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为探索更为有效的黏附素提取技术,本试验以猪源ETEC F18ab菌株为材料,通过三种方法(切割法、热洗脱法及联合热洗脱与切割法)各提取200 mL菌悬液中的黏附素,应用紫外可见分光光度计测定浓度并进行SDS-PAGE分析.结果显示,应用切割法、热洗脱法和联合热洗脱与切割法所得黏附素量分别为5.94、8.84和22.47 mg,即应用联合热洗脱与切割法提取的黏附素量明显高于单纯应用热洗脱法和切割法;SDS-PAGE分析表明,联合热洗脱与切割法提取的黏附素蛋白纯度稍低于单纯应用热洗脱法和切割法.综合分析上述结果可知,联合热洗脱与切割法更适用于大量黏附素抗原的提取. 相似文献
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不同SDS电泳法对家蚕低分子Kunitz型抑制剂分子量鉴定的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
采用15％SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和tricine—SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分剐对家蚕血液中低分子Kunitz型胰凝乳蛋白酶抑制剂CI-13的分子量进行了检测，SDS—PAGE结果为12．5kDa，而tricine SDS-PAGE结果为7．3kDa。另根据CI-13的氨基酸组成，算出分子量为7，113Da，这表明tricine SDS—PAGE的结果与氨基酸组成测定值接近，是适用于家蚕低分子Kunitz型抑制剂分子量鉴定的电泳方法。 相似文献
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将致仔猪水肿病大肠埃希氏菌107／86菌株在TSB、TSA培养基上传代，使之表达F107菌毛，大量收集菌毛化的细菌，利用热洗脱法提取菌毛抗原。粗提菌毛抗原经聚丙烯酰胺凝胶电泳可见一条约15ku的条带，以染色凝胶为对照，将未染色凝胶上的菌毛抗原条带切下，进行提纯。经免疫印迹反应，证实其条带为F107菌毛蛋白。 相似文献
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奶牛Y精子膜蛋白的提取与鉴定为深入研究Y精子特异膜蛋白在受精过程中的作用，开发经济、安全、高效的奶牛性别控制方法具有重要意义。本研究采用超声波破碎法将精子膜与精子分离，分离后的精子膜粗品采用蔗糖密度梯度离心法进行纯化。纯化的精子膜经膜蛋白提取液（去污剂）提取，透析浓缩。经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）银盐染色，成功地提取到膜蛋白。BIO—RAD凝胶成像分析仪分析得知Y精子膜蛋白至少有10种，分子量范围为7．94KD-166．65KD，其中尤以15KD的蛋白含量最多。 相似文献
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在泰乐霉素的发酵中,有关的细胞分泌素的机制尚不明了,但泰乐霉素以其原型（微溶于水）存在于细胞内至细胞表面是可能的。如是这样,其发酵后应以多次水洗脱方能以较高得率提取出来。泰乐霉素高产突变株514-1及其F1代衍生株中的4个高产株的传代单菌落菌块抑菌活性结果表明,这5株的传代均表现较大幅度的抑菌活性分化现象,且呈正态分布。本实验从中挑出了株较为高产的F3代衍生株,进行了二级摇瓶发酵,通过对其发酵醪进行连续6次水洗脱并测定洗脱液中素含量,表明第2至第6次洗脱液总的素含量占全部洗出素含量的40．0％~44．7％。 相似文献
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免疫不孕严重影响奶牛正常繁殖,相对于其他不孕类型不容易被确诊,准确对孕牛与不孕牛之间宫颈黏液AsAb的差异进行定性和定量分析,对奶牛免疫不孕的治疗研究有重要的意义。本试验将浅盘凝集检测和实际生产结果相结合确定的不孕奶牛和可孕奶牛作为研究对象,对宫颈黏液中蛋白进行SDS—PAGE电泳并对其分离条件进行优选。结果表明,本试验建立了一种在8％分离胶上,以15p~L上样量,100V,电泳3～4h的SDS—PAGE分离奶牛宫颈黏液的有效方法：对浅盘凝集检测和实际生产记录相结合确定AsAb免疫性不孕奶牛的宫颈黏液,用SDS—PAGE分离得到一种分子量为22～25kDa蛋白,初步确定为AsAb轻链：发现100％（24／24）不孕奶牛的宫颈黏液中存在AsAb轻链,14．3％（2／14）可孕牛宫颈黏液中存在AsAb轻链,但表达量明显低于不孕牛。 相似文献
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胸膜肺料放线杆菌溶血毒素特性鉴定及免疫原性研究 总被引：4，自引：0，他引：4
本文报道了胸膜肺炎防线杆菌（APP）血清型7型菌株深－8株分泌的溶血素。研究证明该株至少可分泌两种溶血素，一种为热稳定的溶血素，另一种为热不稳定的溶血素。本研究没有对热稳定的溶血素进行提纯分析，而对热不稳定的溶血素经过盐析及凝胶过滤层析提纯后，进行SDS－PAGE分析，表明该溶血素为分子量65kDa的蛋白。本研究利用纯化的65kDa的溶血素蛋白与APP所有型的阳性血清做交叉中和实验和琼脂扩散实验及动物实验，证明该溶血素蛋白具有一定的免疫原性及保护力，但其诱导的免疫反应对同源菌株的攻击只能提供部分保护。 相似文献
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为筛选出一种从牛凝固血中高效获得基因组DNA的方法,本研究选择64个凝固血样,分别进行匀浆破碎和手动剪碎的预处理,结合酚-氯仿抽提和试剂盒提取方法,提取基因组DNA,并选择抗凝血作为参照,对试验耗时、DNA数量和质量进行比较。结果表明:通过对牛凝血块进行匀浆破碎预处理,不仅缩短了蛋白酶K的消化时间,而且获得了高质量基因组DNA,浓度和纯度均达到抗凝血提取效果(P0.05)。酚-氯仿提取法相比试剂盒法,虽然得到更多量的DNA,但是DNA质量下降,而且试验耗时增加。本研究证实,匀浆破碎预处理后的牛凝固血样可以作为高质量基因组DNA的样本来源,并可替代抗凝血,解决生产中抗凝血不易获得和采集的问题。 相似文献
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全血中DNA的5种不同提取方法比较研究 总被引：7，自引：0，他引：7
比较几种从血液中提取DNA方法所需要的时间、样本量、提取的DNA纯度、产量以及成本等。结果表明,几种方法所提取的DNA质量都能达到分子生物学的试验要求,但在DNA的纯度、产量、试验时间和价格等方面存在差别。实验人员可根据自己的实验要求、实验室以及经济条件等选择适当的方法。 相似文献
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本试验采集蒙古马新鲜粪便样品,采用酚－氯仿抽提法和2种细菌基因组DNA提取试剂盒法进行样品中细菌基因组DNA的提取。通过DNA浓度和纯度的测定,并将其作为模板扩增细菌16S rDNA V3区特异性片段对提取效果进行比较,从而找出更适合蒙古马粪便中细菌基因组DNA的提取方法。结果显示,3种提取方法得到的基因组DNA均能用于PCR扩增的模板,其中B试剂盒法提取的DNA数量较多,且纯度高,更适合用于提取蒙古马肠道微生物细菌基因组DNA及后续的蒙古马肠道微生物多样性等分子生物学试验。 相似文献
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以热研2号柱花草（Stylosanthes guianensis Reyan No.2）叶片为材料,利用紫外分光光度计和凝胶电泳法比较SDS 酚抽提法、CTAB法、Trizol试剂盒和柱式植物RNAout试剂盒法提取柱花草总RNA的质量和纯度。结果表明,改良CTAB法和柱式植物RNAout试剂盒法提取的RNA的OD260 nm/OD280 nm分别是1.85和1.93,OD260 nm/OD230 nm均大于2.0。凝胶电泳结果表明,改良CTAB法及柱式植物RNAout试剂盒法均有28S rRNA和18S rRNA两条清晰的条带,且无降解。其他两种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象。将改良CTAB法和柱式植物RNAout试剂盒法提取的RNA逆转录成cDNA,cDNA能扩增出一条清晰的β actin基因片段,进一步证明了改良CTAB法和柱式植物RNAout试剂盒法提取的总RNA具有很高的纯度,其中柱式植物RNAout试剂盒法的效果好于改良CTAB法。 相似文献
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运用硫酸铵法、聚乙二醇(PEG)法、冷乙醇法对卵黄抗体进行提取,并使用间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定所得卵黄抗体的特异性,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测其纯度,用Nanodrop2000测其蛋白浓度并计算提取量,比较三种方法所得抗体的特异性、纯度和提取量。结果显示,三种提取方法所得卵黄抗体特异性高低依次为硫酸铵法、冷乙醇法、PEG法;纯度高低依次为硫酸铵法、冷乙醇法、PEG法;三种方法的提取量高低依次为PEG法、硫酸铵法、冷乙醇法。经综合分析与评价,硫酸铵法的抗体特异性较好、纯度较高、提取量也较高,且其操作方法相对简便,是比较具有优势的提取方法。 相似文献
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本研究旨在比较5种DNA提取方法对绵羊血液中布氏杆菌DNA的提取效果及对PCR检测的影响。将不同浓度的疫苗株布氏杆菌加入绵羊全血中,采用3种DNA提取试剂盒和酚/氯仿法以及碘化钠法等5种方法提取模拟的绵羊血液样品中的DNA,评价所获得DNA的浓度、纯度和完整性,并采用布氏杆菌特异性PCR进行检测。同时,对各提取方法所需时间及经济成本进行了比较。结果表明,各方法均能提取获得绵羊全血中布氏杆菌DNA,3种试剂盒和碘化钠法获取布氏杆菌DNA的效果相同,而酚/氯仿法获取布氏杆菌DNA的效率最低或存在PCR抑制剂而不适合用于绵羊血液中布氏杆菌的PCR检测。碘化钠法具有耗时较短、成本低、方便的优点,是从绵羊血液中提取布氏杆菌DNA的良好方法。本研究结果为临床绵羊血液中布氏杆菌DNA提取方法的选择提供了参考。 相似文献
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水貂Mustla Vison微量血DNA的提取与纯化 总被引：2，自引：2，他引：0
作者通过采取活体水貂少量血液 ( 5 0 μL) ,利用蛋白酶K消化 ,酚、氯仿法抽取DNA ,结果测量获得的数据和曲线表明 :用 5 0～ 5 0 0 μL冻存血可以获得具有一定纯度和数量的DNA ,完全可以满足RAPD分析的PCR反应所需 相似文献
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从白柳皮中提取分离水杨苷,并通过纯化工艺,制备水杨苷对照品。采用大孔树脂分离、正丁醇萃取、重结晶方法从白柳皮中提取水杨苷,经熔点和比旋度测定、元素分析、红外光谱、液相色谱-质谱联用和核磁共振谱进行水杨苷的鉴别,并采用HPLC-UV进行水杨苷纯度测定。结果表明其含量为99.19%,纯度大于99%,符合中药标准品(供含量测定用)的要求。 相似文献
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