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1.
四川主栽小麦品种RAPD标记遗传差异研究 总被引：16，自引：4，他引：12
采用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ） 标记,对四川近５０ 年来年推广面积６－６７ 万ｈｍ２（１００万亩）以上的４０ 个小麦主栽品种遗传差异进行了初步探讨。结果表明,５５ 个随机引物中,有３２个引物（ 占５８－２％ ） 扩增产物具有多态性。３２ 个引物共扩增出１８５ 条带,其中９３ 条带（ 占５０％ ）具有多态性,每个引物可扩增出１ ～１１ 条多态性带,平均２－９ 条。４０ 个品种ＲＡＰＤ 标记遗传距离（ＧＤ） 变异为０－０１９ ～０－４７５ ,平均ＧＤ 值为０－２２１。聚类分析表明,在ＧＤ 值０－２３ 水平上,４０ 个品种可聚为５ 类。一些随机引物对有些品种能进行特异性扩增。引物ＯＰＮ１４ 对小麦１ＢＳ 扩增能产生特异性ＤＮＡ 片段,能完全鉴定出４０ 个供试品种中的９ 个１ＢＬ／１ＲＳ小麦－ 黑麦易位系品种。据此认为,ＲＡＰＤ标记可以作为小麦品种鉴定的指纹图谱。 相似文献
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本文描述了一种简便而有效的克隆基因未知５＇和３＇末端序列的方法,并用此方法克隆了稻瘟病菌的３－磷酸甘油醛脱氢酶基因（ｇｐｄ）．即通过比较１２种真菌的已知ｇｐｄ基因序列,寻找内部的保守区段,设计并合成一对特异性引物．引物Ｐ１为靠近基因５＇端的一个特异性序列,引物Ｐ２则与３＇端的一段特异性序列互补．以双链ｃＤＮＡ－ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ载体连接物为模板,利用基因的特异性引物Ｐ１和载体上的标准测序引物Ｔ７,ＰＣＲ扩增出包含ｃＤＮＡ３＇末端的序列;利用特异性引物Ｐ２和标准测序引物Ｔ３,扩增出包含ｃＤＮＡ５＇末端的序列．将两片段分别克隆、测序和合并后,得到全长１０１１ｂｐ的稻瘟病菌３－磷酸甘油醛脱氢酶基因（ｇｐｄ）的编码区序列．该序列及其相应的氨基酸序列与已知真菌的ｇｐｄ基因序列有着６１．４％－８６．６％和６４．６％－８６．３％的同源性．特别在酶的活性功能区不同真菌间有着近乎相同的氨基酸序列． 相似文献
3.
参照了已表的ＩＢＶ Ｂｅａｕｄｅｔｔｅ株全基因组序列,自行设计合成了３和引物（ｙｏｕｌ＋、ｙｏｕ２－ｙｏｕＭ＋）,引物ｙｏｕ１＋和ｙｏｕ２－在Ｓ１基因两侧,跨幅约１６１０ｂｐ,引物ｙｏｕ２－和ｙｏｕＭ＋在Ｓ１基因的３’端,跨幅约５３０ｂｐ。用这两对引物对５个ＩＢＶ地方分离株（ＨＮ２,ＨＮ４,ＪＸ１,ＳＣ２和ＳＣ１）进行ＲＴ－ＰＣＲ,均成功地扩增出相应大小的目的片段。病毒在电镜下观察中以形态多变的冠状病毒粒子。 相似文献
4.
草鱼和鲤RAPD引物筛选及鱼种特异性分子标记 总被引：1，自引：0，他引：1
以草鱼和鲤为材料,提取基因组ＤＮＡ,制备ＲＡＰＤ－ＰＣＲ模板,对３个随机引物盒共６０个１０－ｍｅｒ引物进行了ＰＣＲ扩增,共筛选出７个较理想的可用于鱼种内或鱼种间群体遗传分析的随机引物．用这７个引物所获得的草鱼和鲤的ＲＡＰＤ指纹图谱平均带纹总数分别为４．２８±１．８９和６．７１±４．１９,多态性带纹总数分别为１．７１±１．６０和５．１４±４．７４．ＲＡＰＤ指纹图谱特征反映出草鱼比鲤具有更高的遗传纯度．７个引物共扩增出草鱼特异性带纹１８条,鲤特异性带纹３２条．大量特异性带纹的检出表明,两个鱼种间存在较大的遗传差异,同时也为鱼种间基因转移（特别是全基因组ＤＮＡ导入）提供了分子检测的候选遗传标记 相似文献
5.
甜菜夜蛾GOBP2基因的克隆及序列测定 总被引：10，自引：0，他引：10
比较已报道的 ５种昆虫的 ＧＯＢＰ２基因序列，设计了一对简并引物，以甜菜夜蛾 Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ的触角ｃＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增，获得了一条４００ｂｐ左右的特异性条带。将以上片段克隆到Ｔ－ｅａｓｙ载体上，获得重组子ＧＯＢＰ２Ｓｅｘｉ，序列测定和结构分析结果表明，ＧＯＢＰ２Ｓｅｘｉ阅读框全长４２６ｂｐ，编码１４１个氨基酸残基，预测分子量和等电点分别为１６．０７ｋｕ和５．０９。另外，序列中有６个保守的半胱氨酸位点，具有气味结合蛋白的典型特征。同时以基因组 ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增，得到了一条 ２ｋｂ左右的特异性条带，同样克隆到 Ｔ－ｅａｓｙ载体上进行测序，结果表明，在该蛋白的第２２和第２３个氨基酸之间及第８２和第８３个氨基酸之间分别插入了一个１６０ｂｐ和１４０３ｂｐ的内含子。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果表明，ＧＯＢＰ２基因在甜菜夜蛾触角中特异性表达，并且在雌雄蛾触角中表达水平相当。该基因已在ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ中登记，序列号为ＡＪ２９４８０９。 相似文献
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利用ＰＣＲ技术从拟南芥菜基因组ＤＮＡ中扩增出一条长４１４ｂｐ的ＤＮＡ片段。该片段被克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（－）手ＥｃｏＲＶ位点上。序列分析结果证实扩增和克隆的ＤＮＡ片段是分生组织特征基因ＬＥＡＦＹ３＇端的部分片，不含内含子序列。结果表明，供试果树，基因组中均存在单拷贝的ＬＥＡＦＹ同源基因。 相似文献
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甘蓝型油菜核不育基因的PCR标记初报 总被引：1，自引：0，他引：1
用Ｏｐｅｒｏｎ公司ＯＰＡ－０１－ＯＰＪ－２０ ２００个１０个碱基对随机序列引物对甘蓝型油菜隐性核不育涪优ＡＢ,显性核不育３７ＡＢ,广恢系９８－８０２６,９８－３７４９及Ｆ１材料基因组ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ扩增的结果,共获得１３３４条扩增带,平均每引物扩增带约６．７条扩增带表明油菜存在较为丰富的遗传多样性。引物ＯＰＡ－０５,ＯＰＡ－１２,ＯＰＡ－１３,ＯＰＡ－２０等分别扩增出了大小不同的多态性带,初步认 相似文献
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巢式RT-PCR检测昆明小鼠早期胚胎中G6PD基因表达 总被引：2，自引：0，他引：2
根据小鼠肌肉的６－磷酸葡萄糖脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）的ｃＤＮＡ序列设计并合成内外２对引物,以巢式ＲＴ－ＰＣＲ方法检测昆明小鼠１－,２－,４－,８－细胞期早期胚盈是否转录出Ｇ６ＰＤ的ｍＲＮＡ,结果发现１￣８－细胞期早期胚胎的ｍＲＮＡ均能以外引物扩增产物为模板通过内引物扩增出一条３７８ｂｐ特异性条带。表明昆明小鼠１￣８－细胞期早期胚胎的Ｇ６ＰＤ基因已表达,磷酸戊糖途径已是其代谢葡萄糖的主要方式之一。 相似文献
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棉花DNA导入苎麻的RAPD验证 总被引：10，自引：0，他引：10
为了寻找通过超干胚浸泡法已经将湘棉１２号ＤＮＡ导入苎麻湘苎３号基因组中的分子证据,对所产生的变异后代进行了ＲＡＰＤ验证,所用８０个随机引物中,有６个引物检测出变异材料９７－２４与受体的ＤＮＡ多太 ,３个引物检为异材料９７－２８与受体的多太,４个引物检为异材料９７－４与受体的多态性,并且有２个引物在变异后代中扩增出供体特异带,这些结果说明棉花ＤＮＡ导入苎麻后引起了后代基因组的变异。 相似文献
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水稻野败型细胞质雄性不育恢复基因的ISSR和SSLP标记分析 总被引：16，自引：0，他引：16
以野败型细胞雄性不育系珍油９７Ａ与其强恢复系ＩＲ２４配组,构建由２１０株组成的Ｆ２代极端不育群体作为恢复基因定位群体。用ＩＳＳＲ引物ＵＢＣ８３５对两个亲本进行扩增,发现ＰＣＲ指纹在两个亲本间具多态性,再用此引物对基因定位群体进行连锁分析表明,ＵＢＣ８３５与水稻野败型细胞质雄性不育恢复基因紧密连涣,交换率为３．５７％,转换成图距为３．５８ｃＭ。经过１５０多对微卫星引物进行扫描,在第１、第７染色体和第 相似文献
12.
RAPD分析应用于厚皮甜瓜若干品种或品系间的比较 总被引：10，自引：0，他引：10
用１４种１２个碱基的随机引物对厚皮甜瓜４个品种及１３个品系进行随机扩增多态性ＤＮＡ（ＰＡＰＤ）分析。结果表明,可用其中６种引物将４个品种（Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｑｕｅｅｎ、Ｅａｒｌ’ｓ Ｆａｖｏｕｒｉｔｅ、Ｃｒｅｎｓｈａｗ、Ｐａｋｉｓｔａｎ－９８１）及Ｅａｒｌ’ｓ Ｆａｖｏｕｒｉｔｅ的３个品系（春系３号、磐田２号、夏系７－２）加以鉴别。在不同引物所扩增的特有或缺少的特异性条带（Ａ０９－１６００、Ａ０９－ 相似文献
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采用“富集ＰＣＲ”方法,用单个特异引物和ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１５从桃伤处理叶片ｃＤＮＡ 中扩增出特异性片段⒚将扩增产物分离并克隆筛选到１３ 个重组克隆,其中有６ 个克隆能与ＡＣＣ氧化酶基因组ＤＮＡ 杂交,对其中一个阳性克隆ｐＧＥＭＡＣ１２ 作酶切分析,发现其酶切图谱与已报道的桃果实成熟相关的ＡＣＣ氧化酶ｃＤＮＡ 基本一致⒚ＤＮＡ 序列分析表明,插入片段两端ＤＮＡ 序列均是 ５＇端特异引物序列,表明是由５＇端特异引物单个引物扩增出来,全序列分析表明插入片段全长８３３ ｂｐ,是ＡＣＣ 氧化酶ｃＤＮＡ 基因编码区的一部分,５＇端缺少启始密码子ＡＴＧ,３＇端缺少部分编码序列和终止密码子ＴＡＡ⒚ 相似文献
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新城疫病毒Ｕｌｓｔｅｒ株经ＳＰＦ鸡胚增殖和超速离心纯化后，以酚－ＳＤＳ法提取其基因组ＲＮＡ，作为反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的模板。根据其已发表的Ｆ和ＨＮ基因核苷酸序列，合成一个长为３０ｍｅｒ的寡核苷酸（位于Ｆ基因内）和一对分别长为２８、３０ｍｅｒ的寡核苷酸（位于ＨＮ基因两侧）分别作为反转录引物和ＰＣＲ引物。扩增反应产物经琼脂糖凝胶电泳分析，出现一条长为１．９３ｋｂ的特异性条带，与预期相符。并将此特异性条带克隆入质粒载体ｐＧＥＭ－３Ｚｆ（＋）中，并经限制性核酸内切酶分析（ＲＥＡ）。ＲＴ－ＰＣＲ和ＲＥＡ结果证实其为新城疫病毒Ｕｌｓｔｅｒ株的血凝素－神经氨酸酶基因。 相似文献
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根据烟草花叶病毒Ｕ１株系ＴＭＶ－Ｕ１序列，人工合成引物，通过ＰＣＲ扩增并克隆了烟草花叶病毒蚕豆株系（ＴＭＶ－Ｂ）的外壳蛋白（ＣＰ）基因和３＇端非编码区。ＤＮＡ全序列测定结果表明，外壳蛋白基因全长４５９个碱基，编码１５１个氨基酸，３＇端非编码区全长２２４个碱基。与ＴＭＶ－Ｕ１株系相比，ＴＭＶ－Ｂ仅在ＣＰ基因上有一个碱基缺失，并导致ＣＰ基因提前终止，使其编码的氨基酸少７个。将ＣＰ基因及３＇端非编码区插 相似文献
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根据已发表的猪瘟病毒序列,设计并合成了３对引物,利用ＲＴ－ＰＣＲ技术,从猪瘟病毒石门株感染猪血中成功扩增了各ｃＤＮＡ片段,覆盖整个ＮＳ５Ａ基因,片段大小各为７７４,６８５,９１７ｂｐ。克隆后测序。序列比较结果显示,该基因在ＣＳＦＶ中较为保守。与同属的ＢＶＤＶ的序列同源性较低,且氨基酸的同源性低于核苷酸的同源性。推测它参与决定瘟病毒的特异性。 相似文献
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根据已报道的ＴＭＶＵ１株系（ＴＭＶ－Ｕ１）的序列设计了特异性引物,利用ＲＴ－ＰＣＲ技术,从烟草花叶病毒蚕豆分离物（ＴＭＶ－Ｂ）上扩增移动蛋白（ＭＰ＿基因及其邻近序列,将比ＣＤＮＡ片段克隆于ｐＢｌｕｓｃｒｉｐｔＳＫ质粒上,进行测序分析,结果表明ＭＰ基因由８０７个核苷酸组成,编码２６８个氨基酸,与ＴＭＶ－Ｕ１的ＭＰ基因序列比较,核苷酸序列及推导出的氨基酸序列的同源性的９９．０１和９８．８９％,与ＴＭＶ 相似文献
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褐飞虱种群的DNA的提取及RAPD分析 总被引：6，自引：0，他引：6
以福建省５个不我的褐飞虱种群为虫源,通过对褐飞虱基因组ＤＮＡ提取和ＲＡＰＤ分析方法的摸索,结果表明,用ＣＴＡＢ方法提取的５个种群的基因组ＤＮＡ,无降解情况,ＲＮＡ去除较为干净,可用于褐飞虱的ＤＮＡ提取;随机引物筛选结果为,所用的４５个随机引物中５个引物扩增结果完全相同,７个引物出现多态性,扩散带数为４９条具多态笥,占４２．８５％。利用Ｎｅｉ氏相似系数,对５个种群的ＲＡＰＤ－ＰＣＲ结果进行分析,结果 相似文献
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RAPD技术在金针菇菌株鉴别的应用 总被引：6，自引：0，他引：6
用２０个随机引起物对１６个不同来源的金针菇株进行了ＲＡＰＤ分析研究，结果表明：２０个随机引物中，有６个引物的扩增产物ＤＮＡ片段表现出明显的多态性，其中每个引物对不同菌株扩增出现的ＤＮＡ片段数目，少则没有，多达１１条，平均为５条，ＤＮＡ征段从０．４ｋｂ到３．３８ｋｇ；并且不同的引物扩增出的ＤＮＡ片段带谱不同，差异较大，这６个引物对１６个金针菇菌株共扩增出８４条ＤＮＡ片段带。采用系统聚类法中的类平均法 相似文献
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RT-PCR和Digoxigenin标记的核酸探针检测鸡传染性支气管炎病毒试验研究 总被引：1，自引：0，他引：1
用２对已发表的引物和１对自行设计的引物对同一ＩＢＶＨ１２０株进行ＲＴ－ＰＣＲ，分别获得了Ｓ１基因上与引物设计相一致的１７２０ｂｐ，２２８ｂｐ，６０２ｂｐ，的扩增片段。用自行设计的引物对７个毒株（Ｈ１２０，Ｈ５２，Ｍ４１，Ｃｏｎｎ，Ｇｒａｙ，Ｔ，Ｈｏｌｔｅ）和５个分离株（宜毒，上毒，云毒，ＨＫ，１１８）的含毒尿囊液或纯化病毒进行ＲＴ－ＰＣＲ。结果除Ｈｏｌｔｅ株，２个分离株（宜毒，云毒）外，其余均被成功地扩增出６０２ｂｐ的片段。将ＩＢＶＨ１２０株０６ｋｂＰＣＲ产物用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记为探针，分别与上述各ＩＢＶ毒株的核酸及其扩增产物进行核酸杂交，均呈现阳性反应，而该探针不与ＩＢＤＶ和ＮＤＶ的ＤＮＡ，ＥＤＳ－７６病毒的ＤＮＡ及正常鸡胚尿囊液抽提物反应。ＲＴ－ＰＣＲ和核酸杂交技术提供了直接从尿囊液中快速检测出病毒，作为诊断ＩＢＶ的新方法。 相似文献