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1.
[目的]为减少鼠源单克隆抗体的异源性在犬临床治疗中引起的宿主免疫排斥反应,针对H_3N_2亚型犬流感病毒(CIV),制备具有犬源抗体恒定区基因(Fc)的鼠/犬嵌合抗体。[方法]从产生具有良好中和活性CIV单抗的鼠源杂交瘤细胞株中扩增抗体重链和轻链可变区基因,通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)获得单链抗体基因(scFv)片段,同时从犬外周血单核细胞中扩增得到犬源抗体Fc片段;分别构建单链抗体与嵌合抗体表达载体,通过大肠杆菌表达、纯化后调整蛋白浓度为1 mg·mL~(-1),检测单链抗体与嵌合抗体的ELISA和血凝抑制(HI)效价,并分析其对病毒感染细胞的中和活性。[结果]获得的H_3N_2亚型CIV鼠源scFv的相对分子质量为45×10~3,ELISA及HI效价分别为1∶640(1.56μg·mL~(-1))和1∶160(6.25μg·mL~(-1)),中和效价为1∶160(6.25μg·mL~(-1));鼠/犬嵌合抗体scFv-Fc的相对分子质量为80×10~3,ELISA及HI效价分别为1∶2 560(0.39μg·mL~(-1))和1∶640(1.56μg·mL~(-1)),中和效价为1∶40(25μg·mL~(-1))。[结论]成功制备了H_3N_2亚型CIV鼠/犬嵌合抗体,为犬流感的临床治疗提供了物质基础。 相似文献
2.
《山西农业大学学报(自然科学版)》2016,(11)
[目的]钾的精确测定是临床诊断和营养分析的关键,为了解决钾离子的定量检测问题,[方法]本文采用巯基乙胺修饰丝网印刷金电极表面并绑定4-氨基二苯并-18-冠-6的方法,研制出一种电流型传感器。在电压范围为-0.3~0.6V,阶跃次数为1以及脉冲宽度为200s时进行电流计时测定。[结果]结果表明,180s后传感器电流稳定,而且该电流与1×10~(-5)~1×10~(-4) mol·L~(-1)范围内的钾离子浓度呈良好的线性关系,显著性检验概率p值小于0.000 1,决定系数为0.998 1。[结论]通过电化学循环伏安法对传感器电极制作过程的表征研究表明,该方法不但可显著改善电极的可逆性及导电性,有利于提高传感器的灵敏度,而且有利于微型钾离子传感器的制作。 相似文献
3.
[目的]研究抗肿瘤中草药芹菜素在玻碳电极上的电化学行为。[方法]运用循环伏安法(CV)、差示脉冲伏安法(DPV)进行研究。[结果]芹菜素运用循环伏安法(CV)在B-R(浓度50%乙醇,pH9.0)缓冲溶液中有一不可逆的吸收波,该氧化过程受扩散控制。利用差示脉冲伏安法(DPV)研究发现在芹菜素浓度为5.0×10-6～9.0×10-5mol/L范围内,吸收峰电流与峰电位有良好的线性关系,检测限为1.5×10-6mol/L。根据差示脉冲伏安法(DPV)中吸收峰的峰电流与芹菜素浓度的线性关系建立了该药物的电化学检测方法,该方法不用预分离其他黄酮类化合物就能达到检测样品中芹菜素含量的目的。[结论]这是一种新型的芹菜素的检测方法。 相似文献
4.
[目的]研究纳米结构葡萄糖传感器的制备及其性能。[方法]通过电化学聚合法和扫描电沉积方法制备纳米结构葡萄糖传感器,采用循环伏安法、XRD、SEM对传感器进行表征。[结果]传感器对葡萄糖的催化氧化电流随葡萄糖浓度的增大而增大,氧化电流密度与葡萄糖浓度在1.0×10-1～1.0×10-6 mol/L范围内有良好的线性关系,检出下限为2.0×10-7 mol/L,测定方法的重复性和复现性RSD为1.5%～2.1%,不同浓度葡萄糖平均加标回收率为95.0%～100.3%。[结论]该传感器对葡萄糖具有高的催化氧化活性,且灵敏度高,测定方法重现性良好,能准确测定人体血糖浓度。 相似文献
5.
利用纳米金溶胶,戊二醛(GA)及牛血清白蛋质(BSA)构成新型生物复合固酶基质,将辣根过氧化物酶(HRP)固定于天青Ⅰ(AI)修饰的玻碳电极(GCE)表面,制得过氧化氢生物传感器.采用循环伏安法和计时电流法对该传感器的性能进行了研究.结果表明,该新型复合固酶基质可很好的保持固定化酶的催化活性,对H2O2的响应范围为3.0×10-6～8.0×10-3mol·L-1,检测限为1.2×10-6mol·L-1,并且该传感器具有良好的灵敏度和选择性. 相似文献
6.
《山西农业大学学报(自然科学版)》2015,(4)
采用石墨烯修饰电极,建立一种电化学检测食盐中碘的新方法。石墨烯修饰电极通过一步电化学沉积法将胶体水溶液中的氧化石墨烯沉积到电极表面制得。考察了电极浸泡时间和溶液pH对碘离子测定的影响。在最佳的实验条件下,采用方波伏安法研究了石墨烯修饰电极对碘离子的响应性能。研究结果表明碘离子的氧化峰电流随碘离子浓度在1×10-7至1×10-2 mol·L-1范围内增加而不断增大,且氧化峰电流的对数与碘离子浓度的对数在5×10-6至1×10-2 mol·L-1浓度范围内具有良好的线性关系。建立的方法具有良好的选择性和重现性,检出限为5×10-6 mol·L-1。在此基础上,将该修饰电极用于食盐中碘的测定。 相似文献
7.
[目的]基于电沉积羧基化石墨烯修饰的玻碳电极建立了一种电化学检测镉离子的新方法。[方法]首先,采用电沉积法制得羧基化石墨烯修饰的玻碳电极。然后,以此修饰电极为工作电极,采用方波伏安法研究缓冲液pH、沉积时间和沉积电位等因素对镉离子测定的影响。最后,在最佳检测条件下,考察该方法检测镉离子的响应性能。[结果]试验表明修饰电极检测镉离子的线性范围为5×10-7~7.5×10-5 mol·L~(-1),检出限为3.6×10-7 mol·L~(-1)。[结论]该方法重现性和选择性好,有望用于水样等样品中镉离子的测定。 相似文献
8.
[目的]构建一种新型DNA电化学传感器,并用于花椰菜花叶病毒35S启动子片段检测。[方法]通过使用氨基化多壁碳纳米管对玻碳电极进行修饰,利用氨基化多壁碳纳米管对硫堇-金纳米粒子-DNA纳米复合物的吸附固定得到用于识别目标DNA的捕获界面,并将亲和素-辣根过氧化物酶修饰的金纳米粒子作为结构末端的信号分子,完成夹心结构传感器组装。试验采用循环伏安法对辣根过氧化物酶催化过氧化氢得到的还原电流进行测试。[结果]该传感器可实现对目标DNA定量检测,线性范围为1×10-18~1×10~(-11)mol/L,检测限低至6.95×10~(-20)mol/L,可特异性识别错配序列,并且表现出良好的重现性和稳定性。[结论]该传感器在转基因食品的检测方面有良好的应用前景。 相似文献
9.
10.
[目的]明确基于Nafion、天青A、纳米金层层自组装固定酶制备过氧化氢生物传感器的可行性。[方法]先利用静电吸附和自组装技术将Nafion、天青A、纳米金修饰到金电极表面,然后利用纳米金吸附辣根过氧化物酶(HRP),制备过氧化氢生物传感器。采用循环伏安法和计时电流法考察该传感器的性能。[结果]在测试溶液pH值5.5、工作电位-0.3~-0.2 V、扫速100 mV/s、检测温度25℃条件下,该传感器具有良好的生物催化活性,还原峰电流与H2O2浓度在2.0×10-6~1.6×10-3mol/L范围内呈良好的线性关系,检出限为7.62×10-7mol/L。该传感器稳定性好,抗干扰力强,制备方法简单,成本低廉,对H2O2有快速灵敏的响应。[结论]该研究制备的过氧化氢生物传感器灵敏度较高,检测范围宽,检出限较低。 相似文献
11.
《山西农业大学学报(自然科学版)》2017,(8)
[目的]准确、快速的检测溶液中铜离子的含量。[方法]本研究采用电化学分析法中的差分脉冲阳极溶出伏安法,首先将原丝网印刷金电极放入稀硫酸溶液中进行循环伏安活化扫描,增强其电极表面的电化学性能;然后采用不同的修饰液修饰活化后的丝网印刷金电极,提高其测定重金属的灵敏度,满足定量、快速的测定要求;再利用差分脉冲阳极溶出伏安法,铋/Nafion修饰的丝网印刷金电极测量确定浓度的标准重金属铜溶液,得出了最优参数。[结果]绘得重金属铜浓度-电流标准曲线图,其重金属铜浓度和电流的决定系数(R2)为0.992 6;当信噪比为3时,传感器的检测限为84.46μg·L-1。[结论]说明该电化学方法对重金属铜具有检测限低、准确性好等优点。 相似文献
12.
《河北北方学院学报(自然科学版)》2017,(8)
目的为从天然化合物中高效筛选具有体液免疫抑制活性的先导化合物,本研究将构建高灵敏且价格低廉的小鼠免疫球蛋白IgG的ELISA检测方法。方法利用山羊抗小鼠IgG的Fc段抗体、生物素标记的山羊抗小鼠IgG的F(ab’)2段抗体、辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素构建小鼠免疫球蛋白IgG的ELISA检测方法;通过对包被抗体浓度、检测抗体浓度和链霉亲和素浓度的优化,使检测方法灵敏度达到最高;再利用该检测方法检测体外培养小鼠B细胞上清中IgG浓度验证方法的有效性。结果在山羊抗小鼠IgG的Fc段抗体浓度达到5μg·mL~(-1),生物素标记的山羊抗小鼠IgG的F(ab’)2段抗体浓度达到0.25μg·mL~(-1),辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素浓度达到0.5μg·mL~(-1),小鼠免疫球蛋白IgG的ELISA检测方法灵敏度达到最高(0.05ng·mL~(-1)),线性范围在0.1~10ng·mL~(-1);该检测方法可以高灵敏检测体外培养LPS刺激小鼠B细胞分泌的IgG抗体。结论本研究成功构建高灵敏且价格低廉的小鼠免疫球蛋白IgG的ELISA检测方法。 相似文献
13.
采用特异性好的鼠源抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)单克隆抗体为捕获抗体,兔源多克隆抗体为检测抗体,建立PEDV双抗体夹心ELISA检测方法。结果显示,该方法的最佳反应条件为:抗PEDV单克隆抗体E1包被质量浓度4.40μg·mL~(-1),37℃包被2h,采用5%BSA封闭液封闭1h,兔抗PEDV抗体工作质量浓度为5.91μg·mL~(-1),酶标二抗稀释度为1∶2000,以OD450nm≥0.381作为阳性判定标准。该ELISA方法对猪轮状病毒和猪传染性胃肠炎病毒无交叉反应。敏感度可达30μg·mL~(-1)(5×103.12);重复性变异系数小于10%。采用该方法和RT-PCR方法同时检测临床样品42份,阳性样品符合率为92.30%,表明建立的PEDV双抗体夹心ELISA检测方法具有特异性好、敏感性高和方便快捷等优点,可用于PEDV快速检测。 相似文献
14.
《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2017,(3)
基于盐酸克伦特罗对于Ru(bpy)32+电化学发光的增敏作用,利用流动注射电化学发光法对盐酸克伦特罗进行检测,研究并考察流速、扫描速率、缓冲液pH值、Ru(bpy)32+浓度对电化学发光的影响;在优化的条件下建立电化学发光强度增加值与盐酸克伦特罗浓度的关系。结果表明:当流速为30μL·s~(-1)、缓冲液pH值为9.0时,Ru(bpy)32+浓度为1.0×10~(-4) mol·L~(-1)是检测盐酸克伦特罗的最佳条件。当盐酸克伦特罗浓度在1×10~(-10)~1×10~(-6) g·mL~(-1)的范围内,电化学发光强度与其浓度的负对数呈良好的线性关系,最低检出限为1×10-10 g·mL~(-1)。 相似文献
15.
16.
以铂电极为基底,用恒电位沉积一层普鲁士蓝(PB),然后用纳米金和明胶构成的复合固酶基质,结合溶胶-凝胶技术将辣根过氧化物酶(HRP)固定在普鲁士蓝修饰的电极表面,再用戊二醛(GA)对复合酶膜进行交联改性,从而制备了性能良好的过氧化氢传感器.采用循环伏安法(CV)、计时电流法、交流阻抗法(EIS)对传感器进行了电化学表征.在pH=6.0的磷酸盐缓冲溶液(PBS)中,探讨了工作电位、pH、温度以及干扰物质对传感器响应电流的影响.实验结果表明,此方法有较高灵敏度、较好抗干扰能力、良好稳定性及重现性.传感器对H2O2的线性响应范围为1.2×10-6～1.3×10-8 mol/L,检测限为6.0×10-7 mol/L. 相似文献
17.
《山西农业大学学报(自然科学版)》2020,(1)
[目的]为了诊断奶牛是否处于发情或妊娠状态,本研究建立一种奶牛孕酮浓度的电化学检测方法。[方法]采用蛋白A将孕酮单克隆抗体固定在电极表面,然后用固定浓度的孕酮抗原分别与不同浓度的孕酮单克隆抗体进行反应,反应过程采用交流阻抗法进行表征分析,并用Zsimpwin和SAS软件对数据分析处理,得到孕酮单克隆抗体浓度与阻抗之间的关系,构建了奶牛孕酮浓度无标记阻抗免疫传感器,实现对奶牛孕酮浓度的检测。[结果]预处理后的电极氧化还原电流比可达1.02,改善了丝网印刷金电极的电化学活性。用SAS软件对拟合数据分析后,得到孕酮单克隆抗体浓度x和阻抗y之间的回归方程为y=27.183 x+80.258,决定系数R2=0.9093,显著性检验概率p值为0.0119,确定了孕酮阻抗传感器的抗体最佳反应浓度为8mg·L~(-1)。[结论]此检测方法为奶牛的健康养殖提供了有效的检测手段。 相似文献
18.
为建立快速、灵敏的检测方法评估四溴双酚A(Tetrabromobisphenol A,TBBPA)类阻燃剂四溴双酚A双(2-羟基乙基)醚(TBBPA-DHEE)在环境中的行为分布,本研究基于TBBPA-DHEE的结构,设计并合成半抗原D_3;采用杂交瘤技术制备了5株针对TBBPA-DHEE的单克隆抗体;鉴定发现这些抗体均与四溴双酚A单(2-羟乙基)醚(TBBPA-MHEE)有较高的交叉反应,与其他TBBPAs没有交叉反应;优化抗原/抗体工作浓度、缓冲液条件后,建立了间接竞争ELISA标准曲线。结果显示优化后的ELISA方法检测TBBPA-MHEE的检测范围为0.86～13.70 ng·mL~(-1),检测限(LOD)为0.78 ng·mL~(-1);检测TBBPA-DHEE的检测范围为0.96～8.10 ng·mL~(-1),检测限为0.56 ng·mL~(-1)。采集山东省寿光市一家BFR工厂周边的水样和土壤样本,发现TBBPA-DHEE/TBBPAMHEE在水样中浓度最高可达15.45 ng·mL~(-1),土壤样本中浓度最高可达6.75 ng·g~(-1)。 相似文献
19.
研究了邻苯二酚（CAT）和对苯二酚（HQ）在Nafion修饰电极上的选择性测定.方波伏安法研究结果表明：在PBS水溶液的CAT和HQ共存体系中,CAT和HQ氧化峰电位分离约400 mV,而且氧化峰电流增大,以此建立了CAT和HQ的电化学选择性测定方法.在1.0×10-4mol/L CAT共存体系中HQ氧化峰电流与其浓度在5.0×10-6～6.0×10-3mol/L内呈良好的线性关系,在1.0×10-4mol/LHQ共存体系中CAT氧化峰电流与其浓度在8.0×10-6～1.0×10-3mol/L内呈良好的线性关系,结果令人满意. 相似文献
20.
电化学法测定废水中对苯二酚的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]研究循环伏安法制备的聚对氨基苯磺酸修饰电极测定废水中对苯二酚含量的效果。[方法]利用循环伏安法制备聚对氨基苯磺酸修饰电极,研究其对对苯二酚的电催化作用,并探索其催化机理。[结果]对氨基苯磺酸修饰电极对对苯二酚有明显的电催化作用,将该电极用于对苯二酚的定量测定,发现其氧化峰电流与对苯二酚的浓度在1．0×10^-6～8．0×10^-5mol／L范围内呈良好的线性关系,相关系数r=0．9894,检测限为5．0×10^-7mol／L。其最佳测量条件：采用pH值5．59的磷酸缓冲溶液为支持电解质,电压范围为-0．1—0．3V。该修饰电极可将邻苯二酚和对苯二酚很好地分开。[结论]建立了一种电化学法测定废水中对苯二酚的方法,该方法简便、快捷、准确、灵敏度高。 相似文献