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1.
辽宁省某奶牛养殖场10～30日龄犊牛发生腹泻,为查明病因,我们对送检的18份犊牛腹泻样本分别进行牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、产肠毒素大肠杆菌(ETEC)、沙门氏菌(Salmonella)和安氏隐孢子虫(C. andersoni)的PCR检测。结果显示:18份犊牛腹泻样本中,BRV、BCoV、BVDV的检出率分别为83.3%(15/18)、88.9%(16/18)、61.1%(11/18),这3种病原的混合感染率较高,其他病原均未检出,说明该奶牛场的犊牛腹泻主要由BRV、BCoV、BVDV混合感染引起。 相似文献
2.
试验旨在掌握河北省唐山市13个县（市、区）奶牛场奶犊牛病毒性腹泻病原的流行状况,有效防控奶犊牛腹泻。采集唐山市不同地区38个奶牛场腹泻犊牛粪便样品788份,提取腹泻粪便样品中的基因组RNA。根据GenBank公布的牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）E2基因、牛轮状病毒（Bovine rotavirus,BRV）VP6基因、牛冠状病毒（Bovine coronavirus,BCV）N基因序列,利用Primer Premier 5.0软件分别设计特异性引物,采用PCR方法检测粪便样品中这3种基因,利用Excel 2007对不同地区、不同季节和混合感染病原检测结果进行汇总分析。在采样范围内的788份犊牛腹泻粪便样品中,BVDV、BRV和BCV阳性检出率分别为29.82%（235/788）、29.44%（232/788）和18.02%（142/788）;在所有被检地区,滦南县BVDV感染率最高,阳性检出率为45.38%（59/130）,汉沽区BRV和BCV感染率最高,阳性检出率分别为55.00%（22/40）和37.50%（15/40）;从采样季节来看,春季、夏季和秋季BRV感染率最高,阳性检出率分别为27.71%（46/166）、39.58%（114/288）和19.89%（39/196）,冬季则以BVDV感染为主,阳性检出率为52.17%（72/138）;从混合感染情况来看,以BRV＋BCV二重混合感染为主,感染率为8.37%（66/788）。河北省唐山市各地区腹泻犊牛群中均存在BVDV、BRV和BCV感染,以BVDV、BRV单一感染为主。 相似文献
3.
《动物医学进展》2021,42(10)
为了解新疆地区奶牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、纽布病毒(NeV)、牛诺如病毒(BNoV)、牛库布病毒(BKV)的感染情况,用RT-PCR方法对采集自新疆昌吉和石河子等地区的10个奶牛场共计86份腹泻犊奶牛粪便样本进行分子流行病学调查。86份样品中,BRV检出率为60.5%(52/86),NeV检出率为51.2%(44/86),BKV检出率为39.5%(34/86),BCoV检出率为26.7%(23/86),BNoV检出率为12.8%(11/86),BVDV检出率为9.3%(8/86)。另外,腹泻粪便样本中BRV、BCoV、NeV、BNoV、BKV和BVDV混合感染严重。研究结果为新疆地区奶牛腹泻的综合防治提供了依据。 相似文献
4.
云南省某奶牛场1～3月龄犊牛暴发以腹泻为主要症状的疾病，本试验对该场送检的16份犊牛腹泻粪便样本进行牛A群轮状病毒（BRVA）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛冠状病毒（BCoV）、牛诺如病毒（BNoV）、牛凸隆病毒（BToV）、牛纽布病毒（BNeV）、沙门氏菌（Salmonella）、产肠毒素大肠杆菌（ETEC）、安氏隐孢子虫（C.andersoni）9种病原的PCR检测。结果得出：16份样本中BNeV、BRVA、BToV和BNoV的检出率分别为62.5%(10/16)、37.5%(6/16)、18.75%(3/16)和6.25%(1/16)，其他病原体未检出。结合临床检查结果，可以确定BRVA、BNoV、BNeV和BToV这四种病原的混合感染是引起该养殖场犊牛腹泻的主要原因，本结果为该场犊牛腹泻疾病的针对性防控提供了依据。 相似文献
5.
2017—2018年山东省奶牛场犊牛腹泻相关病毒病原学检测 总被引：1，自引：0，他引：1
为了解山东省奶牛养殖场中引起犊牛腹泻相关病毒的流行情况，2017—2018年，在全省13个地区51家规模化奶牛养殖场，采集624份犊牛腹泻病料样品，进行牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛肠道病毒（BEV）、牛冠状病毒（BCoV）和牛轮状病毒（BRV）PCR检测，并对检测结果采用SPSS 20.0软件进行数据统计以及显著性差异分析（Pearson卡方检验）。结果显示：BVDV、BEV、BCoV、BRV个体检出率分别为34.58%、11.78%、8.84%、17.70%，群体检出率分别为47.83%、38.89%、35.71%、33.33%，BVDV检出率显著高于其他3种病毒（P<0.01），且有流行加重趋势；鲁西北、鲁中、鲁西南、半岛地区4种病毒的检出率有差异，其中鲁中地区的BVDV检出率明显高于其他地区（P<0.01）。结果表明，BVDV、BEV、BCoV、BRV 4种病原在山东省奶牛场中流行广泛，以BVDV流行最为严重，尤其是鲁中地区，且有流行加重趋势，成为导致奶牛场犊牛腹泻的主要病毒性因素，建议有针对性地开展防控与净化。本检测初步摸清了山东省不同地区引起奶牛犊牛腹泻相关病毒的感染情况，可为山东省制定奶牛腹泻病综合防控措施提供数据支撑。 相似文献
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为了解河南省2021-2022年犊牛腹泻病原流行情况,利用犊牛腹泻病原微生物核酸检测试剂盒（荧光PCR法）分别对2021年河南省20余家牧场送检的170份犊牛腹泻样品,2022年送检的112份犊牛腹泻样品进行牛轮状病毒（BRV）、牛冠状病毒（BCoV）及大肠杆菌K99+(E.coli K99+)荧光PCR检测,并对检测结果采用SPSS 27.0软件进行数据统计以及显著性差异分析（Pearson卡方检验）。结果显示：2022年BRV检出率为50.00%、BCoV检出率为41.00%,相比2021年均显著增高(P<0.01),E.coli K99+检出率与上一年相比基本持平,无明显差异（P>0.05）,说明2022年BRV、BCoV流行情况愈加严重。进一步分析发现,2022年腹泻病原单一感染检出率为26.79%,其中主要是BRV感染,与2021年单一感染检出率25.29%基本持平,差异不显著（P>0.05）。2022年腹泻病原混合感染检出率为35.71%,且主要以BRV、BCoV混合感染为主。相比2021年的12.94%明显上升,差异显著（P<0.01）,说明202... 相似文献
7.
【目的】掌握唐山市13个县(市、区)规模化牛场奶犊牛感染性腹泻病原的流行状况,为该地区有效开展奶犊牛腹泻防控工作提供临床数据。【方法】利用PCR技术对唐山市38个奶牛场腹泻犊牛788份腹泻粪样进行牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)、牛轮状病毒(Bovine rotavirus, BRV)、牛冠状病毒(Bovine coronavirus, BCV)、大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmonella)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、球虫(Coccidia)、隐孢子虫(Cryptosporidium)和贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)9种病原检测,统计分析其阳性率及混合感染情况。【结果】788份犊牛腹泻粪样中,阳性率最高的为大肠杆菌,为43.53%(343/788)。在所有被检地区,滦南县BVDV的阳性率最高,为45.38%(59/130);汉沽区BRV和BCV阳性率最高,分别为55.00%(22/40)和37.50%(15/40);古冶区大肠杆菌和贾第鞭毛虫的阳性... 相似文献
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犊牛腹泻是犊牛常见的疾病之一,影响犊牛生长发育和成活率。2021年1月,西昌市某奶牛场发生犊牛腹泻,为确定病因,笔者运用PCR和RT-PCR方法对该场22份犊牛腹泻粪便样本进行10种腹泻病原检测,结果得出：22份样本均检测到牛病毒性腹泻/黏膜病病毒（BVDV）;16份样本显示牛诺如病毒（BNoV）阳性;12份样本显示纽布病毒（NeV）阳性;8份样本显示牛轮状病毒（BRV）阳性;4份样本为牛细小病毒（BPV）阳性;牛冠状病毒（BCoV）和环曲病毒（BToV）各1份样本显示阳性;而大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌等细菌性病原均未检出。本调查结果表明引起该场犊牛腹泻的原因主要是多种病毒的混合感染,其中牛病毒性腹泻/黏膜病病毒的感染率高达100%。 相似文献
9.
《中国兽医学报》2020,(7)
为建立能同时检测牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)、牛诺如病毒(bovine norovirus,BNoV)和牛嵴病毒(bovine kobuvirus,BKV)的方法,根据BCoV、BNoV和BKV基因组的保守区域设计3对特异性引物,预期特异性扩增BCoV、BNoV和BKV的片段大小分别为896,542,216 bp,建立了BCoV、BNoV和BKV的多重PCR检测方法。特异性检测结果显示,该方法能特异性扩增BCoV、BNoV和BKV的目的条带,且未扩增出其他犊牛腹泻(calf diarrhea,CD)病原;BCoV、BNoV和BKV的最低检测限分别为9.51×10~5,5.39×10~5,2.23×10~6 copies/μL。对采集自河南部分地区的127份CD样品的检测结果显示,BCoV的阳性率为14.96%(19/127),BNoV的阳性率为6.30%(8/127),BKV的阳性率为4.72%(6/127),三者与单一PCR检测结果相一致。结果表明,本研究建立的多重PCR方法可用于BCoV、BNoV和BKV的检测和流行病学调查。 相似文献
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本研究根据BNoV和BKoV基因组的保守区域设计2对特异性引物,建立了能同时检测牛诺如病毒(Bovine norovirus,BNo V)和牛嵴病毒(Bovine kobuvirus,BKo V)的双重PCR检测方法。该方法能特异性扩增BNo V和BKo V的目的条带,且未扩增出其他犊牛腹泻病毒性病原;BNoV和BKoV的最低检测限分别为5.39×105 copies/μL和2.23×106 copies/μL;对临床采集的127份犊牛腹泻样品检测结果显示,BNoV的阳性率为6.30%(8/127),BKoV的阳性率为4.72%(6/127),两者与单一PCR检测结果相一致,符合率为100%。本研究建立的双重PCR方法具有良好的敏感性、特异性、重复性,可用于BNoV和BKoV的快速检测和流行病学调查。 相似文献
11.
Zhu W Dong J Haga T Goto Y Sueyoshi M 《The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science》2011,73(4):531-534
Bovine coronavirus (BCoV) and group A bovine rotavirus (BRV) are two of major causes for neonatal calf diarrhea. In the present study, a one-step duplex RT-PCR was established to detect and differentiate BCoV and group A BRV from fecal samples. The sensitivity of this method for BCoV and group A BRV was 10 PFU/100 μl and 1 PFU/100 μl, respectively. Twenty-eight diarrhea fecal samples were detected with this method, the result showed that 2 samples were identified as co-infected with BCoV and group A BRV, 26 samples were group A BRV positive, and 2 samples were negative. It proved that this method is sensitive for clinical fecal samples and is worth applying to laboratory diagnosis for BCoV and group A BRV. 相似文献
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为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛轮状病毒(BRV)和牛冠状病毒(BCoV)的快速检测方法,根据GenBank中登录的BVDV 5'-UTR、BRV NSP5和BCoV N基因序列设计特异性引物和探针,通过优化反应体系和条件,建立了同时检测上述3种病毒的TaqMan三重RT-qPCR方法。该方法仅对BVDV 5'-UTR、BRV NSP5和BCoV N基因扩增呈阳性,而对牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒、魏氏梭菌(A型、B型和D型)、多杀性巴氏杆菌(A型和B型)等犊牛腹泻相关病原扩增均呈阴性;最低检出限为10拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于2%。利用本研究建立的TaqMan三重RT-qPCR方法对29份临床样品进行检测,获得BVDV、BRV、BCoV的4种混合感染型,其中BVDV与BCoV的混合感染率最高(27.6%);与已有单重RT-qPCR方法比较,发现两种方法检测BVDV、BRV和BCoV的符合率分别为100%、96.5%、100%。结果表明,本研究建立的TaqMan三重RT-qPCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好、可行性高等优点,可为今后BVDV、BRV和BCoV共感染引起的牛腹泻性疾病的鉴别诊断和流行病学调查提供新技术手段。 相似文献
14.
Molecular epidemiology of bovine noroviruses in South Korea 总被引：2，自引：1，他引：1
Park SI Jeong C Kim HH Park SH Park SJ Hyun BH Yang DK Kim SK Kang MI Cho KO 《Veterinary microbiology》2007,124(1-2):125-133
Since the prevalence of bovine norovirus (BNoV) and their genetic diversity have only been reported in the USA, England, Germany and The Netherlands, this study examined the prevalence and genetic diversity of BNoVs in diarrheic calves in South Korea using 645 diarrheic fecal specimens from calves by RT-PCR and nested PCR assays. Overall, 9.3% of the diarrheic fecal samples tested positive for BNoVs by either RT-PCR or nested PCR, of which 5.9% samples also tested positive for other enteric pathogens including the bovine coronavirus, bovine viral diarrhea virus, bovine torovirus, bovine groups A, B and C rotaviruses, bovine enteric Nebraska-like calicivirus and Escherichia coli. The genetic diversity was determined by direct sequencing of the partial RdRp region of 12 BNoVs detected from the fecal samples by nested PCR. Among the BNoVs examined, one Korean BNoV strain had the highest nucleotide (86.8%) and amino acid (99.1%) identity with the genotype 1 BNoV (GIII-1) strain, while the remaining 11 Korean BNoVs shared a higher nucleotide (88.0-90.5%) and amino acid (93.5-99.1%) identity with the genotype 2 BNoV (GIII-2) strains. The phylogenetic data for the nucleotide and amino acid sequences also demonstrated that one Korean BNoV strain clustered with GIII-1 but the remaining eleven strains clustered with GIII-2. In conclusion, BNoV infections are endemic and there are two distinct genotypes with GIII-2 being the main genotype circulating in the calf population in South Korea. 相似文献
15.
【目的】利用原核表达系统体外表达牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)NS5A基因,获得非结构蛋白NS5A,对其进行核苷酸、氨基酸序列分析,以解析BVDV非结构蛋白NS5A的功能。【方法】参考BVDV-1型毒株V006的NS5A基因序列(GenBank登录号:KX170647)设计并合成1对特异性引物,以分离到的牦牛BVDV GSTZ毒株cDNA为模板,PCR扩增NS5A基因片段,并克隆至表达载体pET-28a (+)中,构建重组原核表达载体pET28a-NS5A。经酶切初步鉴定及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,然后利用IPTG诱导表达。经10% SDS-PAGE电泳及Western blotting分析鉴定重组蛋白的表达,并根据NS5A基因的序列构建遗传发育进化树,利用DNAStar软件预测NS5A蛋白的亲水性、表面可塑性和抗原性等特性,并结合二级结构的预测对NS5A蛋白的B细胞抗原表位进行预测。【结果】PCR扩增NS5A目的基因片段为1 488 bp,双酶切和测序鉴定结果证明,重组质粒pET28a-NS5A构建成功。经10% SDS-PAGE电泳及Western blotting鉴定重组蛋白,表达出了大小为55 ku的目的蛋白,大小与预期结果相符。通过对不同BVDV毒株NS5A基因序列构建遗传发育进化树,显示GSTZ毒株NS5A在遗传进化特征上属于BVDV-1型。NS5A蛋白的亲水性主要位于12—21、32—69、75—113、120—135、143—147、152—163、165—180、215—230、265—274、296—340、348—378、389—447、455—463、469—495位氨基酸处,表面可塑性主要位于14—18、37—42、76—81、86—109、154—160、169—178、218—228、297—309、348—358、365—373、414—442、430—437、454—460位氨基酸处,柔性区域较多,主要位于14—21、37—43、67—82、86—93、97—110、152—158、169—179、218—231、240—255、296—310、313—328、344—359、364—373、413—422和472—483位氨基酸处。NS5A蛋白的B细胞抗原表位主要位于15—18、76—81、154—158、169—178、218—228、297—309、348—358、365—373和414—422位氨基酸处。【结论】成功表达并鉴定了牦牛源BVDV的非结构蛋白NS5A,系统发育进化树表明BVDV GSTZ株基因型属于BVDV-1型,NS5A蛋白具有良好的抗原性,为深入解析BVDV非结构蛋白NS5A的自身结构功能、免疫学特性以及进一步研究非结构蛋白对病毒复制的影响提供参考。 相似文献
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【目的】 研究1株利用乳酸的猪源丁酸梭菌的基因组信息。【方法】 采用厌氧培养法, 通过乳酸分解培养基(LADM)初筛、梭菌增殖培养基(RCM)复筛, 从饲喂乳酸菌发酵饲料的健康仔猪肠道内容物中分离利用乳酸快、丁酸转化率高的菌株, 对所筛选的菌株进行形态鉴定、16S rDNA序列分析、乳酸转化特性试验、基因组重测序和框架图测序, 并对其编码蛋白进行功能注释。【结果】 分离得到1株分离菌LY33, 基于形态和16S rDNA序列分析鉴定为丁酸梭菌。菌株LY33对乳酸具有较好的利用能力, 在生长第6天可将66 mmol的乳酸基本转化完全, 生成17 mmol左右的丁酸。LY33菌株的重测序表明, 其编码基因整体变异较小, 与参考基因组相比, LY33菌株全基因组杂合比率为0.022‰, 单核苷酸多态性(SNP)位点变异总数21 590个(占整个基因组0.4666%), 插入缺失(InDel)突变总和594个(占0.0128%), 不存在拷贝数变异(CNV), 结构变异(SV)注释的变异总数103个(占0.0003%)。突变基因主要为与菌株生长、能量代谢调节、维生素合成(特别是生物素)有关的基因, 分布于2条染色体的多条序列上。LY33菌株框架图测序及其编码基因蛋白的功能注释表明, 其基因组序列长度4 627 127 bp, GC含量28.60%, 含有4 171个基因, 编码区总长度占比84.12%, 参与了糖代谢(carbohydrate metabolism)、膜转运(membrane transport)和氨基酸代谢(amino acid metabolism)等多种代谢途径转化过程, 基因组中抗大环内酯类药物、抗杆菌肽、VanI糖肽抗性基因个数较多。【结论】 本研究从饲喂4%乳酸菌发酵饲料的健康仔猪肠道内容物中分离到1株利用乳酸快、丁酸转化率高的LY33菌株, 经鉴定为丁酸梭菌, 其具有良好的应用前景, 可作为一种新的微生物资源用于微生态制剂产品。 相似文献
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牛诺如病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 总被引：1，自引：1，他引：0
牛诺如病毒（BNoV）是国内新发的犊牛腹泻病原,笔者拟建立检测BNoV的Real-time PCR方法。根据BNoV流行株的RNA聚合酶（RdRp）基因序列设计引物,通过优化反应条件和体系,成功建立基于EvaGreen检测BNoV的Real-time PCR方法。该检测方法的Ct值与标准品模板在2.24×102~2.24×108拷贝·μL-1线性关系良好,相关系数R2=0.997,扩增效率为98.44%;该方法可特异性检出BNoV,对其他犊牛腹泻相关病原呈阴性;最低检测限为22.4拷贝·μL-1;批间和批内的变异系数均小于2%,重复性好。对2017年9月-2019年5月采自河南省的221份犊牛腹泻样本中BNoV的检出率为11.31%（25/221）,采样场阳性率为92.86%（13/14）。本试验所建方法灵敏度高、特异性强、稳定性好,为BNoV的检测和流行病学调查提供了有力手段。 相似文献