA、PVA、ITS及 FBS各组的卵裂率依次为61.90%、46.97%、79.07%和83.58%，囊胚率分别为25.00%、19.70%、55.81%和60.45%。实验结果指出:在OM基础培养液中添加BSA或PVA卵母细胞的成熟率明显低于添加FBS，且卵裂率和囊胚发育率也低于对照组(P<0.05或 P<0.01)；添加ITS，卵母细胞成熟率虽低于对照组，但孤雌胚卵裂率和囊胚发育率与对照组接近（P>0.05）。结论：以ITS代替FBS，可以用于山羊卵母细胞体外成熟培养。  相似文献   

哺乳动物卵母细胞体外培养体系的研究进展   总被引：9，自引：0，他引：9  

王海滨  夏国良  李美玲  吕忠显  张建超  邵育静 《农业生物技术学报》2000,8(3):297-301

哺乳动物卵母细胞体外生长、发育研究已经取得巨大进步,建立了许多培养体系。本文结合我们近些年对小鼠胚胎卵巢卵泡发育研究结果简要综述当前卵母细胞体外培养体系的研究进展。  相似文献   

不同添加物对分离昆明系小鼠胚胎干细胞的影响     

余树民  严兴荣  陈冬梅  王晗  窦忠英 《农业生物技术学报》2008,16(1):71-76

以昆明系小鼠(Mus musculus Km)胚胎为材料,以丝裂霉素(10 μg/mL)处理的MEF为饲养层,研究了在胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)培养液中分别添加血清替代物(knockout serum replacement,KSR)、胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)和FBS PD98059(50 μgol/L)对昆明系小鼠胚胎贴壁、内细胞团(inner cell mass,ICM)集落形成及ESCs分离培养的影响.结果表明,在ESCs培养液中添加KSR,胚胎贴壁率显著低于添加FBS(P<0.05),ICM集落形成率和1代ESCs集落出现率差异不显著(P>0.05),2～5代ESCs集落出现率显著高于添加FBS(P<0.05),2株ESCs传到7代;在ESCs培养液中添加FBS PD98059,胚胎贴壁率、ICM集落形成率和1～5代ESCs集落出现率均显著低于添加KSR或FBS(P<0.05);用0.5 g/L胰酶 0.2 g/L EDTA离散消化ICM细胞和ESCs并结合机械分割,1～5代ESCs集落出现率显著高于用2.5 g/L胰酶 0.2 g/LEDTA(P<0.05).实验结果表明,在ESCs培养液中添加KSR,较添加FBS或FBS PD98059更适合用于分离培养昆明系mESCs,用0.5 g/L胰酶 0.2 g/L EDTA离散消化ICM细胞和ESCs并结合机械分割优于用2.5 g/L胰酶 0.2 g/L EDTA.  相似文献   

牛体细胞核移植胚和孤雌激活胚的两步法体外培养     

李裕强  张琇  李煜  张涌 《农业生物技术学报》2004,12(6):653-657

摘要：研究了牛体细胞核移植胚和孤雌胚在不同体外培养系统中的发育效果。结果显示：牛孤雌胚在培养液BECMaa＋10％FBS中的囊胚发育率明显高于SOFaa＋10％FBS或TCM199＋10％FBS （16.5% ∶ 13.6% / 12.8%, P＜0.05）；而在SOFaa＋10％FBS中添加还原型谷胱甘肽（GSH）后，牛孤雌囊胚的发育率显著提高（18.5% ∶12.8%, P＜0.01）。成纤维细胞生长因子4（FGF4）或胰岛素添加进无血清SOFaa（含GSH）中，可明显提高牛体细胞核移植胚的囊胚发育率（8.7% / 9.3%∶5.5%, P＜0.05），血清存在时，这两种生长因子无明显作用。依据上述结果及牛早期胚胎的代谢特征，以SOF为基础液合成两组培养液分两步培养牛胚胎，即先用胚胎培养液Ⅰ（SOFnaa＋GSH＋EDTA＋insulin）培养72 h，然后换用胚胎培养液Ⅱ（SOFaa＋GSH＋5％FBS＋葡萄糖＋insulin）继续培养，与对照组（SOFaa＋GSH＋10％FBS一步培养）相比，牛孤雌胚和核移植胚的囊胚发育率都明显提高（22.3%∶18.5%; 15.0%∶11.7%, P＜0.01），说明两步法培养体系更符合牛早期胚胎不同发育阶段的代谢特征和营养需求，是一种适宜的牛胚胎培养方法。  相似文献   

牛腔前卵泡入培直径及每孔培养卵泡数对其体外发育的影响*     

李海  周虚  高志花  安铁洙 《农业生物技术学报》2003,11(5):500-505

用改良的McCoy's 5a无血清培养液(含20 mmol/LHepes、3 mmol/LL-谷氨酰胺、0.1%BSA、29 ng/mL睾酮、2.5μg/mL转铁蛋白、100ng/mL胰岛素和4ng/mL硒),在96孔培养板中,每孔250μL培养液的条件下,研究了卵泡的入培直径及共培养卵泡数对牛腔前卵泡体外发育的影响.结果表明Ф＞130μm的腔前卵泡成腔率、成活率及发育率高于Ф＜130μm的其它两组(60μm＜Ф＜130μm和Ф＜60μm)腔前卵泡(P＜0.05);每孔1个和每孔2个卵泡培养有利于卵泡的生长和发育,在体外培养15 d时,每孔1个和每孔2个卵泡和卵母细胞直径平均增长值显著高于每孔3个卵泡共培养组(P＜0.01).体外培养10 d后成腔率、发育率和成活率均高于每孔3个卵泡共培养组(P＜0.05).说明在此无血清培养系统中,卵泡的直径越大,在体外培养时成活率越高,生长和成腔越快.同时,共培养卵泡数不能超过3个.  相似文献   

促性腺激素及卵泡液协同对牛腔前卵泡体外发育的影响     

高志花  官丽辉  杨志敏  郝荣超  傅永斌  班东妹  王向朝  周虚 《农业生物技术学报》2010,18(2):308-312

将100个φ100～150μm牛腔前卵泡,随机分成8组,每组12～13个卵泡,在McCoy's 5a无血清培养系统研究了促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)有、无两种情况下,添加0、10%、15%及20%牛卵泡液(BFF)对牛腔前卵泡的体外生长、发育、存活及雌二醇(E2)分泌的影响.结果显示,在无促性腺激素下,添加不同浓度BFF对牛腔前卵泡体外发育无明显促进作用(P>0.05),但可刺激体外培养腔前卵泡的E2分泌.当有10 ng/mL LH和50 ng/mL FSH存在下,培养不同时间腔前卵泡的发育率、存活率,各卵泡液组均高于对照组,其中10%BFF组腔前卵泡培养6 d时发育率为(78.52%)与对照组(49.28%)差异显著(P<0.05),培养12 d腔前卵泡φ增长值33.7±4.8μm,显著高于对照组及其它处理组(P<0.01),同时在培养9 d时,有一枚卵泡成腔;各添加卵泡液组的E2测定值更高,其中添加10%BFF组中φ>100μm腔前卵泡在培养6 d时其E2分泌量达最高值48.96±1 1.54 pg/mL.表明FSH、LH存在下,培养液中加入10%BFF可显著提高腔前卵泡在体外的生长、发育、存活和E2分泌及诱导卵泡腔的形成.  相似文献   

山羊卵母细胞的显微受精及胚胎培养   总被引：2，自引：0，他引：2  

赵晓娥  鲁进  刘凤军  王勇胜  武浩  李裕强  张涌 《农业生物技术学报》2005,13(4):507-511

采用胞质内精子注射（ICSI）构建山羊显微受精胚，在两种培养液（CR1aa和SOFaa）与颗粒细胞共培养条件下，分别添加不同浓度的牛卵泡液（BFF）和胎牛血清（FBS），研究其对山羊卵母细胞显微受精胚体外发育的影响。结果表明：①在CR1aa培养液与颗粒细胞共培养条件下，添加10％BFF的ICSI胚的囊胚发育率最高（22．2％），显著高于添加5％（13．1％）和15％（2．7％）组。②在SOFaa培养液与颗粒细胞共培养条件下，添加10％BFF的ICSI胚的囊胚发育率（25．1％）显著高于添加5％（12．9％）和15％（3．0％）组。③在两种培养液中，分别添加10％BFF和10％FBS，ICSI胚的囊胚率分别为22．6％和26．9，5．8％和6．1％。表明：CR1aa和SOFaa两种培养液都适宜山羊的1CSI胚体外培养；在早期胚胎培养中，添加10％BFF可显著提高ICSI胚的囊胚发育率：添加10％BFF比添加10％FBS对提高早期胚胎培养质量更为有效。  相似文献