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1.
柑橘主要病毒病的RT-PCR法鉴定 总被引：2，自引：1，他引：1
为建立主要柑橘病毒病准确、快速的分子检测体系，在表现柑橘衰退病（CTV）、柑橘裂皮病（CEV）和柑橘碎叶病（CTLV）典型症状的病树上采叶样提取总RNA进行反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）分析．病毒鉴定用的特异引物为CTV3对、CEV2对和CTLV1对．通过不同退火温度的测试，发现所有参试引物均能在56℃退火时扩增出相应的病毒特异带，从而在保证鉴定准确性的前提下，极大地简化了鉴定程序．用建立的RT-PCR体系对云南、重庆、湖南等地有衰退病、裂皮病和碎叶病症状的样品进行检测，结果表明该体系均能对相应病毒进行准确检测． 相似文献
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为研究马铃薯Y病毒的检测方法,参考GenBank中马铃薯Y病毒的全基因序列,应用Primer 6.0引物软件设计并合成了一对特异性引物PVYF、PVYR,利用RT-PCR方法对PVY病毒黑龙江分离株CP基因进行特异性扩增,对扩增片段进行序列测定并进行序列比对。结果表明:引物PVYF、PVYR可以扩增出包含PVY病毒CP基因全长的cDNA特异性片段,序列分析结果表明PVY病毒黑龙江分离株CP基因与GenBank上的40个不同PVY病毒分离株的CP基因氨基酸序列同源性为92.1%~97.4%,说明PVY病毒CP基因保守性较高,可以用作制备PVY病毒血清型检测方法的抗体基因。 相似文献
3.
柑桔裂皮病(citrus Exocortis Viroid—CEV)由类病毒引起,以枳、枳橙和柠檬作砧木的病.四川有172个县种植柑桔,总面积250万亩,投产6000万株,年总产突破100万t,柑桔病毒类病害严重威胁柑桔业的发展,特别是柑桔裂皮病危害性尚未引起人们关注. 相似文献
4.
１９８９－１９９６年对浙江黄岩本地早及其变株新本１号感染柑桔病毒类病害的情况进行了研究。结果表明，这两个优良品种已发现感染了衰退病，碎叶病，脉突病和裂皮病。这些病害一般为复合感染，裂皮病为隐病感染。衰退病和碎叶病发生相当普遍，脉突病发生率也比较高，裂皮病只在部分本地早植株上发生。 相似文献
5.
从采自贵州感染了啤酒花矮化类病毒（Hop stunt viroid, HSVd）的柑桔植株中抽提总核酸,通过一对鉴别引物,经RT-PCR扩增初步筛选出柑桔木质陷孔病类病毒（Citrus cachexia viroid, CCaVd）。扩增该类病毒的全长核苷酸片段,通过克隆和测序,结果发现,该片段全长298bp,与GenBank中报道的木质陷孔病类病毒分离物同源性达到96％以上。这是中国发生的木质陷孔病类病毒的分子生物学特征的首次报道。 相似文献
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马铃薯X病毒黑龙江分离物外壳蛋白基因克隆与序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)是重要的马铃薯病毒之一,几乎分布于全国所有马铃薯种植区域,严重影响马铃薯的产量和品质。对其建立RT-PCR分子检测体系以及对其外壳蛋白(CP)基因进行序列分析尤为重要。根据已报道的PVX的核苷酸序列设计合成1对引物,以带毒植株总RNA为模板,应用RT-PCR方法,克隆了PVX黑龙江分离物(P2)全长CP基因序列。序列分析表明:P2CP基因全长711 bp,编码237个氨基酸残基,与GenBank中17个不同分离物的CP核苷酸序列同源性为75.5%~96.3%,氨基酸序列同源性为89.4%~99.2%。依据PVXCP氨基酸序列建立系统进化树,将PVX不同分离物划分为两大类群,P2与PVX中国分离物亲缘关系较近,同属于类型Ⅱ,表现一定的地域相关性。同时,应用该RT-PCR分子检测体系进行马铃薯样品检测。 相似文献
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鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立与初步应用 总被引：2，自引：0，他引：2
根据GenBank中Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-Ⅰ)的基因序列设计、合成引物,以山东、江苏、广东等地分离株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到预期大小的目的片段.将山东分离株扩增的目的片段克隆到pGM-T载体,酶切鉴定得到阳性重组质粒.对重组质粒进行序列测定,与参考毒株R85952的序列比较发现,山东分离株与参考序列的同源性为974%.试验结果表明,所建立的RT-PCR方法最低模板检出量为100 pg,且该方法只能特异地检测出DHV,不能检出鸭瘟病毒、小鹅瘟病毒、鹅副粘病毒和番鸭细小病毒等.自然感染病料的检测分离结果表明,该方法既可用于DHV-Ⅰ分离株的快速鉴定,也可用于临床感染病例的检测与诊断. 相似文献
8.
同步检测为害非洲菊3种病毒的多重RT-PCR方法研究 总被引：1，自引：0，他引：1
以接种番茄斑萎病毒(TSWV)的烟草和侵染烟草脆裂病毒(TRV)及烟草花叶病毒(TMV)的非洲菊为试验材料,建立了同步检测非洲菊上述3种病毒的多重RT-PCR方法.结果表明,建立的多重RT-PCR方法可一次性扩增出 3 种病毒的DNA条带,可以从RNA含量1 mg的带毒叶片中检测到混合病毒;同时对单一病毒RT-PCR的灵敏度检测表明:最低可以从RNA含量分别为1 mg、10μg和100 ng的带毒材料中检测到TSWV、TRV和TMV. 相似文献
9.
[目的]建立具有高敏感性能区分猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株和高致病株的双重RT-PCR检测方法.[方法]首先从退火温度与引物浓度先对猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株、高致病株的单项RT-PCR方法的条件分别进行筛选与优化,然后对其双重RT-PCR方法的条件进行筛选与优化,并进行特异性与敏感性检测,最后初步应用于临床样品检测.[结果]建立的猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株和高致病株双重RT-PCR检测方法不能检出猪流行性腹泻病毒和猪瘟病毒等当前流行较广的其他猪源RNA病毒,对猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株、高致病株的检测灵敏度分别是100、200copies/μL.此方法对2020-2021年8个猪场的220份血清样品的检测结果显示,猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株、高致病株的个体阳性率分别为7.73％和43.64％,与单项RT-PCR方法检测结果完全一致.[结论]建立了一种高敏感性的猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株和高致病株双重RT-PCR检测方法. 相似文献
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在本次试验中,从清远养鸡场采集疑似感染H9亚型禽流感病毒鸡群的口腔及泄殖腔拭子进行病毒分离,使用血凝及血凝抑制试验进行初步鉴定,提取病毒RNA,使用针对H9亚型禽流感病毒HA基因的特异性鉴定引物对该分离株进行RT-PCR检测,回收特异性目的片段后进行测序分析,结果显示,该毒株属于H9亚型禽流感病毒. 相似文献
11.
WANG Xue-feng ZHOU Chang-yong TANG Ke-zhi LAN Jian-qiang ZHOU Yan LI Zhon-gan 《中国农业科学(英文版)》2008,7(9):1097-1103
Citrus viroids are the small but economically important RNA pathogens. For investigating their occurrence and distribution in China, 65 viroid samples collected from 8 major citrus cultivated regions were evaluated using one-step or multiplex onestep RT-PCR and biological indexing for specifically detection of Citrus exocortis viroid （CEVd）, Citrus bent leaf viroid （CBLVd）, Hop stunt viroid （HSVd）, Citrus viroid-Ⅲ （CVd-Ⅲ） and Citrus viroid-Ⅳ （CVd-Ⅳ）. The results showed that there were at least 4 kinds of citrus viroids （CEVd, CBLVd, HSVd, and CVd-Ⅲ） on citrus trees in China. Most of the infected citrus plants harbored more than one viroid species, and two plants were infected with up to 4 citrus viroids. Sweet orange was more frequently infected by viroids than other citrus varieties. It is the preliminary report on the species and distribution of citrus viroids in China. 相似文献
12.
【目的】通过嫁接木本指示植物进行柑橘类病毒鉴定需要合适的季节和较长的显症时间,并且柑橘木本指示植物的遗传转化和基因功能验证体系尚不成熟,研究其与寄主间的互作较为困难。因此,寻找合适的草本鉴定和实验寄主对于更好地进行柑橘类病毒的鉴定及研究其与寄主间的互作具有重要意义。论文旨在明确中国报道的5种主要柑橘类病毒,包括柑橘裂皮类病毒（Citrus exocortis viroid,CEVd）、柑橘曲叶类病毒（Citrus bent leaf viroid,CBLVd）、啤酒花矮化类病毒（Hop stunt viroid, HSVd）、柑橘矮化类病毒（Citrus dwarfing viroid,CDVd）和柑橘树皮裂纹类病毒（Citrus bark cracking viroid,CBCVd）对番茄（Solanum lycopersicum）的侵染能力,进而明确其可否作为5种类病毒的鉴别寄主或实验寄主。【方法】将5种柑橘类病毒的野生型分子变种（分别为CEVd.188,长370 nt;CBLVd.032,长328 nt;HSVd.cit106,长296 nt;CVd-III.072,长295 nt;CVd IV Ca,长285 nt）二聚体cDNA克隆质粒（克隆于pGEM-T载体）,采用限制性内切酶Nde I在37℃条件下进行酶切线性化处理,经琼脂糖凝胶电泳分析鉴定酶切成功后,将该含有目标片段的线性化重组质粒采用T7 RNA多聚酶在37℃条件下进行体外转录,获得类病毒RNA二聚体溶解于1% K2HPO4接种缓冲液中,机械摩擦接种Alisa Craig和 Rutgers番茄（S. lycopersicum var. Alisa Craig和 var. Rutgers）叶片,置于24℃温室条件下培养。接种60 d后,采集新生叶片釆用CTAB法提取番茄叶片总RNA,通过RT-PCR对接种的类病毒进行检测。将PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分析后,切胶回收目标片段,与pMD18-T载体连接,热击转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。经PCR鉴定后挑取阳性克隆进行序列测定,采用DNAMAN version 6.0软件对获得的cDNA序列进行相似性分析。【结果】线性化质粒体外转录后经琼脂糖凝胶电泳分析显示,每个质粒转录产物均可检测到目标大小的RNA条带。接种后,RT-PCR检测显示5种类病毒侵染率表现出显著差异,CEVd、CDVd和HSVd可以侵染大部分接种植株（侵染率分别为7/8、5/8和7/8）。从接种成功的植株样品中对所接种类病毒后代的cDNA克隆和序列测定显示,随机测定的5-10个克隆中均能找到与接种类病毒cDNA一致的核苷酸序列,后代序列与接种序列间的相似性在99.7%以上;后代分子变异分析显示变异位点小于10个,变异率小于0.3%;而 CBLVd和CBCVd不能侵染或侵染率很低（0或1/8）。【结论】CEVd、CDVd和HSVd能够侵染Rutgers和Alisa Craig番茄,2种番茄均可以作为3种类病毒的草本鉴定和实验寄主;而 CBLVd和CBCVd 难于侵染Rutgers和Alisa Craig番茄。在接种的Alisa Craig番茄品种上,各类病毒接种植株均比接种缓冲液对照表现显著的矮化效果;在Rutgers植株上,仅有接种了CEVd的植株表现较对照的矮化效果。 相似文献
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In order to understand molecular characterization of Citrus tatter leaf virus(CTLV) isolated from China,full-length cDNAs of CTLV-MTH and CTLV-XHC from Citrus reticulata and Citrus sinensis were cloned and sequenced based on whole-genome amplification by RT-PCR.The complete nucleotide sequences of CTLV-MTH and CTLV-XHC were determined to be 6497 nucleotides in length and shared 79.9-91.0%and 78.8-98.0%nucleotide sequence identity,respectively,with other Apple stem grooving virus(ASGV) or CTLV strains available in GenBank.Unexpectedly,CTLV-MTH showed the highest nucleotide sequence identity(91%) with an apple isolate of ASGV,followed by 86.5%with ASGV-HH and 85.7%with ASGV-CHN.Furthermore,CTLV-MTH and three ASGV strains were grouped to a separate cluster in the phylogenetic tree,suggesting it has a closer relationship to ASGV than to CTLV.Therefore,it can be concluded roughly that CTLV may be not a distinct strains of ASGV.We proposed that Citrus tatter leaf virus should be renamed Apple stem grooving virus. 相似文献
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以酸柚(Citrus grandis)根系为材料,利用热硼酸法提取了根系总RNA,并逆转录成cDNA,利用PCR和RACE技术相继得到柠檬酸合酶基因(CS)和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(PEPC)的保守区、3'端和5'端.酸柚根系CS基因全长1760bp,开放读码框有1413 bp,编码472个氨基酸,氨基酸序列相对分子质量为52.487 ku,等电点为6.9,亲水指数为-0.199;5'端非编码区为67 bp,3'端非编码区为277 bp;推导的氨基酸经序列比对,发现与其他物种具有很高的同源性(85.4%-99.6%).酸柚根系PEPC基因全长3307 bp,开放读码框有2604 bp,编码868个氨基酸,氨基酸序列相对分子质量为99.569ku,等电点为6.68,亲水指数为-0.398;5'端非编码区为431 bp,3'端非编码区为269 bp,推导的氨基酸经序列比对,发现与其他物种具有很高的同源性(85.8%-95.7%).初步确定克隆到的为酸柚根系CS和PEPC基因,登陆Genbank,登陆号分别为HQ537481和HQ537482. 相似文献
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