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柑桔溃疡病菌的PCR检测方法研究 总被引：1，自引：0，他引：1
通过优化PCR反应条件,拟建立快速、特异、准确的检测柑桔溃疡病的方法。试验结果表明,25μL优化反应体系:10×PCR缓冲液2.5μL,10 mM/L dNTPs 0.5μL(终浓度为0.2 mM/L),2 U/μLTaq DNA聚合酶0.5μL(终浓度为0.04 U/μL),5 mM/L引物各0.5μL(终浓度为0.1 mM/L),DNA模板1μL(终浓度为6.0×10~6cfu/mL/mL),灭菌ddH_20 19.5μL;PCR扩增退火温度为59℃;柑桔溃疡病菌病茵浓度检测下限为6.0×10~3cfu/mL,可以获得柑桔溃疡病菌的特异性片段,能够满足生产中对柑桔溃疡病检测的要求。 相似文献
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用PCR法扩增位于柑橘溃疡病菌致病基因pthA C-末端的3个核定位信号序列，并将其克隆到原核表达载体PET32a(+)上，经双酶切及核酸序列测定重组质粒(PthA-NLS)，其序列与GenBank中pthA的相关序列有99.9%的同一性。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导了重组多肽的表达，并用Ni2+-NTA纯化柱得到了48kD的纯化重组多肽。把重组多肽注入免疫Balb/c小白鼠，制备了相应的抗血清，Western Blotting和ELISA分析结果表明，抗血清可特异地结合重组多肽，亦可识别溃疡病菌PthA天然蛋白，获得的抗血清可以用于柑橘溃疡病的检测。利用抗血清与溃疡病菌混合接种离体冰糖橙叶片，发现抗血清能推迟溃疡病菌的致病过程，且病斑比对照小，但未能达到抗病的程度。pthA基因末端核定位信号序列的克隆、原核表达及抗血清的制备为进一步研究pthA的致病机理和研发溃疡病快速分子检测技术奠定了基础。 相似文献
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《中国南方果树》2016,(6)
为找出较优的单头柑桔木虱黄龙病菌核酸提取方法,以饲养于温室内感染柑桔黄龙病的甜橙树上的柑桔木虱为试材,采用3种方法提取单头柑桔木虱的总核酸,对提取的核酸样品进行质量检测,并利用柑桔黄龙病菌特异性引物OI1/OI2c以及r-rplLAs/f-rplLAs分别进行了常规PCR和qPCR检测。结果表明,3种方法均可以成功提取到单头柑桔木虱总核酸且均能检测到黄龙病菌。3种方法各有优缺点:李菁的方法步骤简单、历时短,提取的核酸浓度较高,但核酸质量较低;氯仿-异戊醇法步骤较多、历时长,提取核酸浓度较低,但核酸质量较高;动物组织直接PCR试剂盒法简便快速,提取的核酸浓度高,核酸质量一般,成本较高。 相似文献
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柑橘溃疡病致病基因PthA核定位信号肽抗血清制备及其抑菌的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
用PCR法扩增位于柑橘溃疡病菌致病基因pthA C-末端的3个核定位信号序列,并将其克隆到原核表达载体PET32a(+)上,经双酶切及核酸序列测定重组质粒(PthA-NLS),其序列与GenBank中pthA的相关序列有99.9%的同一性。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导了重组多肽的表达,并用Ni2+-NTA纯化柱得到了48kD的纯化重组多肽。把重组多肽注入免疫Balb/c小白鼠,制备了相应的抗血清,Western Blotting和ELISA分析结果表明,抗血清可特异地结合重组多肽,亦可识别溃疡病菌PthA天然蛋白,获得的抗血清可以用于柑橘溃疡病的检测。利用抗血清与溃疡病菌混合接种离体冰糖橙叶片,发现抗血清能推迟溃疡病菌的致病过程,且病斑比对照小,但未能达到抗病的程度。pthA基因末端核定位信号序列的克隆、原核表达及抗血清的制备为进一步研究pthA的致病机理和研发溃疡病快速分子检测技术奠定了基础。 相似文献
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柑橘裂皮病类病毒的一步RT-PCR法检测及其在甜橙体内的分布 总被引：3，自引：0，他引：3
柑橘裂皮病是由柑橘裂皮病类病毒(Citrusexocortisviroid,CEVd)引起的一种重要的柑橘病害。分别采用快速微量核酸提取法和SDS-KAc抽提法在表现症状的Etrog香橼中提取核酸,采用一步RT-PCR法对CEVd进行检测,结果显示SDS-KAc法可以消除带毒样品中非特异性条带。从嫁接接毒的铜水72-1锦橙植株的接穗部取嫩叶、老叶、皮,从砧木部茎杆上取老皮以及根皮分别提取总核酸进行RT-PCR检测,分析CEVd在甜橙体内的分布情况。初步检测结果表明在接穗的嫩叶、老叶、皮,砧木部茎杆的老皮和根皮上都可以检测到CEVd,以接穗部叶和皮检出稳定性高。 相似文献
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近年来，我县由于引进了橙类等新品种，溃疡病发生面积有所增加。据1991年统计，全县广橙、胡柚、衢桔发病面积达130hm2以上，一般减产10％降低经济价值15～30％。为此，笔者于1991～1996年就该病在本区域的发生规律以及综防技术进行了调查研究，现将结果初报如下。1发病规律柑桔溃疡病是一种具有高度传染性的细菌性病害，感病品种新梢抽发期通高温多雨天气发病重，病菌借风雨传到幼嫩枝、叶、幼果上，发病的春梢是当年主要的浸染源。溃疡病发生严重时，可导致叶片脱落，病叶上的病菌在土壤中会迅速死亡。据5年来的调查观察，我县溃疡病的发… 相似文献
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叶片微形态结构特征与柑桔溃疡病抗性的关系 总被引：2，自引：0，他引：2
为了研究叶片微结构特征与柑桔溃疡病抗性的关系,选择对柑桔溃疡病具有高抗(罗浮金柑)、抗(新生系3号椪柑)、耐(纽荷尔脐橙)和高感(星路比葡萄柚)特性的4个品种为试材,在室内涂抹接种验证抗病性的基础上,采用扫描电镜及树脂包埋半薄切片等技术对成熟叶片的解剖结构及下表皮进行观测,并采用细菌分离法测检各品种健康叶片浸泡接种病菌侵入数量.结果表明:4个品种对柑桔溃疡病抗性差异明显;叶片浸泡接种病菌侵入数量与品种抗性密切相关,依次为星路比葡萄柚＞纽荷尔脐橙＞新生系3号椪柑＞罗浮金柑;不同品种的气孔密度、气孔大小、叶片厚度、栅栏组织厚度、海绵组织厚度和下皮层厚度存在差异,但是只有气孔密度与抗性之间能呈现出有规律的对应关系;气孔密度可作为柑桔植株抗柑桔溃疡病早期选择的辅助形态指标. 相似文献
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《果树学报》2016,(4)
【目的】比较分析‘赣南早’与其芽变前的‘纽荷尔’品种叶片气孔及表皮形态特征、叶片解剖结构及对柑橘溃疡病的抗病性,为生产中合理布局早晚熟脐橙品种,推广‘赣南早’品种提供科学依据。【方法】通过离体叶片针刺接种检测‘赣南早’与‘纽荷尔’品种对柑橘溃疡病的抗性反应、电镜扫描及石蜡切片等技术观测2个品种叶片解剖结构,测定2个品种接种溃疡病菌后植株体内5种与抗性相关防御酶活性的变化,分析柑橘溃疡病菌对2个品种的诱导抗性。【结果】接种试验表明侵染‘纽荷尔’品种感病所需的柑橘溃疡病菌最低浓度为1.0×106CFU·m L-1,小于‘赣南早’所需最低浓度1.0×107CFU·m L-1,溃疡病菌在‘纽荷尔’品种上比在‘赣南早’品种上易于扩展和形成病斑;两个品种在气孔密度、叶片厚度、栅栏组织和海绵排列紧密度上均存在差异,酶活性测定表明接种溃疡病菌后2个品种体内苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)等相关防御酶活性均有不同程度的提升,但2个品种间相关酶活性变化程度差异不显著。【结论】通过对‘赣南早’和‘纽荷尔’2个品种抗病性测定及叶片解剖结构特征发现‘赣南早’品种对柑橘溃疡病的抗性强于其芽变前的‘纽荷尔’品种。 相似文献
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柑橘溃疡病是世界柑橘的一种重要病害，对柑橘产业造成严重的经济损失。对柑橘中9–顺式–环氧类胡萝卜素双加氧酶（NCED）基因家族进行注释，并克隆出受柑橘溃疡病菌诱导表达的CsNCED3-2，确定了其表达模式。从柑橘全基因组公共数据库共注释出14个NCED基因家族成员，根据系统发育树和功能结构域将其分为4个亚类；CsNCED3-2其序列全长2 377 bp，开放阅读框1 830 bp，编码609个氨基酸，属于RPE65超家族成员和类胡萝卜素双加氧酶家族成员，是非分泌性蛋白；在‘晚锦橙’和‘金弹’叶片注射溃疡病菌后的各个时间点，‘晚锦橙’叶片中CsNCED3-2的相对表达量总体高于‘金弹’，并且两品种的相对表达变化呈相反趋势；与茎、叶和种子相比，CsNCED3-2在两品种果皮中表达量较高；两品种的CsNCED3-2上游启动子均含有参与植物激素和逆境应答相关的顺式作用元件ABRE（脱落酸响应）、TCA-element（水杨酸响应）、MYC/MYB（干旱响应）等，但数量和类型存在差异。 相似文献
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R.W.S. Weber 《Erwerbs-Obstbau》2014,56(3):95-107
A review of apple canker caused by Neonectria ditissima is presented for Northwestern Europe with a focus on the Lower Elbe region (Northern Germany). Whereas conidia released by rainsplash are produced mainly from spring to autumn, the liberation of wind-borne ascospores peaks in autumn and/or early spring. Infection occurs via natural as well as pruning-induced wounds, some of which are present throughout the year. Autumnal leaf scars are the most frequent entry point for N. ditissima. Wounds on tree trunks, especially bark cracks in the crotch regions, are potentially even more serious because cankers on trunks and leader shoots commonly cause the total loss of a tree. Surface moisture is a prerequisite for leaf scar infections but possibly not for an entry through other wounds. Irrespective of the entry route, successful infection of a wound requires a mass inoculum of at least 50–100 conidia or ascospores. Infections of trees originating in nurseries may enter a state of latency from which they can break out up to 3 years after the trees have been explanted into the production orchard. Streaks of brown wood discolourations can be caused both by systemic colonisation of the xylem by N. ditissima and by winter frost damage. Apple varieties may show pronounced differences in their sensitivity to canker. For highly susceptible varieties, this disease can be a major production-limiting factor. Flower infections by N. ditissima commonly lead to a pre-harvest rot at the blossom end of the fruit, whereas infections of the growing fruit before harvest lead to a storage rot. Rigorous pruning is an essential canker control measure. Chemical control during the growing season is achieved by apple scab fungicides such as dithianone, captan or dodine. At leaf fall and in winter, copper fungicides are indispensible for controlling canker on highly susceptible varieties in Northern Germany. 相似文献
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陕西渭北地区盛果期苹果树腐烂病调查研究 总被引：1，自引：0，他引：1
通过对陕西渭北3县区苹果树腐烂病调查研究,结果表明:陕西渭北地区13 a生红富士苹果树腐烂病发病株率平均达56.14%,平均单株病疤数最低1.3个;中干剪锯伤口部位与主枝基部夹角处病疤百分率合计达56.8%以上;主枝基部开张角度与基部发生腐烂病率之间存在着极显著的负相关性,此结果反应出陕西渭北地区盛果期苹果树腐烂病流行早、发病重的现实及其危害特点.增强树势、尽量减少中干剪锯伤口量、开张主枝角度、重视对剪锯伤口和主枝基部的保护等是防治腐烂病的重要措施. 相似文献
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柑橘溃疡病(Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc)是严重阻碍柑橘产业发展的世界性检疫病害,防控困难,选育抗病品种为防治溃疡病的唯一有效办法。枸橼C-05是柑橘属独特的抗溃疡病种质,为抗性机理和抗病育种提供了种质基础。为了进一步评价枸橼C-05的抗性,另外收集了13份枸橼种质,对其进行溃疡病的离体和活体抗性评价。叶片形态学观察表明,14份枸橼种质存在较大的形态学差异。采用离体与活体注射接种不同浓度的柑橘溃疡病菌,根据叶片的感病症状、病斑周围黄色晕圈大小等典型溃疡病症状,综合评价枸橼类种质的抗病性。结果表明:枸橼种质之间对溃疡病的抗性存在极大差异,溃疡病的抗性评价综合病情指数显示枸橼C-05、园香橼、矮果香橼、美国枸橼、普通枸橼和印度大果综合病情指数较小,表现为极抗病或抗病,其他枸橼种质表现不同程度的感病性;枸橼种质的抗病或感病性与其叶片形态特征无关。枸橼C-05和5个抗病枸橼种质对柑橘溃疡病具有针对性的抗性,这对进一步研究抗病机理和抗病育种具有重要意义。 相似文献
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Alfredo Gravina José Cataldo Giuliana Gambetta Elisa Pardo Cecilia Fornero Sebastián Galiger Rodolfo Pienika 《Scientia Horticulturae》2011
Peel damage originated by wind is the main abiotic cause of citrus fruit discards for export in Uruguay. Natural windbreaks such as Eucalyptus and Casuarinas have not been effective in reducing it. This research was carried out during three years in a citrus orchard situated in the coastal plain of Uruguay (35° SL). The purpose of this work was to study wind climate inside the orchard, fruit seasonal sensitivity, basal leaf effect on the onset and evolution of peel damage, and the efficiency of artificial windbreaks to reduce fruit discard of ‘Ellendale’ tangor. Average wind velocity in the orchard did not exceed 5 m s−1. First peel scars were evident two weeks after petal fall and damaged fruit percentage importantly increased during the first stage of fruit growth. Low energy vortexes caused almost permanent friction between basal leaves and the developing fruitlets growing in their axil. Removal of the basal leaf decreased significantly wind damaged fruit. Natural wind flow modification through the use of semi-porous artificial windbreak nets (5 cm by 10 cm mesh) modified low energy vortexes and increased significantly the percentage of export quality fruit. We conclude that this type of net is more efficient than natural windbreaks or classical nets to reduce wind damage in citrus fruit. 相似文献
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中国果树类病毒的发生及其研究进展(英文) 总被引：4，自引：0，他引：4
概述了在中国发生且己鉴定明确的5种果树类病毒,即苹果绣果类病毒(Apple scar skin viroid,ASSVd)、梨泡状溃疡类病毒(Pear blister canker viroid,PBCVd)、葡萄黄斑类病毒-1(Grapevine yellow speckle viroid-1,GYSVd-1)、柑橘裂皮类病毒(Citrus exocortis viroid,CEVd)和桃潜隐花叶类病毒(Peachlatent mosaic viroid,PLMVd)的研究进展,包括病害的首次发现、症状特征、发病规律、检测方法与防治对策以及这些类病毒的生物学与分子生物学特性。 相似文献