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响应面法优化提纯牛肉肌红蛋白 总被引：1，自引：0，他引：1
以牛背肌肉为原料,筛选Tris-HCl复合提取液pH、提取液浓度、提取时间、料液比、硫酸铵溶液饱和度等对肌红蛋白提取有影响的因素,并从中选出具有显著影响的因素(提取液pH、提取液浓度、硫酸铵溶液饱和度)进行响应面优化试验,确定牛肉肌红蛋白提取最优工艺参数提取液pH为8.15、硫酸铵溶液饱和度90.93%、提取时间1.63 h。对粗提蛋白进行纯化及层析交换分离,得到纯度较高的肌红蛋白含量2.14 mg/mL,总蛋白浓度2.39 mg/mL,样品纯度达到91.95%。 相似文献
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鸭肉肌内磷脂水解酶的提取及相关酶系的酶活测定 总被引：1，自引：0，他引：1
为了优化肌内磷脂水解酶的提取过程,建立各种鸭肉肌内磷脂水解酶活的测定方法。采用pH 7.5、8.0、8.5的0.1 mol.L-1的Tris-HCl缓冲液提取鸭肉肌内磷脂水解酶,用饱和度范围为0～90%的硫酸铵进行盐析,研究新鲜鸭肉及板鸭中酸性脂肪酶、中性脂肪酶、总磷脂酶、磷脂酶A2(PLA2)、磷脂酶C(PLC)和磷脂酶D(PLD)的活力。结果表明,肌内磷脂水解酶的最佳pH为8.0,最佳盐析条件为70%饱和度的硫酸铵溶液。透析过后的粗酶液中酸性脂肪酶活略大于中性脂肪酶,磷脂酶活次之。 相似文献
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枯草芽孢杆菌B-916胞外抗菌蛋白质的性质 总被引：12，自引：0，他引：12
用硫酸铵分级沉淀枯草芽孢杆菌B-916胞外抗菌蛋白质,共获得8个蛋白质粗提物,其中硫酸铵饱和度为40%~50%和50%~60%提取的粗蛋白质具有较强的抑菌活性,研究结果表明:硫酸铵饱和度40%~50%和50%~60%提取的粗蛋白质浓度分别为17.261μg/m l和18.899μg/m l,上述两者对水稻纹枯病菌和水稻恶苗病菌有较强的抑菌活性,对马铃薯晚疫病菌则没有抑菌活性;当温度高于40℃时抑菌活性均降低,但在120℃时仍有部分抑菌活性;对pH值适应范围较宽,但在pH值为13.6时抑菌活性均丧失;经蛋白酶K、蛋白酶E、胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶处理后,抑菌活性均下降。SDS-PAGE电泳结果表明枯草芽孢杆菌B-916能分泌多种蛋白质,其中硫酸铵饱和度40%~50%和50%~60%提取的粗蛋白质中相对分子质量为48 000的蛋白质可能为抗菌蛋白质。硫酸铵饱和度40%~50%和50%~60%提取的粗蛋白质经Sephadex G-100层析后检测到4个蛋白质吸收峰。 相似文献
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[目的]探讨磷酸盐缓冲液的pH和浓度在分级盐析时,对革胡子鲶肠道各组分蛋白/肽的影响。[方法]以不同浓度和pH的磷酸盐缓冲液作为组织匀浆缓冲液,在硫酸铵饱和度为20%、40%、60%、80%和100%的条件下,对革胡子鲶肠道抗菌蛋白/肽进行分级盐析,并对盐析产物进行称重、电泳检测和抑菌活性分析。[结果]磷酸盐缓冲液的pH为6.0或7.4时,其浓度对盐析产物产量、蛋白沉淀和抑菌效果无显著影响。而pH为8.0、浓度为0.05 mol/L时,硫酸铵饱和度为60%和100%的粗蛋白/肽的产量显著高于浓度为0.02 mol/L的磷酸盐缓冲液粗蛋白含量;大分子蛋白能更好地在硫酸铵饱和度为20%和40%时沉淀下来,而在饱和度为60%、80%和100%能获得分子量相对较小的抗菌蛋白/肽。磷酸盐缓冲液的pH和浓度对抑菌效果无显著影响。[结论]pH8.0,浓度为0.05 mol/L的磷酸盐缓冲液更适于革胡子鲶肠道抗菌蛋白/肽的提取。 相似文献
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对奉化水蜜桃多酚氧化酶(PPO)的提取分离工艺进行了研究,结果表明,pH值对该酶的提取率影响最大,该酶的最佳提取条件为pH值8.0,提取时间40min,料液比1∶12(m∶V,g∶mL),离子强度0.2mol/L。硫酸铵分级沉淀研究表明,该酶主要在硫酸铵饱和度为50%～80%时发生沉析,故可利用这段浓度范围对该酶进行纯化,其纯化倍数为13.21。同时,水蜜桃PPO对儿茶素表现出很强的亲和性,其酶促反应米氏常数(Km)为0.22mmol/L,最大反应速度(vmax)为251.69U/min。 相似文献
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裙带菜凝集素的分离及性质研究 总被引：3，自引：0，他引：3
裙带菜（Undaria pinnatifida)经Tris-HCl缓冲液粗抽提，然后进行硫酸铵分级实验，测定盐析范围为50％硫酸铵饱和度，经50％硫酸铵饱和度分级后，裙带菜凝集素（UPL）纯化倍数为7．7，总活力回收为167％，UPL粗抽提液中糖的质量分数为5．72％。该凝集素在pH为4．0－10．14时均为活性，但在pH为5．0－9．51时活性较高，pH等于4．0时活力保留25％，pH等于10．14时活力保留50％，该凝集素不被D－果糖，葡萄糖，γ－球蛋白所抑制。 相似文献
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转基因玉米中植酸酶蛋白沉淀条件探索 总被引：2，自引：0，他引：2
为了对玉米中表达的植酸酶蛋白的酶学性质进行深入研究,以转基因玉米籽粒中提取的植酸酶粗提液为研究材料,探索了植酸酶和总蛋白的溶解度与硫酸铵饱和度之间的关系,结果显示在0~60%硫酸铵饱和度范围沉淀的植酸酶仅占初提液中总植酸酶含量的1.85%,而在此范围内沉淀的总蛋白却占初提液的总蛋白含量的57%,植酸酶比活为0.44 U/mg;在60%～80%硫酸铵饱和度范围沉淀的植酸酶和总蛋白分别占初提液中各自含量的58%和10%,植酸酶比活为84.4 U/mg;在80%～90%硫酸铵饱和度范围沉淀的植酸酶收率占初提液中含量的1.9%。因此选用60%～80%硫酸铵饱和度分级沉淀植酸酶,在此条件得到的植酸酶比活比粗提液的植酸酶比活（13.8 U/mg）高6.1倍。 相似文献
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研究了厌氧真菌木聚糖酶粗酶的提取方法及其性质。结果表明 ,在 2 0℃ ,厌氧真菌木聚糖酶粗酶的硫酸铵最佳盐析饱和度为 70 %。 4 5℃烘干得到木聚糖酶粗酶制剂 ,该制剂比活力为 75 6 2U·g-1 。对其性质的初步研究表明 ,该酶的最适温度为 5 0℃ ,最适pH值为 5 0～ 6 0。此外 ,其酶活性在 37～ 5 0℃、pH4 0～ 1 1 0范围内较稳定 相似文献
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用pH7.2磷酸提取缓冲液从乌贼墨汁澡提取多酚氧化酶，提取的粗酶液经30%-80%饱和度硫酸铵分级沉淀、透析、DEAE-SepharoseCL-6B柱层析和SephadexG-150柱层析后，得到纯化的多酚氧化酶，纯化们数为10.78，纯化后的酶液经聚丙烯酰胺凝胶电泳，分别采用银染色和多酚氧化酶活性染色均显示一条电泳带。 相似文献
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乌贼墨中多酚氧化酶的分离及纯化 总被引：14，自引：0，他引：14
用pH7.2磷酸提取缓冲液从乌贼墨汁澡提取多酚氧化酶，提取的粗酶液经30%-80%饱和度硫酸铵分级沉淀、透析、DEAE-SepharoseCL-6B柱层析和SephadexG-150柱层析后，得到纯化的多酚氧化酶，纯化们数为10.78，纯化后的酶液经聚丙烯酰胺凝胶电泳，分别采用银染色和多酚氧化酶活性染色均显示一条电泳带。 相似文献
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[目的]确定黄芩总黄酮与黄芩苷提取及纯化的最佳工艺条件。[方法]以黄芩总黄酮与黄芩苷得率作为评价指标,采用单因素及正交试验进行优选。[结果]最优工艺为:取黄芩粗粉,加10倍量水,煎煮2次,1.0 h/次;离心所得上清液调pH值至1.5,60℃保温30 min,所得沉淀加适量水搅匀,调pH值至中性,加等量乙醇醇沉;上清液再调至pH值为1.5,60℃保温30 min,静置、离心所得沉淀,水洗至中性,60℃真空干燥得黄芩提取物。其中,黄芩总黄酮、黄芩苷含量分别可达94.15%、80.15%。[结论]该工艺合理、可行,适合黄芩总黄酮、黄芩苷的工业化生产。 相似文献
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木瓜超氧化物歧化酶粗酶提取工艺初探 总被引：3，自引：2，他引：3
[目的]筛选木瓜超氧化物歧化酶(SOD)粗酶最佳提取工艺。[方法]以重庆綦江皱皮木瓜为原料,以溶解SOD,去除杂蛋白,沉淀SOD为基本工艺程序,对SOD的4种提取工艺进行比较研究。同时对4种工艺提取的SOD单位蛋白、活性、比活的检测结果进行比较。[结果]磷酸缓冲液的用量对提取效果有直接影响,缓冲液与木瓜之比为3∶1,测得其比活最高,为54.55 U/mg。粗酶液加2.5倍体积的氯仿-乙醇混合液去除杂蛋白效果比较明显。粗酶液添加(NH4)2SO4到90%饱和度沉淀SOD效果较好,比活较提取液上升44.52 Umg。[结论]木瓜SOD粗酶最佳提取工艺条件:温度为25～30℃,pH值为7.8,0.05 mol/L磷酸缓冲液与木瓜比例为3∶1,用2.5倍体积的氯仿-乙醇混合液去杂蛋白,添加55%(NH4)2SO4至90%饱和度沉淀SOD。 相似文献
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研究了不同冷冻离心温度、冷冻离心转速和不同盐析剂浓度对盱眙野生地皮菜中蓝藻蛋白提取纯度的影响,从而得到蓝藻蛋白最佳提取条件为:冷冻离心时温度为4℃,冷冻离心转速为10 000 r/m in,硫酸铵盐析浓度为60%。 相似文献
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纤维素酶提取工艺及酶学性质的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
[目的]探讨纤维素酶的最佳提取工艺和最佳反应条件。[方法]以里氏木霉Rut C-30为发酵菌种,在30℃、摇床转速170 r/min条件下培养8 d,发酵生产纤维素酶,用盐析技术对粗酶液进行分离纯化,通过正交实验法探讨了纤维素酶的提取工艺条件。并以羧甲基纤维素钠酶活力为指标,对该酶的最佳反应条件和稳定性进行了研究。[结果]纤维素酶的最佳提取条件是:提取时间为16 h、盐析饱和度为70%、pH值为4.8。纤维素酶的最佳反应条件是:pH值为4.8、温度为60℃。酶在pH 3.6~7.0时较稳定,在78℃保温30 min下的残留酶活为50%。[结论]该研究为酶的工业化生产提供参考数据。 相似文献
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黄蜀葵花器官中β-半乳糖苷酶的提取纯化和酶学特性研究 总被引：2，自引：0，他引：2
目的:从黄蜀葵花中提取并初步纯化β-半乳糖苷酶。方法:以总酶活为考察指标,通过正交试验确定该酶的最佳提取条件。以酶活力和蛋白质含量为考察指标,确定盐析法的硫酸铵饱和度。以ONPG为底物,研究该酶的最适反应pH、温度及温度稳定性。结果:从黄蜀葵花中提取β-半乳糖苷酶的最佳提取条件是以3倍量(V/W)磷酸盐缓冲液4℃提取12h。以30%和70%为盐析的最佳硫酸铵饱和度。β-半乳糖苷酶在55℃总酶活性最高,热稳定性较好,70℃以上时活性迅速下降。 相似文献
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以羔羊皱胃为原料,研究了硫酸铵和食盐盐析法纯化羔羊皱胃酶的工艺条件,系统分析了食盐饱和度、pH、盐析温度以及盐析时间对羔羊皱胃酶纯化效果的影响。结果表明,硫酸铵不适宜用于盐析羔羊皱胃酶,而食盐是羔羊皱胃酶适宜的盐析剂。食盐盐析羔羊皱胃酶的适宜盐析条件为:食盐饱和度55%~65%,pH 4.00~4.60,盐析温度4℃,盐析时间16 h。 相似文献
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丙酮丁醇梭菌中丁醇脱氢酶的分离纯化及酶学性质研究 总被引：1，自引：0，他引：1
对丙酮丁醇梭状芽孢杆菌(Clostridium acetobutylicum)中丁醇代谢途径相关的关键酶之一依赖NADH的丁醇脱氢酶(Butanol Dehydrogenase,BDH)的分离纯化及酶学性质进行了研究.结果表明:粗酶液经过两次饱和度为20%和60%的硫酸铵沉淀和SephadexG-75凝胶柱层析,丁醇脱氢酶的纯化倍数提高至12.7倍,回收率为28.9%.丁醇脱氢酶的最适反应温度是35℃,最适pH是6.0. 相似文献