抗猪流行性腹泻病毒变异株卵黄抗体的制备、纯化及其活性影响因素的研究     

雷丹  李安琪  罗素贤  叶昱  宋德平  唐玉新 《中国畜牧兽医》2018,45(8):2293-2302

为制备抗猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）变异株卵黄抗体并探索卵黄抗体的纯化方法，本试验采用灭活的PEDV变异株CH/JX01全病毒免疫蛋鸡，收集免疫后所产的鸡蛋，分别用水稀释法、PEG-6000法和水稀释-硫酸铵二次沉淀法对鸡蛋中IgY进行提纯，然后运用间接ELISA和Western blotting方法鉴定和比较3种方法的提纯效果，获得可用于规模化生产的提纯方法；同时研究不同温度、pH条件下抗体活性，寻找对提纯IgY活性具有保护作用的物质。结果显示，本试验成功制备了抗PEDV变异株的卵黄抗体。浓度检测结果表明，水稀释法提取的IgY浓度最高，为6.204 mg/mL；PEG-6000方法提纯的IgY浓度次之，为4.673 mg/mL；水稀释-硫酸铵二次沉淀法IgY浓度最低，为3.359 mg/mL。间接ELISA检测结果表明，水稀释-硫酸铵二次沉淀法提纯的IgY效价最高，为1：12 800；其次是PEG-6000，为1：6 400；而水稀释法最低，为1：1 600。综合3种方法所提纯的卵黄抗体浓度与效价，发现水稀释-硫酸铵二次沉淀法的提纯效果优于其他两种方法。活性影响因素试验结果表明，提纯的IgY在37~60℃活性稳定；pH为4.0~11.0时具有良好的活性；在酸性条件下，20%硫糖铝对IgY活性具有较好的保护作用。本试验结果将为卵黄抗体的大规模生产运用与储存提供了有效的参考依据。  相似文献   

对鸡卵黄免疫球蛋白两种提取方法的比较     

皮晋魁  张焕容 《四川畜牧兽医》2011,38(10):26-28

本文比较了水稀释-饱和硫酸铵沉淀法（法一）和水稀释-冰乙醇分级沉淀法（法二）分离提纯鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）的产率、纯度及抗体效价。结果表明：两种方法提取的IgY纯度均较高,法一纯化的IgY的产率及蛋白活性相对更好。  相似文献   

抗猪流行性腹泻病毒变异株卵黄抗体的制备、纯化及其活性影响因素的研究     

雷丹  李安琪  罗素贤  叶昱  宋德平  唐玉新 《中国畜牧兽医》2018,(8)

为制备抗猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)变异株卵黄抗体并探索卵黄抗体的纯化方法,本试验采用灭活的PEDV变异株CH/JX01全病毒免疫蛋鸡,收集免疫后所产的鸡蛋,分别用水稀释法、PEG-6000法和水稀释-硫酸铵二次沉淀法对鸡蛋中IgY进行提纯,然后运用间接ELISA和Western blotting方法鉴定和比较3种方法的提纯效果,获得可用于规模化生产的提纯方法;同时研究不同温度、pH条件下抗体活性,寻找对提纯IgY活性具有保护作用的物质。结果显示,本试验成功制备了抗PEDV变异株的卵黄抗体。浓度检测结果表明,水稀释法提取的IgY浓度最高,为6.204mg/mL;PEG-6000方法提纯的IgY浓度次之,为4.673mg/mL;水稀释-硫酸铵二次沉淀法IgY浓度最低,为3.359mg/mL。间接ELISA检测结果表明,水稀释-硫酸铵二次沉淀法提纯的IgY效价最高,为1∶12 800;其次是PEG-6000,为1∶6 400;而水稀释法最低,为1∶1 600。综合3种方法所提纯的卵黄抗体浓度与效价,发现水稀释-硫酸铵二次沉淀法的提纯效果优于其他两种方法。活性影响因素试验结果表明,提纯的IgY在37~60℃活性稳定;pH为4.0~11.0时具有良好的活性;在酸性条件下,20%硫糖铝对IgY活性具有较好的保护作用。本试验结果将为卵黄抗体的大规模生产运用与储存提供了有效的参考依据。  相似文献   

抗BVDV卵黄抗体的制备   总被引：2，自引：0，他引：2  

邓宇  王新华  郭燕  钟发刚  荣光  夏伦斌  陈琛 《家畜生态学报》2007,28(1):75-78

采用牛病毒性腹泻病毒（BVDV）免疫产蛋母鸡，然后用水稀释法成功地从卵黄中分离出抗BVDV免疫球蛋白（抗-BVDV IgY）。建立起测定鸡蛋中特异性抗BVDV活性的间接ELISA方法，并采用此方法检测每次免疫后第10天的抗体滴度。结果表明，蛋鸡在首次免疫后第10天，卵黄中可以检测到抗-BVDV IgY；5次免疫后，抗体效价达到1：6400，半年后仍能维持在该水平。  相似文献   

鸡抗鹿链球菌卵黄抗体的研制与初步治疗实验     

畅丽芳  周学章  徐薇薇 《吉林畜牧兽医》2005,(10):8-9

用链球菌灭活菌苗免疫产蛋母鸡，监测卵黄抗体效价达到试验要求收集鸡蛋，提取卵黄中的卵黄免疫球蛋白（IgY）。临床发病鹿群用药物和IgY配合治疗，观察IgY的作用和疗效。  相似文献   

抗奶牛乳腺炎多价卵黄抗体的制备及含量测定   总被引：2，自引：1，他引：1  

甄宇红  刁云鹏  舒晓宏  张厚利  邓卅  李晓宇  方蕊  陈杰  徐永平 《中国畜牧兽医》2009,36(3):134-136

本研究的目的是制备抗奶牛乳腺炎主要致病菌的多价卵黄抗体并检测特异性抗体的含量。采用金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和大肠杆菌混合抗原免疫产蛋母鸡。通过水稀释法分离卵黄抗体。采用ELISA法检测抗体效价和特异性抗体含量。多价抗体与大肠杆菌的结合效价最高可达25600,与金黄色葡萄球菌和无乳链球菌的结合效价为12800。每毫升卵黄液中大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和无乳链球菌特异性卵黄抗体（egg yolk immunoglobulin,IgY）的最高含量分别为2.13、2.01和1.92 mg。免疫后特异性抗体含量随时间变化趋势与抗体效价变化趋势一致。  相似文献   

抗BVDV卵黄抗体的制备     

邓宇  王新华  郭燕  钟发刚  荣光  夏伦斌  陈琛 《家畜生态》2007,(1)

采用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)免疫产蛋母鸡,然后用水稀释法成功地从卵黄中分离出抗BVDV免疫球蛋白(抗-BVDV IgY)。建立起测定鸡蛋中特异性抗BVDV活性的间接ELISA方法,并采用此方法检测每次免疫后第10天的抗体滴度。结果表明,蛋鸡在首次免疫后第10天,卵黄中可以检测到抗-BVDV IgY;5次免疫后,抗体效价达到1:6400,半年后仍能维持在该水平。  相似文献   

抗CDV、CAV卵黄抗体的制备   总被引：5，自引：0，他引：5  

王玉燕  朱瑞良 《中国预防兽医学报》2003,25(3):215-218

本研究用CDV、CAV分别免疫产蛋鸡，收集鸡蛋，用海藻酸钠—硫酸铵法提取卵黄抗体(IgY)，并对提取的IgY采用了SDS-PAGE和低压层析检测纯度，结果表明用该法提取的IgY纯度较高。用间接BUSA测定提取的IgY活性，结果证明提取的抗CAV IgY的活性较高，而抗CDV IgY的活性损失较大。  相似文献   

鹅卵黄抗体IgY的提纯及其酶标抗体的制备     

赵健  胡桂学  董浩  张双  邵洪泽  王开  赵艳丽 《现代畜牧兽医》2015,(3)

本试验采用辛酸去脂、饱和硫酸铵溶液盐析法提纯鹅卵黄抗体IgY,采用SDS-PAGE方法分析其纯度;用纯化后的IgY免疫试验兔,收集血清,测定血清抗体效价;采用辛酸-硫酸铵法结合Protein G树脂亲和层析法纯化免血清IgG,用改良的高碘酸钠法进行辣根过氧化物酶标记,直接ELISA法测定标记物效价.结果表明,提纯的鹅卵黄IgY浓度为11.5 mg/mL,纯度约为92％;血清琼脂扩散抗体效价为1∶32;Western Blotting试验证明,兔血清中含有抗鹅卵黄抗体IgY重链及轻链的特异性抗体;直接ELISA法测得标记物效价为1:1 100.  相似文献   

重组酵母乙肝疫苗免疫蛋鸡后血清抗体与IgY变化规律研究     

《中国家禽》2017,(12)

研究采用重组酵母乙肝疫苗免疫蛋鸡,探索特异性卵黄免疫球蛋白(IgY)的产生和变化规律。产蛋母鸡经免疫后每周收集所产蛋,分别提取IgY,测定血清抗体效价与抗体的产生量,ELISA定期检测卵黄中的抗体效价变化,Western blotting检测总IgY含量。以未免疫鸡IgY作阴性对照,作血清抗体与IgY变化的动态曲线。取三次免疫后的蛋鸡,解剖分离出各级卵泡,观察各级卵泡发育程度。ELISA结果显示:随着卵泡的生长,卵泡细胞分泌的IgY聚集到卵泡卵黄,卵泡卵黄中IgY的含量在逐渐增加。Western blotting显示:随免疫次数的增加,IgY含量增加。首免后第3天血清抗体被检出,以后逐渐上升,2周后达到高峰,维持到第8周后逐渐下降,到第15周仍可检出抗体。本研究表明:用重组酵母乙肝疫苗免疫蛋鸡,卵黄和鸡血清中可持久保持高效价的特异性抗体,血液中的抗体传递到卵黄需要一定时间,卵黄IgY动态变化规律与血清抗体基本一致。  相似文献