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1.
雌激素受体(estrogen receptor,ESR)基因对动物的生殖功能发挥着重要的作用。根据GenBank发表ESR基因外显子1的序列设计引物,采用PCR-SSCP技术分析ESR基因外显子1在河西绒山羊中的单核苷酸多态性,研究该基因对繁殖性能的影响。结果:ESR基因外显子1在所检测河西绒山羊品种中不存在PCR-SSCP多态性,所扩增的片段核苷酸和氨基酸序列与绵羊、人、牛、猪、马、大鼠、小鼠和鸡8个物种的同源性分别为52.0%～98.1%和57.9%～98.2%,序列分析证明山羊ESR基因外显子1序列比较保守,该区域不是影响河西绒山羊繁殖力的功能结构域。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2017,(23)
为了研究和田羊MTNR1a基因结构、多态性及与其他物种的同源性,根据Gen Bank中绵羊的MTNR1a(登录号为NM001009725)基因序列,以Primer 5.0和DNAMan软件设计引物后,通过提取和田羊卵巢总RNA,并将其反转成c DNA,采用qRT-PCR技术,以c DNA为模板,利用PCR扩增得到350 bp的基因片段。将扩增产物进行纯化和测序分析后,与Gen Bank数据库中其他物种的MTNR1a基因序列进行同源性比较。结果表明:和田羊MTNR1a基因与已发表的绵羊属Chokla、Musimon和Patanwadi(登录号分别为KC727711、FJ801038、KJ865682)三个品种羊的同源性均高于98%;与牦牛、野牛、牛、山羊和藏羚羊(登录号分别为KF569810、XM010835821、U73327、KC865680、KJ005972610)的同源性为96%~98%。 相似文献
3.
济宁青山羊BMP15基因外显子2的克隆与序列分析 总被引：1，自引：1，他引：0
本研究对高繁殖力的山羊品种济宁青山羊和低繁殖力的山羊品种内蒙古绒山羊共20只母羊的骨形态发生蛋白15（bone morphogenetic protein 15, BMP15）基因第2外显子的扩增产物进行了克隆测序及序列比较分析。结果表明：BMP15基因第2外显子的第3对引物扩增片段存在多态。济宁青山羊与内蒙古绒山羊相比，其BMP15基因外显子2差异由2个核苷酸和2个氨基酸改变组成，核苷酸同源性为99%。济宁青山羊与鸡、小鼠、人、猪、牛、绵羊之间BMP15基因外显子2的核苷酸序列同源性为71%～99%，氨基酸序列同源性为43%～99%。 相似文献
4.
为了扩增呼和浩特地区布鲁菌OMP25基因的序列,试验参照GenBank上已登录的布鲁菌外膜蛋白OMP25的基因序列设计1对引物,采用聚合酶链式反应(PCR)技术从灭活的羊种布鲁菌中扩增出OMP25基因片段,将其克隆到pMD19-T载体后测序并应用计算机软件进行分析。结果表明:所测定的序列与羊种布鲁菌(B.melitensis)U33003 OMP25基因的核苷酸同源性为99.5%,推导出的氨基酸同源性为98.1%;与绵羊种布鲁菌(B.ovis)U33004 OMP25基因的核苷酸同源性为98.7%,氨基酸同源性为97.0%。 相似文献
5.
根据GenBank上绵羊的BMP-2基因序列设计特异性引物,以辽宁绒山羊基因组DNA为模板,利用聚合酶链式反应,成功克隆了常年长绒型和季节长绒型辽宁绒山羊BMP-2部分基因片段,丰富了绒山羊BMP-2基因序列。经与绵羊、牛、鼠、猪和人的BMP-2基因进行的比对结果表明,季节与常年长绒型辽宁绒山羊的BMP-2基因同源片段的同源性达到99．7％,二者与绵羊同源性为98．2％和98．4％;与牛同源性为98．2％和97．9％;与鼠同源性为86．3％和86％;与人同源性为88．1％和88．1％。结果表明,辽宁绒山羊BMP-2基因部分核苷酸序列与其他哺乳动物同源性很高,与绵羊、牛的同源性高达97％以上,这与它们的种属关系相近一致。与人、鼠的同源性也在86％以上,说明BMP-2基因在不同物种之间具有较高的保守性。 相似文献
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根据已发表的基因序列设计了1对PCR引物，以伪狂犬病病毒Ea株(pseudorabies virus Ea，PRv Ea)基因组DNA为模板．扩增出一大小为511bp的片段。通过酶切和测序证实，该基因为伪狂犬病病毒Ea株的又一糖蛋白基因，即gL基因。Blast软件分析表明，该基因与Kaplan株核苷酸序列的同源性为94％，氨基酸序列的同源性为95％。将测序结果输入GenBank，获得登录号AF448456。 相似文献
8.
为研究猪附红细胞体MSG1基因的遗传变异特点,从上海地区3个屠宰场采集自然感染附红细胞体的猪血液,提取基因组DNA,根据GenBank已经发表的猪附红细胞体MSG1基因序列(登录号AM407404.1),设计引物进行PCR扩增,将扩增产物连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析.结果共获得了82条猪附红细胞体MSG1基因序列,序列长度为1 011 bp,共编码336个氨基酸.同源性分析显示与GenBank中已经发表的猪附红细胞体MSG1基因核苷酸序列相似性为96.5％～98.3％,氨基酸的相似性为97.9％～99.1％0.MSG1基因核苷酸序列的系统进化分析表明,上海地区猪附红细胞体分离株与GenBank登录的德国54/96分离株序列的亲缘关系较远. 相似文献
9.
小尾寒羊雌激素受体基因外显子4的克隆与序列分析 总被引：1，自引：1，他引：0
根据GenBank发表的人、鸡、大鼠雌激素受体(estrogen receptor,ESR)基因外显子4的序列设计1对引物,采用PCR 技术扩增出小尾寒羊ESR基因外显子4的DNA片段,将该片段克隆到pGEM-T Easy 质粒中,重组质粒用PCR 扩增进行阳性克隆鉴定,然后测定其核苷酸序列并推导氨基酸序列,同时将测定的小尾寒羊ESR基因外显子4序列与人、牛、猪、大鼠、鸡的外显子4序列进行比较。结果表明：克隆测序所得的核苷酸和翻译后的氨基酸序列与人、牛、猪、大鼠、鸡相比,同源性分别为77.68%～97.28%和71.82%～98.18%,显示了很强的保守性;小尾寒羊的核苷酸序列与人、牛、猪、大鼠、鸡相比存在1处特有变异,氨基酸序列23～36存在高变异区。 相似文献
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绵羊肺腺瘤病毒NM株前病毒gag基因的克隆与序列分析 总被引：4，自引：0，他引：4
参照GenBank中已发表的绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的全基因序列，设计合成3对引物，对JSRVNM株的gag基因分3段进行PCR扩增，经琼脂糖凝胶电泳分析，分别呈3条531、888和949 bp的特异条带，将其分别克隆人pMD-18T载体中，进行序列测定并拼接序列，得到完整的gag基因序列。分析结果表明，与南非代表株(基因序列号NC-001494)的gag基因序列比较，核苷酸同源性为89．0%，推导出的氨基酸同源性为90％。与美国代表株(基因序列号AF105220)的gag基因序列比较，核苷酸同源性为86．3％，氨基酸同源性为87％。 相似文献
11.
以内蒙古白绒山羊DNA为模板,参照牛的角蛋白14(keratin 14,K14)基因序列设计引物,PCR扩增获得长度为2834 bp(GenBank登录号:JQ063036)的片段,包括山羊K14基因启动子区2631 bp和结构基因第1外显子区203 bp。序列比对山羊K14基因启动子序列及其多态性分析结果发现,山羊K14基因启动子结构与人K14基因启动子不同,只含有Sox-5、GATA-1、GATA-1/2结合位点等3个共同的转录因子结合位点。但与牛K14基因启动子有较高的相似性,含有Sox-5、SRY、CdxA、MyoD、MZF1、GATA-1/3、Nkx-2结合位点等7个共同的转录因子结合位点;并发现山羊K14基因启动子区存在deltaE、GATA-2、GATA-1、Sp-1、AML-1a等5处独有的转录因子结合位点。此外,对山羊K14基因启动子进行多态性分析,发现4处单核苷酸多态位点,其中2处SNPs位于Nkx-2(-2004--1996 bp)转录因子结合位点或Nkx-2(-1590--1583 bp)临近几个碱基内。 相似文献
12.
WANG Xiaodong YANG Chan LIU Qinghua LI Zhenyu WU Hao LIU Guoshi LI Xiang HE Changjiu 《中国畜牧兽医》2007,47(12):3833-3843
This study intended to construct an oocyte-specific expression vector (GDF9-ASMT) for melatonin (MLT) synthetase acetylserotonin methytransferase (ASMT),and granule (luteal) cell-specific expression vector (Cyp17-MTNR1A,MTNR1B) for MLT receptors MTNR1A and MTNR1B,the construction of the above vectors provided carrier materials for further production of transgenic sheep with high fertility.First,the goat GDF9 and Cyp17a1 promoter sequences were amplified separately.Then,the full-length CDS sequences of ASMT,MTNR1A and MTNR1B genes were amplified,and ASMT gene was connected to the downstream of GDF9 promoter by enzyme-cutting,with MTNR1A and MTNR1B respectively connected to the downstream of Cyp17a1 promoter to prepare Pro/GDF9-ASMT,Pro/Cyp17-MTNR1A and Pro/Cyp17-MTNR1B expression elements.Finally,the above-mentioned expression elements were integrated into the pcDNA3.1(+) vector by enzyme digestion,thereby constructing pcDNA3.1-Pro/GDF9-ASMT,pcDNA3.1-Pro/Cyp17-MTNR1A and pcDNA3.1-Pro/Cyp17-MTNR1B eukaryotic expression vectors.After sequencing verification,the GDF9 and Cyp17a1 promoters amplified in this study were 2 496 and 2 497 bp in length respectively,and they were 98% homologous to the 2 500 bp region upstream of the start codons of the goat GDF9 and Cyp17a1 genes in GenBank database.The amplified ASMT,MTNR1A and MTNR1B CDS sequence lengths were 1 037,1 100 and 1 130 bp,and the homology with the standard sequences submitted by GenBank were 98%,98% and 99%.The amino acid sequence homologies was 97%,98%,99% respectively.The construction of the above vectors provided references for further production of melatonin transgenic sheep with high fertility. 相似文献
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本研究旨在构建褪黑素（melatonin，MLT）合成酶乙酰血清素甲基转移酶（acetylserotonin methytransferase，ASMT）的卵母细胞特异表达载体GDF9-ASMT和MLT受体（MTNR1A与MTNR1B）的颗粒（黄体）细胞特异表达载体Cyp17-MTNR1A、MTNR1B，以期为进一步生产高繁殖力转基因山羊提供载体材料。首先，分别扩增出山羊生长分化因子9（GDF9）与细胞色素P450家族17亚家族A成员1（Cyp17a1）启动子序列备用；然后，扩增ASMT、MTNR1A及MTNR1B基因CDS全长序列，并通过酶切将ASMT连接至GDF9启动子下游，将MTNR1A和MTNR1B连接至Cyp17a1启动子下游，制备出Pro/GDF9-ASMT、Pro/Cyp17-MTNR1A与Pro/Cyp17-MTNR1B表达元件；最后通过酶切连接将上述表达元件整合至pcDNA3.1（+）载体中，从而构建出pcDNA3.1-Pro/GDF9-ASMT、pcDNA3.1-Pro/Cyp17-MTNR1A和pcDNA3.1-Pro/Cyp17-MTNR1B真核表达载体。经测序验证，本研究扩增出的GDF9和Cyp17a1启动子长度分别为2 496和2 497 bp，与GenBank数据库中山羊GDF9和Cyp17a1基因起始密码子上游2 500 bp区域的同源性均为98%；扩增出的ASMT、MTNR1A与MTNR1B的CDS序列长度分别为1 037、1 100和1 130 bp，与GenBank所递交的标准序列同源性分别为98%、98%和99%，氨基酸序列同源性分别为97%、98%和99%。上述载体的成功构建可为进一步生产褪黑素高繁殖力转基因山羊提供参考。 相似文献
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野生与家养乌苏里貉FSHβ和FSHR基因的克隆及序列分析 总被引：1，自引：1，他引：0
对野生和家养乌苏里貉的FSHβ基因部分序列、FSHR基因5'端上游调控区和外显子10进行扩增和测序,获得序列长度分别为1257、757和1398 bp,提交GenBank,登录号分别为HQ385977、HQ385978和HQ385979。BLAST比较分析3段序列外显子区,与犬的同源性分别为99%、98%和98%。利用DNAMAN软件对2只野生与2只家养貉进行多序列比对,结果分析,3个基因片段中分别检测到12、10和3个变异位点,其中编码区碱基的突变位点分别有2、1和0个;将2只野生貉的序列相比较,发现3段序列分别有6、9和3个多态位点,而将2只家养貉的序列相比后分别有2、1和0个多态位点,说明野生貉更具有遗传多样性。 相似文献
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试验旨在了解角蛋白5(keratin 5, K5)可能的调控序列。本研究根据UCSC公布的牛K5基因5'侧翼区设计PCR引物,扩增了内蒙古绒山羊K5基因部分启动子序列。通过产物纯化、连接、转化,并对测序结果进行了生物信息学分析。结果扩增得到内蒙古绒山羊K5基因启动子序列长度为1452 bp(GenBank登录号为:JQ277735),与牛和人相应序列的相似性分别为91.5%和74%。转录起始位点位于翻译起始密码子ATG上游－101 bp位置;含有两个TATA 盒,分别位于翻译起始位点上游－129—－124 bp(ATAAAA)和－178—－174 bp(TTAAT)位置;通过在线分析软件预测发现(按5'→3')SRY,MZF1,v-Myb,SRY,AP-1,CDP CR,HNF-4,AML-1a,HSF2,AP-4,AP2,AP2,Sp1,Nkx-2,Sp1和GATA-1转录因子结合位点。其中,转录因子SRY(TGTGTTT),和CDP CR(GATTGATGGC)是绒山羊特有的;转录因子HNF-4,AML-1a,HSF2,AP-4,AP2,Sp1,Nkx-2和GATA-1(AGCCATCATG)在绒山羊、牛和人K5启动子上的结合位点高度保守。两个最小增强子分别位于翻译起始位点ATG上游－140—－91 bp和－114—－67 bp位置,含有24 bp(GCGGCTCCCAGGTAACAGAGCCGC)重叠区,预测其与绒山羊K5基因的转录调控有关。试验确定了内蒙古绒山羊K5基因启动子的转录起始位置、转录因子结合位点及最小增强子序列,为进一步研究绒山羊K5基因的表达调控机制奠定了理论基础。 相似文献
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克隆拟态弧菌(Vibrio mimicus) OmpK（outer membrane protein K）基因并进行相关序列的分析。根据已发表的拟态弧菌OmpK基因序列设计合成引物,以拟态弧菌CGMCC 1.1969标准株的基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得801 bp片段并测序,序列已提交至GenBank (GenBank登录号为FJ462707)。拟态弧菌OmpK序列比对结果显示,溶藻弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、河弧菌OmpK基因序列的同源性均大于78%。该基因编码1个含267个氨基酸残基的蛋白质,预测分子质量为29.6 ku。利用基因工程方法将该基因片段定向克隆至表达载体中,并在大肠杆菌中获得高效表达,表达后的OmpK蛋白分子质量约为28 ku。 相似文献