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传统酶联免疫吸附试验一般用辣根过氧化物酶(HRP)标记IgG进行检测。HRP的稳定性虽好,但敏感性稍差。为了克服这一不足,引入碱性磷酸酶(AP)检测系统,进行免疫强化斑点试验检测口蹄疫病毒的研究。用光敏生物素标记纯化的A蛋白(SPA)代替第二抗体,通过AP标记的亲和素(Avidin-AP)检测生物素化抗体,最后加入底物BCIP和NBT显色判定。该法操作简单、检测时间短,并具有良好的特异性和重复性。由于引入生物素系统和AP,检测的灵敏度比曾通ELISA高。 相似文献
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《畜牧与兽医》2017,(1):65-70
为检测弓形虫循环抗原,以实现弓形虫急性感染的早期诊断,本研究建立了基于ABC(avidin biotin-peroxidase complex)放大系统的双抗体夹心ELISA方法。通过制备弓形虫排泄分泌抗原(ESA)并免疫动物,经3种抗原的筛选以获得抗循环抗原(CAg)的单抗,以方阵滴定法确定最佳多抗包被浓度和单抗工作浓度,利用夹心法和ABC放大系统建立检测弓形虫循环抗原的夹心ABC-ELISA方法,用该方法对人工感染犬血清和其他阳性血清样本进行检测以确定该方法的检出时间和准确性,并应用于临床样品的检测。结果:获得了3株针对不同抗原表位的单克隆抗体,并对CAg有较高特异性。双抗体夹心ABC-ELISA反应条件:兔多抗包被浓度为3.7μg/mL,生物素标记3A5、3E5和10F5-3单抗在混合工作液中的浓度分别为0.1、0.13和0.12μg/mL。该ELISA方法对ESA最低检测限为11.9 ng/mL,并与隐孢子虫早期感染牛血清、血吸虫尾蚴早期感染牛血清、艾美耳球虫早期感染鸡血清、犬瘟热急性感染早期血清、犬细小病毒急性感染血清无交叉反应。用该ELISA方法检测人工感染的犬,于感染后2 d血清即显示阳性,该方法能明显区分标准阳性血清和阴性血清。用该方法检测68份猪临床血样(其中包括2份标准阳性血清),检测结果与Nest-PCR结果一致。表明该双抗体夹心ABC-ELISA方法特异性强、敏感性高,可用于弓形虫急性感染的早期或活动期的诊断。 相似文献
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将斑点酶联免疫吸附试验(Dot—ELISA)用于检测猪弓形虫抗体,并与常规ELISA和IHA法进行了比较。结果,对102份滴度下降的猪阳性血清检测,弓形虫抗体阳性检出率,Dot—ELISA为66.67％(68/102),常规ELISA为48.04％(49/102),IHA为27.45％(28/102);对675头商品猪血清检测,弓形虫抗体阳性检出率,Dot—ELISA为48.15％(325/675),常规ELISA为41.93％(283/675),IHA为33.80％(228/675);与3种寄生虫(猪囊虫、猪旋毛虫、住肉孢子虫)阳性血清无交叉反应;对123份弓形虫抗体阳性和158份阴性猪血清进行3次重复性试验,结果完全一致。结果证明,该法敏感性高,特异性强,操作简便快速(于接到病料后2h报告结果),便于在基层推广使用。 相似文献
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亲和素—生物素系统酶联免疫吸附试验是八十年代初建立起来的一种新型生物反应放大系统,是将具有高亲和力、高稳定性的亲和素—生物素系统(Avidin-Biotin System,ABS)引入ELIsA反应的免疫诊断技术.ABC—BLISA即亲和素—生物素—过氧化物酶复合物(Avidin-Biotin-Peroxidase Complex)则是预先按一定比例将生物素化酶与亲和素共温形成ABC复合物,再使ABC复合物与生物素化抗体的反应.近年来,ABC—ELISA以其明显的优越性而日益受到了国内外学者的关注,在寄生虫病的免疫诊断方面得到广泛应用,并取得了可喜进展.本文就ABC—ELISA在寄生虫病的免疫诊断方面的应用概述如下. 相似文献
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<正> 七十年代中期,亲和素(Avidin)与生物素(B-iotin)之间的强亲和作用及多价反应性,引起了免疫学工作者的极大兴趣,经研究进行亲和素与生物素既可偶联抗体等一系列大分子生物活性物质,又可被酶等多种材料所标记,据此发展成为一种新颖的生物反应放大系统,即亲和素-生物素系统(Avidin-BiotinSystem,ABS)。该系统最初被用于免疫组织化学,进行组织和细胞内特异性抗原的检测、定位及半定量研究。1979年,Guesdon等又将ABS首次引入了固相酶免疫吸附试验。ABS-ELISA是亲和素-生物素系统与ELISA技术相结合所建立的一种新的 相似文献
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弓形虫病免疫学诊断方法研究进展 总被引：7，自引：0，他引：7
弓形虫病是一种分布广泛、危害严重的人兽共患病,不但在公共卫生上有很重要的意义,而且对畜牧业也造成巨大经济损失.为了寻找敏感、特异、快速的弓形虫病诊断方法,国内外学者在弓形虫病诊断方面进行了大量研究.目前,弓形虫病调查、诊断的方法有病原学方法、免疫学方法、分子生物学方法,但免疫学方法仍是进行弓形虫感染调查、弓形虫病诊断的常用方法.检测抗弓形虫抗体或循环抗原的免疫学诊断方法主要有染色试验(DT)、凝集试验(AT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫胶体金技术等.文章就该病的免疫学诊断方法的研究进展加以概述. 相似文献
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由于科学技术的发展,囊虫病免疫诊断检测方法有了很大的进展,主要有1.免疫学检测方法,包括酶联免疫吸附法(ELISA)、斑点酶联免疫吸附法(Dot-ELISA)、生物素-亲和素酶联免疫吸附法(BAS-ELISA)、单克隆抗体酶联免疫吸附试验(McAb-ELISA)、酶联免疫印渍技术(ELIB);2.基因检测技术,包括DIG标记DNA探针、细胞因子基因检测方法、基因重组技术;3.免疫试剂盒的应用,包括循环抗原酶联免疫试剂盒、猪囊虫短程抗体IgG4快速ELISA检测试剂盒等。 相似文献
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目的:分析ELISA方法和IHA方法检测弓形虫病的可靠性。方法:本文应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接血凝试验(IHA)两种方法,平行检测来自龙岩市某个猪场的32份猪血清中的抗弓形虫特异性抗体。结果:ELISA和IHA对猪弓形虫抗体阳性检出率分别为62.5%(20/32)、53.13%(17/32),这两种方法的阳性检出符合率较高,为71.88%(23/32)。其中,ELISA方法的敏感性(93.33%)、检测效率(81.25%)以及Youden指数(63.92%)都在IHA方法之上,但ELISA方法的特异性(12/17,70.59%)略低于I-HA方法(13/17,76.47%)。结论:ELISA和IHA两种方法均可用于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,但ELISA方法更适用于猪弓形虫病的血清学调查。 相似文献
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选用VEG株弓形虫的卵囊和包囊分别灌胃接种昆明小鼠,采用改良凝集试验和PCR方法分别检测小鼠血液中的弓形虫IgG抗体和虫体基因片段。结果显示,卵囊感染的小鼠弓形虫抗体第9天100%检出;而包囊感染的小鼠弓形虫抗体第12天100%检出。VEG株弓形虫感染小鼠后,血液中可检出弓形虫的DNA片段,检出率为25%(6/24)。小鼠组织洗液可检出弓形虫抗体,但组织洗液弓形虫抗体滴度均明显低于血清弓形虫抗体滴度(P0.05)。结果表明,小鼠急性感染VEG株弓形虫后,血清学检测方法可靠,在12d可100%检出弓形虫抗体;对于弓形虫弱毒株,PCR方法检测弓形虫核酸片段,检出率低;组织洗液能检测出弓形虫抗体,有望应用于肉类产品的安全性评价。本试验为人类和其他动物弓形虫感染的早期诊断奠定基础。 相似文献
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根据10头人工感染弓形虫病猪的间接血凝试验（IHAT）和酶联免疫吸附试验（ELISA）血清抗体检测结果表明．所有被检猪感染后第14天血清抗体达到阳性滴度．第21天抗体滴度达到高峰．第28天开始下降。猪弓形虫病血清学诊断的最佳时间为感染后14～28天。ELISA比IHAT抗体检出时间早．抗体滴度高．维持阳性抗体滴度的时间长。 相似文献
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采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对采自遵义市种畜场和规模场的329份猪血清样本进行弓形虫病隐性感染抗体检测,结果显示,猪弓形虫隐性感染抗体阳性率高达82.37%(271/329),表明遵义市各县区存在不同程度的猪弓形虫隐性感染情况。其中,种畜场隐性感染抗体阳性率达92.00%(46/50),规模场为80.65%(225/279),种畜场猪弓形虫隐性感染情况比规模场略严重。试验结果为遵义市防控猪弓形虫病提供了理论依据。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2018,(24)
为了了解湖南省部分猪场种猪群弓形虫感染情况及弓形虫感染对病毒疫苗(猪瘟、蓝耳病、口蹄疫)抗体和生产成绩的影响,试验采用ELISA抗体检测方法对湖南省7个市14个猪场(分别来自3个不同种源)送检的184份种猪血清进行猪弓形虫抗体的检测,同时又进行了猪瘟病毒抗体、猪蓝耳病病毒抗体和O型猪口蹄疫病毒抗体检测,同时结合生产成绩进行分析。结果表明:各地区猪场猪均有弓形虫感染,平均抗体阳性率为58. 7%,其中常德市最高,达到90. 0%。从14个猪场的种猪来源分析,种源不同,弓形虫抗体阳性率存在差异(47. 1%～69. 0%),就算是同一种源的不同猪场,弓形虫感染情况也相差比较大。弓形虫的感染情况与猪群的健康状况有关,猪群弓形虫抗体OD_(450)值平均值越高,猪瘟病毒的免疫抗体越低,弓形虫抗体OD450值平均值在2. 000以上的猪群,蓝耳病病毒抗体水平则有明显下降趋势;猪场生产成绩与弓形虫的感染情况无明显关联。说明该地区猪弓形虫感染较普遍,在猪群健康度较好的情况下,猪场生产成绩与弓形虫的感染情况无明显关联,但弓形虫的感染程度对其他病毒的免疫抗体水平有间接的影响。 相似文献
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利用生物素—亲和素生物放大系统的原理,并结合酶联免疫吸附试验(ELISA),建立了新的检测家蚕浓核病毒(DNV)抗原的方法。 相似文献
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杨永钦 《中国预防兽医学报》1994,(5)
常规酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）一般用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记ＩｇＧ进行检测．ＨＲＰ稳定性好，但敏感性稍差。为了克服这一不足，引入碱性磷酸酶检测系统，进行免疫强化斑点试验检出口蹿疫病毒抗体．用光敏生物素标记纯化的Ａ蛋白（ＳＰＡ）代替第二抗体．通过ＡＰ标记的亲和素（Ａｙｉｄｉｎ－ＡＰ）检测生物素化抗体，最后加底物ＢＣＩＰ和ＮＢＴ显色判定。该法具有良好的特导性和重复性，由于引入生物素系统和ＡＰ，使灵敏度大大提高，能检出微量抗体，比常规ＥＬＩＳＡ更敏感． 相似文献