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1.
《西南农业学报》2021,(8)
【目的】农药降解酶通常比农药降解菌更能耐受异常环境,具有更宽广的降解谱。为获得高产率和高质量的农药降解酶,在实验室前期获得阴沟肠杆菌WJ-1和证实具有农药降解酶基因pytZ的基础上,本研究拟将阴沟肠杆菌WJ-1农药降解酶基因pytZ重组表达于受体菌Escherichia coli BL21。并对重组菌农药降解酶的生理生化特性进行深入研究。【方法】通过PCR技术扩增获得阴沟肠杆菌WJ-1农药降解酶基因pytZ,构建pMD19重组质粒,再与pET-24a(K+)表达载体进行连接,构建基因工程菌E.coli BL21/pET-24a(K+)-pytZ。将重组菌进行摇瓶培养。使用不同温度、pH值、IPTG浓度探讨重组酶酶促反应动力学参数。【结果】获取得到基因工程菌E.coli BL21/pET-24a(K+)-pytZ。30℃和IPTG诱导浓度为0.8 mmol/L时,摇瓶培养48 h后可以获得最高的农药降解酶产量,酶活力达到15.3 U/mL。重组菌农药降解酶的酶促反应最优温度为35℃,25～45℃热稳定良好;重组菌农药降解酶的酶促反应最优pH值为8.0,pH 7.0～9.0酸碱稳定良好;重组菌农药降解酶对底物甲氰菊酯的反应动力学参数,米氏常数K_m为0.076 mmol/L,最大反应速率V_(max)为3.023 mmol/(L·min)。【结论】利用基因工程菌Escherichia coli BL21/pET-24a(K+)-pytZ生产得到更大量的甲氰菊酯降解酶,纯度更高,具有更好的温度和pH值适应性,反应动力学参数显示其降解效率更高。 相似文献
2.
【目的】研究苦马豆素(Swainsonine,SW)降解酶的酶促降解特性。【方法】应用渗透休克原理,提取SW降解菌株YLZZ-1粗酶液,进行酶促降解研究,并考察SW降解酶的酶活力、动力学参数及稳定性。【结果】YLZZ-1菌株的胞内粗酶液对SW的降解率高达91.73%。SW降解酶对SW酶促降解的最适pH为8.0,最适温度为30℃,在pH6.0~8.5、温度25~45℃具有较好的降解活性,其米氏常数Km为0.073 98 mmol/L,最大反应速度Vmax为0.111 5μmol/(mg.min)。SW降解酶有较好的pH稳定性,但对热不稳定。【结论】菌株YLZZ-1的SW降解酶属于胞内诱导酶,具有良好的降解能力。 相似文献
3.
恶臭假单胞菌XP12对拟除虫菊酯类农药的酶促降解特性及其应用研究 总被引：2，自引：0，他引：2
试验选用使用量较大、毒性较强、不易自然降解的高效氯氰菊酯、溴氰菊酯和高效氯氟氰菊酯作为参试农药,对一株能高效降解拟除虫菊酯类农药的恶臭假单胞菌XP12进行深入的研究,以期了解该菌株在拟除虫菊酯类农药的生物降解体系中酶的分布特征、酶促降解的动力学特征.结果表明:对拟除虫菊酯类农药起催化作用的酶属于组成型胞内酶,反应pH值为6.5～8.0时,降解酶对高效氯氰菊酯、溴氰菊酯和高效氯氟氰菊酯的降解率都在70%左右,最适反应pH值为7.5:反应温度在25～40℃时,降解率在70%以上,最适反应温度为30℃.在最适反应pH和温度条件下,降解酶粗酶液对高效氯氰菊酯、溴氰菊酯和高效氯氟氰菊酯的Km分别为42,78、50.64和77.90 nmol/mL,Vmax分别为12.05、10.31和16.39 nmol/min.粗酶液在叶类蔬菜上拟除虫菊酯类农药的降解也有明显效果,对高效氯氰菊酯、溴氰菊酯和高效氯氟氰菊酯的降解率分别为93.3%、85.2%、83.5%. 相似文献
4.
[目的]对氟磺胺草醚降解菌提取的降解酶进行定位,探讨其最适的酶促反应条件。[方法]通过采用紫外分光光度法测定酶活力来对氟磺胺草醚降解菌株F12提取的降解酶进行定位,并研究其酶学性质。[结果]氟磺胺草醚降解菌株F12降解酶属于胞外酶,最适的酶促反应时间为30 min,最佳的酶浓度为1.0 ml,最适pH为7.5,最适反应温度为35℃,最适添加药浓度为150 mg/L。[结论]试验结果为规模化生产氟磺胺草醚降解酶制剂及治理污染土壤提供了理论依据。 相似文献
5.
从多菌灵生产废水处理系统中,通过富集和选择性培养,分离得到1株能高效降解多菌灵的细菌,并将其命名为djl-10。根据菌株的菌落形态,生理生化特性及基于16S rDNA序列的系统发育分析等,初步将菌株鉴定为分枝杆菌属。该菌株能利用多菌灵作为唯一碳源、氮源进行生长并基本彻底矿化多菌灵。2-氨基苯并咪唑和2-羟基苯并咪唑为菌株降解多菌灵的中间代谢产物。菌株能够在较宽温度和pH值范围内有效降解多菌灵,其降解多菌灵的最适温度和pH值分别为37℃、7.0。装液量试验结果表明,菌株djl-10对多菌灵的降解明显依赖氧气。Ca~(2+)、Mg~(2+)、Fe~(3+)等离子能够明显促进菌株djl-10对多菌灵的降解。此外,本研究克隆和表达菌株djl-10的多菌灵水解酶基因mhe。酶促反应结果表明,纯化的重组酶Mhe对多菌灵具有明显的催化活性。 相似文献
6.
对从新鲜醋醅中分离到的一株柠檬苦素降解菌C6(Raoultella ornithinolytica)在酸性条件下的柠檬苦素降解特性进行了研究,并对相关酶系进行了分离纯化。分别从菌龄、接种量、培养时间、柠檬苦素浓度4个因素考察了该菌株对柠檬苦素的降解情况,结合响应面优化了该菌株的降解条件,并在最适条件下对其降解速率进行评价。进一步通过硫酸铵沉淀、Sephadex G-100凝胶过滤层析及DEAE-纤维素柱层析对菌株C6发酵上清液中的柠檬苦素降解酶逐步纯化。结果表明,菌龄10 h、底物柠檬苦素质量浓度为4 mg/L、接种量1%的条件下,作用时间为12 h时菌株C6对柠檬苦素的降解速率可达到91.28%±0.17%,其中作用时间9 h以后降解速率显著增加,经纯化后获得相对分子量约为27 ku的电泳纯柠檬苦素降解酶,纯化倍数为9.44。结果可为该菌株及其酶的进一步开发利用提供理论依据。 相似文献
7.
Roseomonas JS018有机磷农药降解酶的纯化 总被引：3，自引：1，他引：3
本试验对能高效降解几种有机磷农药菌株JS018的降解酶进行分离和纯化.经分析该降解酶主要位于细胞间质,最适盐析硫酸铵饱和度为60%-70%,粗酶液经硫酸铵沉淀、Sephadex G-100凝胶过滤和DEAE-52柱层析得到较高纯度的酶液.通过SDS-PAGE电泳测定该酶相对分子质量约为37 ku,N末端16个氨基酸残基测序结果为:GAPFQNDVPPACYRFR. 相似文献
8.
【目的】研究羧甲基纤维素钠（CMC-Na）和纤维素粉对纤维素降解细菌筛选结果的影响,为废弃食用菌菌渣的综合利用提供参考依据。【方法】分别以CMC-Na和纤维素粉为唯一碳源,采用刚果红染色法从废弃菌渣中筛选出具有纤维素降解性能的细菌,利用形态学和分子生物学对其进行鉴定,通过酶活力测定和滤纸崩解试验对各菌株的纤维素降解特性进行对比分析。【结果】从CMC-Na固体培养基分离纯化获得的34株细菌中有7株具有较好的纤维素降解性能,经鉴定主要是芽孢杆菌（Bacillus sp.）、枯草芽孢杆菌（B. subtilis）和解淀粉芽孢杆菌（B. amyloliquefaciens）,而从纤维素粉固体培养基分离纯化获得的36株细菌中有7株具有较好的纤维素降解性能,经鉴定主要是高山芽孢杆菌（B. altitudinis）、甲基营养型芽胞杆菌（B. methylotrophicus）、解淀粉芽孢杆菌、解淀粉芽胞杆菌植物亚种（B. amyloliquefaciens subsp.plantarum）、沼泽芽孢杆菌（B. vallismortis）、贝莱斯芽孢杆菌（B. velezensis）和芽孢杆菌。通过酶活力测定试验和滤纸条崩解试验发现,g31菌株在7 d内能将滤纸崩解成糊状,该菌株具有最高的滤纸酶（FPase）和内切葡聚糖酶（CMCase）活力,分别为33.14和394.41 U/mL,而C23菌株具有较高的β-葡萄糖苷酶（β-Gase）活力,为118.12 U/mL,g29菌株具有较高的外切葡聚糖酶（Cex）活力,为1.22 U/mL。【结论】以纤维素粉为碳源分离筛选得到的纤维素降解细菌种类更丰富,具有更好的滤纸崩解效果和更高的酶活性能,可为纤维素降解提供优质的菌种资源。 相似文献
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JS018菌有机磷农药降解酶的纯化 总被引：1，自引：0，他引：1
实验对一株能高效降解几种有机磷农药菌株JS018的降解酶进行分离和纯化。经分析该降解酶主要位于细胞间质,最适盐析硫酸铵饱和度为60%~70%,粗酶液经硫酸铵沉淀、Sephadex G-100凝胶过滤和DEAE-52柱层析得到较高纯度的酶液。通过PAGE和SDS-PAGE电泳测定该酶分子量约为37KDa,N末端16个氨基酸残基测序的结果为:GAPFQNDVPPACYRFR。 相似文献
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功夫菊酯降解菌GF-3的筛选鉴定及其降解特性研究 总被引：6，自引：1，他引：6
菊酯类农药广泛用于农业害虫的防治,但对生态环境与食品的污染也是十分严重的,微生物降解菊酯类农药是消除其污染的主要途径.从农药厂废水排放口附近的活性污泥中分离到一株能利用功夫菊酯为惟一碳源生长的细菌.命名为GF-3.根据其生理生化特征和16S rDNA序列相似性分析,将该菌株鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.).采用室内培养与液相色谱测定方法,研究了GF-3对功夫菊酯的降解特性.结果表明,GF-3能有效地降解浓度为50～600 mg·L-1的功夫菊酯,在24 h内对100 mg·L-1.功夫菊酯的降解率达到98.4%.降解功夫菊酯的适宜温度为30℃左右,适宜pH为7～10.酶的定域试验表明,降解功夫菊酯的酶属于胞外酶.GF-3除了降解功夫菊酯外,还能降解甲氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、高效氯氰菊酯等.GF-3中有2个质粒,但质粒消除试验表明降解功夫菊酯的基因不在质粒上,而是在其染色体DNA上. 相似文献
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[目的]筛选蚕沙纤维素降解菌株,为蚕沙无害化快速腐熟处理提供优质菌种.[方法]以蚕沙为材料,利用CMC-Na培养基分离蚕沙纤维素降解菌,通过形态学、生化特征和16S rDNA序列测定方法等对分离获得的纤维素降解菌进行分类学鉴定,并研究碳源、氮源、pH、培养时间和培养温度对分离菌株产酶活力的影响.[结果]从蚕沙中筛选出1株高温型细菌,命名为HB-2菌株.根据菌体大小、鞭毛着生位置及数量、16S rDNA核酸序列分析,并结合生理生化特性,HB-2菌株鉴定为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus).HB-2菌株最佳产酶条件为复合碳源(蚕沙+微晶纤维素+米糠+麸皮)、复合氮源(蛋白胨+酵母膏),产纤维素酶最适反应pH 6.5,最适温度35℃.[结论]HB-2菌株CMCase活性较敏感且产酶量大,具有制成菌剂应用于蚕沙无害化快速腐熟的潜力. 相似文献
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[目的]筛选耐热性纤维素降解细菌菌株,进行鉴定并研究其酶学特性。[方法]采用刚果红法从腐烂秸秆与腐殖质土壤样品中分离纤维素降解菌,通过形态学观察与16S rRNA序列分析鉴定其种属,并对该纤维素酶进行酶学性质研究。[结果]筛选到1株纤维素酶活性高的菌株NP29,经鉴定该菌株为芽孢杆菌属(Bacillus)微生物。对该菌所产纤维素酶酶学特性的研究表明,该酶反应的最适pH为4.5,最佳反应温度为65℃,具有良好的pH稳定性和热稳定性。在37℃、pH7.0的条件下,该菌株在发酵36 h后纤维素酶活性可达1.8 U/ml,且产酶量与细菌生长密切相关。[结论] 相似文献
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实验对一株能高效降解几种有机磷农药菌株JSO18的降解酶进行分离和纯化。经分析该降解酶主要位于细胞间质，最适盐析硫酸铵饱和度为60％～70％，粗酶液经硫酸铵沉淀、Sephade。G-100凝胶过滤和DEAE-52柱层析得到较高纯度的酶液。通过PAGE和SDS—PAGE电泳测定该酶分子量约为37KDa．N末端16个氨基酸残基测序的结果为：GAPFQNDVPPACYRFR。 相似文献
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通过优化降解菌——阴沟肠杆菌培养基配方和发酵条件,开展阴沟肠杆菌对在土壤中有机磷乐果农药降解的试验研究。结果表明:按常规使用浓度使用乐果后,其在土壤中的降解半衰期为2.72 d,14 d后的乐果残留量为28.574 mg/kg。在添加了等量的阴沟肠杆菌发酵液后,土壤中的降解半衰期提前到2.47 d,14 d后的乐果残留量为12.932 mg/kg,说明阴沟肠杆菌在土壤中对有机磷农药乐果有较好的降解作用。 相似文献
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【目的】研究巴尔喀什蘑菇子实体的生物学特性、漆酶理化性质及对酚类化合物的降解能力,为野生巴尔喀什蘑菇的栽培驯化以及栽培料高效利用提供理论依据。【方法】利用纤维素CM-cellulose阳离子交换和Q-Sepharose阴离子交换以及Superdex 75凝胶层析过滤纯化技术,纯化分析该漆酶的降解代谢底物与抗金属离子抑制能力,确定该漆酶活性最适温度与pH值。【结果】获得本漆酶为65 kDa的单亚基蛋白,总纯化倍数为354.58,比活力17.02 U/mg,该酶N端10个氨基酸的序列为SGGPEQNTTA,经过NBCI-BLAST后发现该漆酶与糙皮侧耳、杂色云芝等的漆酶具有同源性。本漆酶底物差异性较大,从强到弱主要为ABTS>二甲氧基酚>甲苯胺。最适pH值为2.2,属中低温活性;最适反应温度为40℃,为中低温活性漆酶。Cu2+对该漆酶催化ABTS有轻微促进作用,Hg2+对其催化ABTS有很强的抑制作用。【结论】巴尔喀什蘑菇子实体漆酶为65 kDa的单亚基蛋白,是一种中低温活性耐酸性漆酶,底物特异性为ABTS>二甲氧基酚>甲... 相似文献
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为了筛选得到一株产胞外邻苯二酚-2,3-双加氧酶的芘降解菌株,以新疆克拉玛依石油污染土壤为样品源,采用芘平板升华法,筛选具有多环芳烃降解能力的菌株。利用显色反应及酶促反应对菌株所产胞外邻苯二酚-2,3-双加氧酶进行定性定量试验并对其进行形态学观察、BIOLOG GENⅢ微孔板鉴定及16S rRNA序列分析。通过单因子影响试验和正交试验对菌株的生长特性及最佳降解条件进行了初步探讨。结果表明:芘降解菌株W39能分泌胞外邻苯二酚-2,3-双加氧酶,且经芘诱导后,产酶能力提高了3倍;经鉴定,菌株W39为阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae);最适培养条件:35℃,p H 7.0,芘浓度50 mg/L。可见,邻苯二酚-2,3-双加氧酶是降解芘的关键酶之一,可对其进行进一步研究。 相似文献
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[研究目的]对有机磷农药降解菌阴沟肠杆菌的生物学特性进行研究,为研究其降解特性机理及应用提供理论依据.[方法]测定阴沟肠杆菌生长曲线、生理生化特征,筛选出最适生长培养基,测定不同温度、pH值、摇床振数、装液量下的生长状况,确定最适生长条件,测定对乐果、甲胺磷、敌敌畏、敌百虫的耐受力和利用情况.[结果]阴沟肠杆菌培养3h后进入对数生长期,可以利用分解大部分含碳化合物.在营养贫瘠的条件上生长,生长温度范围为10～43℃,生长pH值范围为6～12,对乐果、甲胺磷、敌敌畏、敌百虫的降解利用必须建立在一定的营养物质的基础上.[结论]该菌的繁殖速度快,在营养条件较贫瘠的条件下就可以生存,是一株生存能力很强的菌株,适合应用于土壤、水体环境中的有机磷农药的降解. 相似文献
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以高效纤维素分解菌桔青霉(Penicillium citrinum)CR-2菌株为材料,利用分子筛及离子交换技术纯化分离其内切葡聚糖酶蛋白,首次获得了电泳纯的桔青霉内切葡聚糖酶蛋白组分,大小为27.26 kDa,最适作用温度为60℃,最适作用pH为5。对研究桔青霉纤维素酶降解纤维素的作用机理以及该菌株的改造应用具有重要意义。 相似文献
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筛选分离氯氰菊(cypermethrin)高效降解细菌,研究其降解特性.根据分离菌株的生理生化特征以及16SrDNA序列同源性分析鉴定降解菌;气相色谱法测定该菌降解氯氰菊酯的能力;利用化学消除剂消除细菌质粒,测定消除质粒后细菌降解能力,初步定位降解酶基因.从长期使用氯氰菊酯的土壤中筛选分离出三株优势菌,编号为LF-1、LF-2和LF-3.选择对氯氰菊酯降解潜力最高的菌株LF-l进行鉴定和降解特性研究.LF-1初步鉴定为kurthiasp.,该菌降解氯氰菊酯最适pH和温度分别为7、35 ℃;在最佳降解条件下培养8天,对100mg/L氯氰菊酯降解率达80.15%,LF-1还能降解甲氰菊酯、联苯菊酯等菊酯类农药.经SDS或EB消除质粒后,LF-1降解氯氰菊酯的能力丧失,表明该菌降解基因可能位于质粒DNA.LF-1能有效的降解多种菊酯类农药,该研究为菊酯类农药的生物修复提供理论依据. 相似文献