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1.
小鼠各器官表皮生长因子表达丰度的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
应用定量竞争RT-PCR技术检测表皮生长因子mRNA在小鼠(Mus musculus L.)体内各部位的表达丰度,结果显示颌下腺和腮腺是小鼠体内表达表皮生长因子mRNA的主要器官,肾脏、肺和肝脏中也有明显表达,心脏和骨骼肌中则未检测到表皮生长因子的表达.如以颌下腺中mEGFmRNA的平均相对表达丰度为1.00,则腮腺、肾脏、肺和肝脏中mEGFmRNA的平均相对表达丰度分别为0.86±0.14、0.62±0.18、0.14±0.03和0.09±0.02. 相似文献
2.
表皮生长因子受体由于在许多种肿瘤细胞表面过度表达而成为特异杀伤肿瘤细胞的理想靶位。正电性抗菌肽有其独特的膜毒性细胞毒机制。本研究以小鼠表皮生长因子为导向部分，以蜂毒溶血肽为毒性部分，构建特异杀伤肿瘤细胞的膜毒性免疫毒素---“MEGFMEL”嵌合蛋白。该嵌合蛋白以大肠杆菌BL21为表达宿主，以pET30a为表达载体，采用低温诱导表达和无破胞程序的冻融法进行纯化，最终浓度为63.45μg/mL、纯度为68%。体外活性检测表明MEGFMEL”嵌合蛋白对表面过度表达EGFR的鳞状上皮癌A431细胞表现出显著杀伤力，其LD50值为52.6μg/mL。本研究结果显示以正电性抗菌肽为毒性部分构建针对表皮生长因子受体的新型膜毒性IT是可行的。 相似文献
3.
表皮生长因子受体由于在许多种肿瘤细胞表面过度表达而成为特异杀伤肿瘤细胞的理想靶位;正电性抗菌肽有独特的膜毒性细胞毒机制.研究以小鼠(Mus musculus)表皮生长因子(mouse epidermal growth factor,MEOF)为导向部分,以蜂毒溶血肽(melittin,Mel)为毒性部分,构建特异杀伤肿瘤细胞的膜毒性免疫毒素MEGFMEL嵌合蛋白.该嵌合蛋白以大肠杆菌(Eschedchia coil)BL21为表达宿主,以pET30a为表达载体,采用低温诱导表达和无破胞程序的冻融法进行纯化,最终浓度为63.45μg/Ml、纯度为68%.体外活性检测表明,MEGFMEL嵌合蛋白对表面过度表达EGFR的肝癌A431细胞表现出显著杀伤力,其LD50为52.6μg/Ml.结果显示以正电性抗菌肽为毒性部分构建针对表皮生长因子受体的新型膜毒性免疫毒素(im-munotoxin,IT)是可行的. 相似文献
4.
从泌乳期小鼠乳腺组织中提取总RNA，经RT-PCR扩增得到了小鼠乳铁蛋白全长cDNA，并将其进行了克隆和大肠杆菌(Escherichia coli)表达。表达产物经SDS-PAGE和Westem blot分析结果表明，小鼠乳铁蛋白在大肠杆菌中得到了表达．但是表达量不高，这可能是由于重组表达产物对大肠杆菌有抑制效果。 相似文献
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人IGF-1基因重组杆状病毒表达载体的构建及在sf9细胞中的表达 总被引：2，自引：0，他引：2
以pcDNA3．1／IGF-1为模板，采用PCR方法对IGF-1基因进行扩增，EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ酶切回收含IGF-1基因的DNA片段，与pFastHTA连接，获得重组载体pFast／IGF-1；将其转化大肠杆菌（Escherichia coli）DH10Bac感受态细胞，经卡那霉素、四环素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBacmid-Fa-IGF-1，PCR鉴定得到单-／GF-1条带。将该病毒载体转染sf9细胞，进行病毒重组，Western-blot检测／GF-1表达，并用MTT法检测促内皮细胞生长活性。结果成功获得了重组病毒，Western-blot检测出现1条约13．0kD的带，MTT法检测IGF-1促细胞生长率为24．4％。 相似文献
6.
表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)是由53个氨基酸组成的单链多肽，在临床上具有重要的应用价值。由于天然EGF来源有限，用基因工程方法生产EGF蛋白已成为一个重要的替代途径。本研究用RT—PCR法从小鼠的肾组织中克隆了EGF基因，并构建到植物表达载体上，为EGF基因在高等植物细胞中的表达奠定基础。 相似文献
7.
从短小芽孢杆菌(Bacillus purnilus)BP51中克隆得到木聚糖酶基因xynA。将其构建在大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET21a上，转化Ecoli BL21，获得重组工程菌BLX5。经IPTG诱导，xynA基因的表达产物以胞内可溶性蛋白和包涵体形式存在。重组表达木聚糖酶的活力可达165．511U／mL培养物。重组表达的木聚糖酶最适温度为55℃，最适pH值为6．5，在碱性条件下具有良好的稳定性，降解产物以三糖、四糖和五糖为主。 相似文献
8.
通过PCR方法从重组质粒pGEM-ORF2扩增得到缺失N端疏水序列的基因片段dORF2(deleting ORF2)。将dORF2克隆至原核高效表达载体pGEX-4T-2，在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21细胞中成功地表达了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组蛋白GST-dORF2，表达量为22％。Westem-blot结果表明重组蛋白可被谷胱甘肽S-转移酶(GST)抗体识别。表达的重组蛋白为进一步研究PRRSV次要结构蛋白的结构和功能奠定了基础。 相似文献
9.
Viperin是一种由Ⅰ型和Ⅱ型干扰素诱导的宿主蛋白,在进化上高度保守。本研究以小鼠脑组织为原材料,通过RT-PCR扩增得到包括完整open reading frame（ORF）的1 155 bp的viperin基因序列,成功亚克隆并构建了原核表达载体pET-32a-vip,将其转化到大肠杆菌Rosetta中进行原核表达。结果表明：原核表达的重组蛋白viperin主要以包涵体的形式表达,用镍离子亲和层析法获得纯度较高的viperin蛋白,为探讨原核表达的viperin抗原特性,将纯化的viperin蛋白免疫4周龄昆明小鼠,制备得到抗viperin多克隆抗体。经Western blot和IFA检测,该抗体能与真核细胞自然表达的viperin反应,特异性良好且效价高,表明原核表达的viperin具有良好的抗原性。获得的多克隆抗体为进一步研究viperin的抗病毒生物学功能奠定了良好的基础。 相似文献
10.
猪圆环病毒2型BF株ORF2基因在大肠杆菌中的表达 总被引：6，自引：0，他引：6
采用PCR从构建的猪圆环病毒2型／(PCV2)ORF2重组质粒(pGEM-T-ORF2）中扩增出大小为593bp的ORb2基因，克隆到表达载体pET-32a，经异丙基硫代半乳糖苷诱导，成功表达了ORF2基因编码的结构蛋白。表达的重组蛋白为融合蛋白，分子量40kD，表达量20％左右。经Western blot检测，重组蛋白可被PCV2阳性血清识别。 相似文献