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使用双翅目昆虫黑腹果蝇( Drosophila melanogaster Fallen )胚细胞系L-2/M delta 2-3作为研究材料,制备10个密度试验组(0.81×106~2.88×107 个·mL-1,每组跨度大于2.00×106 个·mL-1),分别在冻后第6、10、14个月对各组细胞冻后活力、回复时间长短、以及生长状况进行观察和比较,研究密度因素对细胞系L-2/M delta 2-3长期冻存效果的影响。结果表明:冻存密度对细胞系L-2/M delta 2-3冻后活力和状态恢复均有显著影响( P<0.05 )。细胞冻后活力下降速率随冻存密度增高而减慢,复苏后细胞状态恢复所需时间较短。将L-2/M delta 2-3的冻存密度提高至1.3×107 个·mL-1以上有利于细胞活力的保持与冻后的恢复。 相似文献
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采用直接法制备传代细胞染色体标本、常规Giemsa染色、显微镜下计数中期分裂相染色体数目的方法对5个双翅目昆虫细胞系进行了染色体分析.结果显示:C6/36染色体众数为6,为二倍体细胞系;SL2染色体众数为8～12,超二倍体细胞系;L-2/M delta 2-3染色体众数为8～20,超二倍体细胞系;Aedes albopictus Skuse染色体众数为6,为二倍体细胞系;NIH-SaPe-4染色体众数为10条,为二倍体或亚二倍体细胞系.与来源细胞相比,以上5种细胞染色体数目没有发生根本性的改变. 相似文献
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本文报道了挪威云杉(Picea
abies)和杂种落叶松(Larix deciduas× L. kaempferi)人工授粉种子诱导胚性细胞系及植株的再生.挪威云杉在德国Saxon
Ore 山区被选为对空气污染有抗性的树种并种植在位于Waldsieversdorf的林木遗传育种研究所的种植园中.对挪威云杉测试了几个不同亲本组合的种子形成胚性细胞系的能力.这些云杉种子于1992-01采收,含有干燥的成熟合子胚.作为对照,相同的亲本组合云杉种子于1993-08和1998-08采收,合子胚处于成熟中.杂种落叶松则只有一个人工授粉组合,大田试验证实幼苗生长良好.分别于1995和1996年采收含有未成熟合子胚的未成熟种子.诱导愈伤形成用附加细胞分裂素(激动素和/或BAP)和生长素(NAA,
2,4-D)及有机氮源(水解酪蛋白和谷氨酰胺)的标准培养基(SPE和MSG),于黑暗下培养.尽管在建立培养体系后5～12周产生了大量胚性愈伤组织,诱导率超过25%,但1
a后只有超过1%的胚性愈伤组织稳定生长.挪威云杉稳定胚性细胞系的数量与成熟合子胚的采收季节及建立细胞系的时间(8月或1月)无关,但在8月收获的合子胚在挪威云杉5～12周后胚性愈伤组织诱导率要高些,然而能在悬浮培养中生长及随后成熟体胚能顺利再生植株的稳定胚性细胞系的数量有限.挪威云杉体胚未充分发育的根影响其移栽到土壤中的成活率.在建立的12个细胞系中只有一个在干燥保存后能从体胚再生正常植株.同时考察了影响挪威云杉形成成熟体胚的因素,如用PEG4
000(7.5%)及ABA[8mg·L-1(30.26μmol)-1]处理及ABA灭菌方式(高温高压灭菌或过滤灭菌)对成熟体胚形成的影响.总体来说,过滤灭菌的ABA增加了成熟体胚的数量.营养培养基中用淀粉部分取代蔗糖只导致2个细胞系中的一个增加了成熟体胚的数量.1995和1996年对人工授粉杂种落叶松合子胚发育与自然授粉(不套授粉袋)的相比较,发现人工授粉袋的使用延迟了合子胚的发育.我们的实验中成熟合子胚没有形成胚性细胞系,只有未成熟合子胚形成了胚性细胞系.1995年用落叶松未成熟合子胚建立的胚性细胞系没有形成体胚,而1996年建立的4个胚性细胞系得到了可以移栽到温室中的再生植株.1.5
a的连续继代培养以后,大多数的杂种落叶松和挪威云杉的胚性细胞系的再生能力都下降.导致这种现象可能有多种原因包括培养物的老化以及出现难以检测到的内生细菌.尽管一组实验从最初培养即用了抗生素,但没有收效.因此目前只得到少量的稳定胚性细胞系(<5%),长期继代后丧失再生能力及无法成功移栽到土壤都是植株再生的重要的限制因素,有待进一步研究克服这些困难. 相似文献
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针对目前昆虫细胞库日常维护工作中在数据和资料管理上的不足,使用Microsoft Visual Basic 2005软件开发工具与Microsoft SQL Server 2005数据库管理系统等工具构建了一套昆虫细胞库管理系统.本系统的主要任务是实现各种实验数据的集中管理,并为使用者提供实用的工具,方便这些数据的采集和处理.其主要功能有:细胞系基本信息的管理、照片管理、文献管理、核型分析、细胞冻存与复苏操作、生长曲线绘制等,具有功能全面、操作简便、直观,实用等特点.采用数据库管理系统大大提高了细胞库的管理水平,为昆虫细胞系库的长期有效管理奠定基础. 相似文献
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[目的]研究落叶松体细胞胚萌发能力,为落叶松在应用方面规模化繁殖提供理论依据。[方法]以落叶松体胚性细胞系S287的成熟体细胞胚为材料,区分了落叶松体细胞胚的不同子叶形态;进行树脂切片及显微观察后,对其萌发能力进行了统计;并利用外源施用激素的方法研究了影响落叶松体胚再生成苗的重要因子。[结果]成熟的落叶松体细胞胚主要以四种形态存在,分别是正常子叶胚(NC≥4),裂生子叶胚(2NC4),杯状胚(NC=1)以及畸形胚。纵切结构观察显示前三种体胚都能发育出完整的SAM和RAM,萌发率依次为17.2%,12.4%和5.7%,而畸形胚不具有完整的SAM和RAM,在萌发培养基上不能生根,并很快死亡。针对萌发率低的现状,进一步施用不同浓度的GA3和IAA发现,只有2 mg·L-1IAA对落叶松体胚生根具有明显的促进作用,其萌发率达到了56%,且在后期存活率仍能保持较高水平。[结论]IAA在落叶松体细胞胚萌发中发挥重要的调控作用。 相似文献
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玻璃化法超低温保存拟南芥幼苗(英文) 总被引：2，自引：0，他引：2
玻璃化法作为简单方便的超低温保存方法之一 ,目前已成功地应用于植物茎尖、胚性细胞、原生质体、悬浮细胞等多种单一组织或细胞培养体系 ,但尚未见对幼苗这种复合组织的保存报道 .本文研究了拟南芥 (Arabidopsisthaliana ,Landsbergerecta)幼苗的玻璃化保存程序并发现了一些有价值的研究现象 .幼苗来自萌发的种子 ,种子消毒后播种在MS培养基上 ,4℃处理 4 8h后转入 2 5℃ ,10h光周期 ,萌发不同天数为实验材料 .玻璃化程序包括 :1)预处理———用 2M甘油 +0 4M蔗糖在 2 0℃处理2 0min ;2 )脱水处理———用玻璃液PVS2 (30 %w/v蔗糖 +15%w/v乙二醇 +15%w/v二甲基亚砜 +含 0 4M蔗糖的MS) 0℃处理 50min ;3)冷冻融化———玻璃液及幼苗一起投入液氮 (LN2 )保存 ,2 0℃室温自然融化 ;4 )置换———用MS +1 2M蔗糖 2 0℃处理 30min ,成活力检查 ;幼苗转到MS培养基培养5天 ,观察再生长状况 .10天后转到培养土中 ,在生长箱中长到结实 .结果表明 :1)使用完整的程序 ,冻融后成活率最高 ,为 76 5% ;玻璃液处理是成功的关键 ,省去此处理成活率为 0 ;冻融是造成玻璃化保存成活率降低的主要因子 ;2 )由萌发 0～ 2天的种子形成的幼苗便使用该技术 ,冻存融化后成活率分别为 88% ,83 8%和 76 5% ,结实正常 ;3) 相似文献
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肉桂离体胚超低温保存研究 总被引：1，自引：0，他引：1
对不同含水量肉桂离体胚进行超低温(LN2)保存,采用不同冷冻方式、解冻方式及防冻剂预处理,并测定超低温保存前后的脱氢酶、电导率、α-淀粉酶生理生化指标。结果表明:超低温保存的技术关键是减少保存材料在脱水过程中所受的伤害,以及采用适宜的冷冻和解冻方式和添加适宜的防冻剂。防冻剂预处理可以适当提高保存含水量,增加含水量范围。肉桂离体胚没有添加防冻剂时最适宜保存含水量为30%~40%(w∶w),采用快冻快解处理。防冻剂预处理后的保存效果比没有防冻剂预处理的更佳,采用缓冻快解或快冻缓解处理较为适宜。 相似文献
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以落叶松未成熟合子胚诱导的16个胚性细胞系为材料,对继代培养的细胞系间及不同世代间染色体数目和体细胞胚胎发生率进行对比研究,结果表明:落叶松胚性细胞系随继代培养时间的增加,总体体细胞胚分化能力逐渐下降,平均体细胞胚分化率从继代培养第7次后的335.6个·g -1降低到第22次后的268.2个·g-1,细胞染色体数目变异率逐步增加,从5.4%上升到40.0%;不同细胞系间体细胞胚分化能力及稳定性差异明显,分化能力较高的细胞系染色体数目变异几率相应较小,在继代培养第25次后,细胞系a214染色体数目变异率为0%,体细胞胚分化率为416.1个·g -1。 相似文献
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Development of transgenic plants with tolerance to environmental stress is an important goal of plant biotechnology. Late-embryogenesis-abundant(LEA) proteins accumulate in seeds during late embryogenesis, where they protect cellular membranes and macromolecules against drought. In this work, we transferred the Tamarix androssowii LEA gene into hybrids of Populus davidiana×P. bolleana. We compared relative rates of height growth, chlorophyll fluorescence kinetic parameters, and leaf Na+ levels of six TaLEA-containing lines with non-transferred plants(NT), all grown under 0.8% NaCl stress condition. Survival percentages of transgenic lines were all higher than for NT controls after rehydration and the survival percentage of SL2 was five-fold higher than for NT controls. Seedling height increased 48.7% in SL2(from the onset of induced stress to the end of the growing season), 31% more than for the NT controls. Chlorophyll fluorescence kinetic parameters showed a marked increase in photosynthetic capacity in SL2 and SL5. Na+ levels in young leaves of transgenic lines were lower than in control NT leaves, but higher in yellow and withered leaves, indicating improved salt tolerance in transgenic lines. 相似文献
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