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1.
用胶体金免疫电镜技术检测新城疫病毒 总被引：5，自引：0，他引：5
应用柠檬酸三钠还原法制备了20 nm的胶体金颗粒标记NDV抗体,并且用直接电镜、免疫电镜和胶体金免疫电镜技术比较观察了新城疫病毒.证明胶体金免疫电镜技术作为检测NDV的检测方法具有简单、快速、准确和无污染等优点. 相似文献
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血清学检验是体外发生的抗原抗体反应,根据可见的现象判定反应结果。凝集试验用颗粒性抗原,有直接法、间接法等。沉淀试验用可溶性抗原,有环状沉淀、琼脂免疫扩散、免疫电泳等方法。标记抗体技术尤其是荧光抗体与酶标抗体技术发展迅速、应用广泛。荧光抗体标记有直接法及间接法,酶标记抗体技术有免疫酶组化法及ELISA两类。补体结合试验需有补体系统和溶血系统共同参与。中和试验有体内中和试验和 相似文献
3.
采用免疫胶体金标记电镜技术对水稻叶片中的Rubisco及其活化酶进行细胞器定位,结果表明Rubisco主要分布于叶绿体,Rubisco活化酶特异性分布于叶绿体和线粒体中,预示Rubisco活化酶可能具有除活化钝化态Rubisco以外的其他功能. 相似文献
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酶联免疫法(ELISA)是以酶标记抗体或抗原为主要试剂的一种标记免疫分析技术,其结合了抗原抗体反应的高度特异性和酶的高效催化作用,具有灵敏度高、特异性强、准确性好、检测成本低、迅速等优点,该方法近年来被广泛应用于食品安全中农药残留的检测。 相似文献
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免疫酶技术是近十年来才发展起来的免疫与生化相结合的新技术,其特点是灵敏度高,特异性强,经济快速。结果既可在光学显微镜与电子显微镜下进行抗原抗体的定位研究和超微结构的观察,又可在吸附特性均一的固相载体上用分光光度计进行比色测定 相似文献
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用酶联免疫吸附分析(ELISA)双抗体夹心法,研究杨树花叶病毒(PMV)的定量测定。用纯化的 PMV 免疫家兔,抗血清效价经环沉测定为1:1280。用硫酸铵沉淀 DEAE——纤维素(DE—32)离子交换层析法提纯 IgG 抗体。辣根过氧化物酶标记。采用戊二醛二步法标记抗体。在本实验条件下,抗体最适包被浓度为5—6微克/毫升,标记抗体最适浓度为4 相似文献
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1962年Feldorr等首次介绍了胶体金可作为一种在电镜下示踪的标志,1971年Faulk第一次将胶体金颗粒作为一种特异的标记物用于电镜研究中,1974年Romano等将胶体金标记在第二抗体上,由此产生了间接免疫金染色法。1978年Geoghegan发表了胶体金标记物在光学显微镜上的应用,1981年Danscher建立了用银显色液增强光学显微镜下金颗粒可见性的方法,其后发展成免疫金银染色法。直到1982年Giunchedi等首次 相似文献
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免疫细胞化学又称免疫组织化学,其主要原理是用标记的抗体(或抗原)对细胞或组织内的相应抗原(或抗体)进行定性、定位或定量检测,经过组织化学的呈色反应后,用显微镜观察。凡是能做抗原、半抗原的物质,如蛋白质、多肽、核酸、酶、激素、磷脂、多糖、受体及病原体等都可用相应的特异性抗体在组织、细胞内将其用免疫细胞化学手段检出和研究。 相似文献
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猪瘟PPA-ELISA和Dot-ELISA检测猪瘟抗体的比较及其应用 总被引：2，自引：0，他引：2
随着论断技术的快速发展,猪瘟的抗体检测方法也不断增多.血清中和试验、免疫琼脂扩散试验、对流免疫电泳、荧光抗体技术、聚合梅链式瓜等方法都已用于猪瘟的抗体检测,这些方法特异性强、敏感性高,但操作烦琐、费时,而且有些方法的技术和设备条件要求较高,在基层难以推广使用.尤其对于模化猪场大批样品的快速检测,更需要快速和操作简便的论断检测方法.酶免疫技术中的酶联免疫吸附试验(ELISA)被认为是目前检测猪瘟抗体较好的一种方法,该法简便、快速、敏感、特异快,并且试剂盒已商品化.因此我们选用了葡萄球菌A蛋白酶联免疫吸附试验(PPA-FLISA)和斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)技术在规模化猪场进行了抗体检测的比较试验和实际应用.现将试验情况报告如下. 相似文献
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己烯雌酚酶联免疫检测方法的建立 总被引：4，自引：0，他引：4
建立灵敏度高和特异性强的己烯雌酚残留检测分析方法。用人工合成的己烯雌酚免疫原多次免疫家兔,获取高效价抗体。纯化抗体经生物素标记,可同辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素特异结合。采用纯化的抗体包被96孔板,形成固相抗体。加入不同浓度的己烯雌酚标准品后,再加入生物素标记抗体,以酶标记亲和素作为探针,经酶底物显色反应可获得良好的ELISA标准曲线。该方法检测灵敏度为0.125 ng/mL,可定量检测范围为0.25~15.60 ng/mL。该方法操作简便,具有较强灵敏度和特异性,可满足实践中一般样品的残留检测。 相似文献
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利用双功能试剂SPDP在蛋白质分子中引入巯基,结合2-巯醇吡啶分析方法,定量测定引入活性基团的比例,通过两步标记法,将珊瑚藻R-藻红蛋白标记到羊抗兔抗体上,简化了传统标记过程.参照Dot-ELISA方法,以硝酸纤维素膜为固相载体,将该方法应用于烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)的检测.结果表明,R-PE标记的荧光检测的灵敏度为2-10,与酶免疫的Dot-ELISA相比,尽管检测灵敏度较低,但快捷、经济.并对如何进一步提高藻红蛋白介导的免疫荧光分析方法的灵敏度作了讨论. 相似文献
12.
应用电镜技术，结合粉虱传双生病毒的多抗血清和单克隆抗体采用免疫电镜（ISEM）和三抗体夹心酶联免疫吸附测定（TAS－ELISA），对云南烤烟、香料烟和白肋烟3种类型烟草上的曲叶病病原进行了检测鉴定，其病原为粉虱传双生病毒（WTG）；根据单克隆抗体分析表位抗原，可分为3组，其中香料烟曲叶病分离物中三者皆有，烤烟和白肋烟曲叶病分离物与香料烟曲叶病的一个分离物同属一组表位抗原类型；对3种烟草曲叶病的病原细胞进行了观察，在核内观察到典型的纤维环，细胞核和细胞质内都含大量的双生病毒颗粒，在细胞质中有病毒颗粒的聚集块，在胞间连丝中观察到病毒颗粒。 相似文献
13.
从呈花叶症状的芥菜病株上分离到毒源,经CP基因克隆、序列分析以及电镜观察鉴定为芜菁花叶病毒(turnip mosaic virus,TuMV).利用提纯的病毒免疫新西兰大白兔,获得TuMV多克隆抗体,其效价为1:40000,多抗仅对TuMV起特异性反应.以1:10000稀释度为TuMV多抗最适工作浓度,建立TuMV间接酶联免疫吸附测定法(ID-ELISA),该方法检测到提纯病毒的绝对量约1.765ng.说明本试验所建立的TuMV ID-ELISA检测方法可有效运用于TuMV的检测. 相似文献
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韦石泉 《沈阳农业大学学报》1987,(1)
应用植物病毒的抗血清和抗原特异性结合的作用,在电子显微镜下观察,称为植物病毒的免疫电镜技术。此法鉴定植物病毒是快速而相当准确的。由于免疫电镜技术肯试材,省时间和反应灵敏,这一检测技术在植物病毒学范畴内已渐为大家关注。本文除对免疫电子显微镜作一般阐述外,还对常用的叶浸蘸法,提纯材料的观察和免疫吸附电镜观察中某些改进技术,分别加以叙述。 相似文献
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球孢白僵菌HsbA蛋白的原核表达及免疫定位 总被引：1，自引：1，他引：0
【目的】明确虫生真菌球孢白僵菌（Beauveria bassiana）疏水表面结合蛋白HsbA（hydrophobic surface binding protein A）的致病过程。【方法】对HsbA进行克隆、亚克隆和原核表达,根据纯化后的蛋白制备多克隆抗体并进行抗原性分析,利用免疫电镜对HsbA蛋白进行定位观察。【结果】原核表达系统成功诱导了白僵菌的HsbA融合蛋白,制备多克隆抗体经Western杂交分析表明,该多抗能特异性识别目的蛋白。免疫电镜结果显示,HsbA蛋白在孢子和菌丝中呈随机分布。正常生长状态下,菌丝中的HsbA蛋白数量要明显多于孢子中被标记的数目,此外,孢子在侵染状态和正常生长状态下的HsbA蛋白数量也有显著差异,侵染状态下孢子的HsbA蛋白表达量更高,但菌丝在这2种状态下均呈现高表达。感染虫体中HsbA蛋白被标记的部位集中在体壁。【结论】原核表达实现了HsbA蛋白的高效表达,且制备的多克隆抗体具有较好的免疫原性。此外,免疫定位表明HsbA蛋白与菌丝的生长有关,并在白僵菌致病过程中参与了吸附作用,其作用部位位于昆虫体壁。 相似文献
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用胶体金免疫电镜技术，对脱落酸（ABA）在葡萄种子细胞超微结构水平上的分市进行了研究。按葡萄种子细胞液泡中是否含有电子密度大的染色物质，可将其分为含酚和无酚2个主要类型。在含酚细胞中电子密度大的染色物质呈多种状态存在，先是均匀而稀疏地分布在液池中，然后逐渐凝聚成块状，最后浓缩成一薄层并均匀分布在液泡膜内侧。无酚细胞中金颗粒主要标记在细胞核和细胞质，特别是细胞核有大量金颗粒标记，细胞壁有少量金颗粒标记，液泡中没有发现金颗粒标记。和无酷细胞相似，在含酚细胞中金颗粒主要标记在细胞核和细胞质，特别是细胞核金颗粒密度很大，细胞壁有极少金颗粒标记。引人注目的是液泡中聚集态的染色物质上也发现金颗粒标记，但稀疏而均匀分布的染色物质上几乎找不到金颗粒标记，当染色物质最终浓缩成薄层状态时则发现有大量的金颗粒标记。无论用免疫前兑血清染色的对照切片还是材料，不被EDC固定的对照切片中都很难找到金颗粒标记，说明该ABA免疫胶体金电镜定位结果是特异、可靠的。 相似文献
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从小西葫芦黄化花叶病毒(ZYMV)免疫的母鸡蛋卵黄和兔抗血清中分别提取免疫球蛋白IgY和IgG,用多种血清学方法进行检测。结果表明,免疫鸡和兔25d后,鸡蛋卵黄IgY和兔抗血清的效价分别达到1/64和1/512。在琼脂扩散试验中,当抗体稀释28倍时,与抗原反应无明显沉淀线。在胶乳凝集试验中,抗体稀释210倍时,与抗原反应无明显凝集物。ELISA法以辣根过氧化酶标记抗体IgY和IgG,用双抗夹心法成功地检测出了ZYMV,当抗体稀释106倍时,与抗原反应仍呈阳性。免疫电镜方法检测ZYMV,较一般血清学方法可多捕捉50倍的病毒颗粒。 相似文献
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本室构建的温度诱导高效表达猪生长激素(pGH)cDNA基因的工程;pPT15/N4830的表达效率为30％左右。相差显微镜下可见表达细菌内有包涵体(inclusion bodies, IBs)存在。高速离心(12000g,10min)pGH主要在沉淀内。由于细菌在某些条件下也能产生其他IB颗料,为了证实我们见到的IBs是由pGH的产生而形成的,以及pGH在大肠杆菌内的分布情况,我们用免疫胶体金技术对诱导后的大肠杆菌进行了观察。所用的一抗为本室制备的兔抗猪生长激素多克隆抗体(滴度为32000),使用时稀释100倍;所用的二抗是10nm金颗料标记的SPA(军事医学科学院陈德惠教授惠赠),使用时稀释20倍。其他操作按常规进行。结果表明:1.大肠杆菌内产生的pGH以IBs的形式存在,IBs的大小不一,平均每个细菌内有3～4个IBs。2.IBs以外没有观察到pGH的存在,这与破细胞离心后上清的免疫印渍(Western blotting)结果相吻合。3.与文献报道的免疫酶标技术相比,用免疫胶体金技术观察的结果更加清晰。方法简便,容易掌握。 相似文献
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狂犬病Flury HEP株的复制及其某些生物学性质的观察 总被引：2，自引：0，他引：2
狂犬病ＦｌｕｒｙＨＥＰ株弱毒在ＢＨＫ（２１）细胞上连续传代，培养物经中和试验、间接荧光抗体染色、电镜观察、动物试验、病毒增殖和抗体消长曲线的测定，证明该弱毒株可在ＢＨＫ（２１）细胞上良好地复制。传至二代以后毒价可达到１０（－５）／０．０３ｍｌ。该毒经兔、犬、山羊、牛试验显示了其安全性。免疫后７天即可见到抗体阳转。免疫犬后，血清中和抗体在二年半时间内维持在一个较高的水平。 相似文献