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1.
根据GenBank上已发表的猪瘟病毒(CSFV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的全基因序列,进行对比分析,分别设计合成两对能特异性扩增CSFV、BVDV的引物。经过条件优化后,建立了检测CSFV和BVDV的双重RT-PCR方法,扩增两种病毒的片段,大小分别为938、650 bp。应用该方法对11批牛睾丸细胞、7批胎牛血清、60个批次的猪瘟细胞苗、10份全血样及10份组织样进行检测。通过试验证明,所建立的方法具有良好的特异性和敏感性,为防止猪瘟细胞苗的污染及进行CSFV和BVDV鉴别诊断提供了有效方法。 相似文献
2.
为了解2020年新疆部分地区规模化猪场的猪瘟病毒（CSFV）抗体水平,本试验应用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）,对采自18个规模化猪场的1 085份血清样品进行猪瘟病毒抗体检测。结果显示,CSFV抗体平均合格率为83.59%（907/1 085）,高于国家规定标准（70%）,平均阻断率为（66.99±25.09）%。A、B、C、D、E地区间猪瘟病毒抗体水平差异显著（P<0.05）。各规模猪场猪群抗体合格率在70%~87%之间,并且差异显著。此次检测结果表明,6个不同地区平均抗体合格率中,A、B、C、F地区抗体水平整齐度良好,E地区抗体水平偏低,变异系数偏大,抗体整体水平较差。大型规模养猪场猪瘟抗体合格率普遍高于中、小型规模养猪场,说明大型规模养猪场在猪瘟的防控方面具有一定优势。该结果可为新疆地区规模化猪场的猪瘟免疫防控提供参考。 相似文献
3.
《畜牧与兽医》2020,(11)
为了建立一种经济可靠的猪瘟病毒(CSFV)抗体检测方法,本研究利用杆状病毒表达系统表达可溶性CSFV E2蛋白,并免疫BALB/c小鼠,制备了45株可稳定分泌抗CSFV E2蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞。经CSFV阳性血清阻断试验筛选出4株具有阻断活性的McAb,并经抗原表位鉴定确定单抗15A9识别的是可用于鉴别CSFV和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的线性表位TAVSPTTLR。利用辣根过氧化物酶(HRP)标记的15A9建立了CSFV阻断ELISA抗体检测方法,用此方法检测猪瘟疫苗免疫的猪血清,免疫后2周即可检测到抗体,且该方法检测BVDV阳性血清为阴性。本研究建立的CSFV阻断ELISA抗体检测方法为CSFV的疫苗免疫效果评估及其与BVDV的抗体鉴别提供了一种有效、便捷的方法。 相似文献
4.
猪瘟病毒重组E2蛋白PPA-ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用 总被引：3，自引：0，他引：3
以纯化的猪瘟病毒（CSFV）重组E2蛋白为包被抗原,辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白为二抗,组装了检测CSFV抗体的PPA-ELISA诊断试剂盒。该试剂盒与其他7种常见猪病毒（PRRSV、PPV、JEV、PCV-2、PEDV、PRV、TGEV）及牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的阳性血清不发生交叉反应;批内重复性试验的变异系数小于5%,批间重复性试验的变异系数小于10%;与间接血凝试验相比较,符合率、敏感性和特异性分别为86.2%,85.4%,87.2%;与IDEXX ELISA试剂盒相比较,符合率、敏感性和特异性分别为91.3%,93.2%,88.7%。表明本试验研制的E2-PPA-ELISA抗体检测试剂盒具有良好的重复性、敏感性和特异性,将为CSFV的快速诊断、免疫猪群抗体水平监测和CSFV流行病学调查提供一种快速、简便的血清学诊断方法。 相似文献
5.
为了解新疆地区规模化猪场猪瘟、蓝耳病、伪狂犬病gE抗体水平,研究选取6个规模化种猪场,共采集肥育猪血清480份,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）抗体检测方法,对其进行猪瘟病毒（CSFV）、蓝耳病病毒（PRRSV）、伪狂犬病gE蛋白（PRV-gE）、伪狂犬病gB蛋白（PRV-gB）抗体检测。结果显示,在肥育猪中,CSFV抗体阳性率为75.00%～100.00%,PRRSV抗体阳性率为77.50%～98.75%,PRV-gE抗体阳性率为0～21.25%;PRV-gB抗体阳性率为92.50%～100.00%。通过结果可知,该地区肥育猪CSFV、PRRSV、PRV-gB的抗体阳性率均超过了国家规定的70%。试验结果可为新疆地区肥育猪主要猪病流行病学调查提供参考,也可为猪场免疫程序的制定和调整提供支撑。 相似文献
6.
为了解某规模化猪场猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)的抗体水平以及猪伪狂犬病野毒感染情况,研究应用ELISA检测技术对该场307份血清进行了CSFV、PRRSV抗体检测,63份血清进行了PRV-gB、PRV-gE蛋白抗体检测,猪群总体CSFV抗体阳性率为81.11%;PRRSV抗体阳性率为90.23%;PRV-gB蛋白抗体阳性率为95.24%;PRV-gE蛋白抗体阳性率为69.84%,并对不同类别猪群的抗体水平做出具体分析。该结果为了解该猪场3种常见传染病的整体免疫水平,进一步制定合理的免疫程序和防治措施提供参考。 相似文献
7.
参照资料选择并验证了一对牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,简称BVDV)特异性引物,摸索了检测BVDV的RT-PCR方法的不同反应条件,选择出了最佳条件,建立了特异性的RT-PCR检测方法。并对已做过CSFV检测的52份病料进行BVDV的回归性检测,其中BVDV检测结果为阳性的病料7份,表明江西省部分猪群存在BVDV的感染,结合之前做过的猪瘟病毒(CSFV)检测结果,可说明江西省部分猪群存在BVDV的单纯感染和BVDV与CSFV的混合感染。 相似文献
8.
为同时检测猪源临床样本中的猪瘟病毒(CSFV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV),基于这两种病毒的5'UTR序列设计特异引物和TaqMan探针,建立了一种检测CSFV和BVDV的双重荧光RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、最低检出限和重复性等进行了评价。结果显示,该方法只对CSFV和BVDV呈现特异性扩增,对猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪圆环病毒2型不发生交叉反应,对阳性标准对照CSFV-5'UTR-RNA、BVDV-1-5'UTR-RNA和BVDV-2-5'UTR-RNA,最低可分别检出27、36和32拷贝/μL。该方法的组内和组间试验Ct值变异系数介于0.11%～1.20%,具有良好的重现性。对152份猪组织样本用该方法进行CSFV和BVDV核酸检测,结果检出CSFV阳性样本16份,BVDV阳性样本3份,CSFV和BVDV双阳性样本1份,与国标和OIE《陆生动物诊断试验和疫苗》相应的荧光RT-PCR方法阳性符合率为100%。结果表明,本研究建立的双重荧光RT-PCR方法可用于临床样本中的CSFV和BVDV检测,从而为猪瘟防制和净化提供了一种有效的技术手段。 相似文献
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冀鲁豫交界地区PCV-2和CSFV血清抗体调查 总被引：2，自引：0，他引：2
调查了冀鲁豫三省交界地区规模养殖场猪群圆环病毒2型(PCV-2)抗体阳性率与其他地区的差异和流行病学特点、PCV-2抗体阳性率对猪瘟病毒(CSFV)抗体的影响。在该地区选择了7个猪场采集了222份血清,用ELISA试剂盒检测PCV-2型和CSFV的抗体水平并进行统计学分析。检测结果表明,7个养猪场的猪群都感染过PCV-2,发生疑似感染的猪病例中PCV-2的平均抗体阳性率在62.2%~72.0%之间,高于其他地区。而猪瘟免疫合格率仅有32.4%~42.4%。PCV-2抗体水平高的猪,猪瘟抗体水平低。表明该地区PCV-2的感染情况比较严重。 相似文献
10.
采用RT-PCR及PCR技术,对广西梧州市7个县（市、区）屠宰场2015—2016年送检的1 304份猪组织样品（肺脏、淋巴结、脾脏）进行高致病性蓝耳病病毒（HPRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）核酸检测,对7个规模场送检的70份病死猪组织病料样品（肺脏、淋巴结、脾脏）进行HPRRSV、CSFV、伪狂犬病病毒（PRV）、圆环病毒（PCV）核酸检测。采用ELISA技术,对梧州市7个县（市、区）送检的8 572份血清检测猪瘟免疫抗体,对2 066份血清检测猪蓝耳病免疫抗体。结果显示：HPRRSV、CSFV核酸检测均为阴性;规模场病死猪组织病料的PRV核酸阳性率为14.3%,PCV为57.1%;猪瘟免疫抗体合格率为90.41%,蓝耳病免疫抗体合格率为73.48%。监测结果表明：梧州市流行的生猪高热病主要涉及猪伪狂犬病和猪圆环病毒病2种病毒病;猪蓝耳病和猪瘟的强制免疫,有效控制了该地主要猪病毒性疫病的发生与流行。 相似文献
11.
根据GenBank中BVDV-1、BVDV-2、CSFV及新出现瘟病毒的基因序列,设计2对特异引物,建立了能鉴别诊断BVDV与CSFV的Nested-PCR检测方法;确定其方法的特异性、敏感性、稳定性。建立的Nested-PCR能从BVDV标准毒株、猪源BVDV毒株中扩增198bp特异性片段,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒检测结果为阴性。结果表明,该方法具有较好特异性;其敏感性可检测到0.195fg RNA模板量;经重复性试验表明该方法具有良好稳定性。初步应用检测表明,猪BVDV阳性率较高,达36.0%;牛血清及其制品、猪瘟活疫苗BVDV污染严重。本试验建立的Nested-PCR具有敏感、特异和稳定等特点,可用于临床诊断和流行病学调查。 相似文献
12.
CHENG Fu-liang LI Fu-hui LIU Yang-qing NIE Zhao-jing CHEN Tian-tian FANG Dong FAN Mei-na GU Wei WANG Chun-feng 《中国畜牧兽医》2016,43(11):2900-2906
To establish a sensitive,specific and efficient method of antibody detection for porcine reproductive and respiratory syndrome virus（PRRSV),PRRSV N protein was expressed through prokaryotic expression system and purified by affinity chromatography to act as a coating antigen.Then an indirect ELISA detection method for serum PRRSV antibody was finally set up after the optimization of reaction conditions.Besides,the research also involved cross reaction,repeated experiments,and comparison with other ELISA kits.It was determined that the optimum concentration of coating antigen was 2 μg/mL and that the dilution ratio for serum was 1:100,with 30 min of incubation and 10 min of chromogenic reaction.With this method,positive serum samples of five common swine pathogens,including classical swine fever virus（CSFV),porcine circovirus（PCV）and porcine pseudorabies virus（PRV）and so on,were tested,and the results were negative.Both intra-assay and inter-assay coefficients of variation were below 10%,and the comparison with commercial ELISA kits indicated that its accuracy was 94.7%.So this indirect ELISA,which had been established in this research,could provide a rapid diagnosis for swine infected by wild PRRSV and applied in epidemiological investigation,as a convenient and efficient serological antibody detection method. 相似文献
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为建立一种敏感、特异、快速的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体检测方法,本研究利用原核表达技术表达了PRRSV N蛋白,亲和层析纯化后作为包被抗原,通过对各反应条件优化选择,建立了PRRSV血清抗体的间接ELISA检测方法,并进行了交叉反应和重复性试验,以及同类成品试剂盒间的应用效果对比试验。最终确定了抗原包被最佳浓度为2 μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100,血清及酶标二抗孵育时间均为30 min,显色时间为10 min,检测猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪伪狂犬病病毒等5种常见猪病病原的阳性血清均为阴性;该ELISA检测方法批内和批间重复性的变异系数均小于10%;与商品化ELISA试剂盒效果比较显示符合率为94.7%。本研究建立的间接ELISA方法将为猪群感染野毒PRRSV后的快速诊断及流行病学调查提供一种简便易行、快速高效的血清学抗体检测方法。 相似文献
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旨在建立猪瘟病毒（CSFV）化学发光抗体检测方法,本研究以CSFV E2蛋白作为包被抗原,山羊抗猪IgG-HRP抗体作为酶标抗体,鲁米诺为底物溶液,优化检测方法,成功建立CSFV化学发光抗体检测方法。该方法能在室温20 min内完成对CSFV抗体血清特异性检测,灵敏度与商品化CSFV抗体检测试剂盒相当,且与A型口蹄疫病毒、O型口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、塞内卡病毒、非洲猪瘟病毒抗体阳性血清均无交叉反应;批内变异系数为1.80%~6.88%,批间变异系数为1.11%~9.18%,重复性好。通过对152份田间猪血清样品的检测并与商品化CSFV抗体检测试剂盒检测结果进行比较,其Kappa值为0.929,具有高度的一致性。综上表明,本研究建立的CSFV化学发光抗体检测方法特异性强、灵敏性高、重复性好、简单快速,可应用于临床血清CSFV抗体的检测。 相似文献
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以猪瘟野毒E2蛋白为包被抗原、辣根过氧化物酶标记的猪瘟野毒单抗作为酶标抗体,建立检测猪瘟野毒抗体的阻断ELISA方法。猪瘟野毒E2最适包被浓度为0.03μg/mL,待检血清最适稀释度为1∶4,酶标猪瘟野毒单抗稀释度为1∶1 000。用建立的阻断ELISA方法检测369份临床阴性血清,计算阻断率,确定临界值,阻断率>40%为猪瘟野毒抗体阳性,阻断率≤40%为猪瘟野毒抗体阴性。用建立的ELISA方法检测84份血清,其中78份为免疫猪瘟疫苗的血清,6份为猪瘟病毒感染血清。结果显示,78份免疫血清均检测为猪瘟野毒抗体阴性,6份猪瘟感染血清均检测为猪瘟野毒抗体阳性。因此可初步判定该方法可用于鉴别诊断猪瘟病毒自然感染动物和C株疫苗免疫动物的血清抗体,并为临床检测猪瘟野毒抗体提供便捷、快速,精准的检测工具,对猪瘟的临床诊断、预防以及猪瘟净化工作具有非常重要的参考意义。 相似文献
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表达猪瘟病毒E2蛋白的重组腺病毒对猪的免疫效力评价 总被引：1，自引：0，他引：1
为了进一步验证含有猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒（rAdV—E2）在猪体上的免疫效力,将rAdV—E2按108TCID50／头接种猪2次,同时用野生型腺病毒wtAdV作为阴性对照,当抗体上升到一定程度后用致死剂量的猪瘟强毒石门株进行攻击。结果表明,rAdV—E2免疫组（n=5）所有免疫猪在加强免疫后均产生了猪瘟特异性中和抗体,并于加强免疫后3w达到峰值,攻毒后所有猪只抗体迅速升高,除了一头猪短期体温升高外,未出现任何其它临床症状;而野生型腺病毒wtAdV免疫组（n=5）猪只在攻毒前一直没有检出特异性抗体,攻毒后全部出现典型的猪瘟临床症状和严重的病毒血症,剖检时可见典型猪瘟病理变化。这表明构建的猪瘟病毒E2基因重组腺病毒rAdV—E2免疫猪后产生了很好的免疫效果,有望成为具有开发价值的活载体疫苗。 相似文献
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Limited BVDV transmission and full protection against CSFV transmission in pigs experimentally infected with BVDV type 1b 总被引：1，自引：0，他引：1
Bovine viral diarrhea virus (BVDV) in pigs may interfere with the detection and epidemiology of classical swine fever virus (CSFV). To investigate the importance of BVDV infections in pigs, first we studied the transmission dynamics of a recent BVDV field isolate. Subsequently, the protection of BVD antibodies against transmission and clinical disease of CSF virus was studied. Only limited transmission of BVDV occurred (R = 0.20), while no CSFV transmission occurred in pigs with BVDV antibodies. We concluded that BVDV transmission among pigs is possible, but seems to be limited and thus the virus should disappear from a population if no new introductions occur. Furthermore, the presence of BVD antibodies may completely prevent the transmission of CSFV and therefore could protect pigs against classical swine fever. It was also noticed that double infections with BVDV and CSFV were incorrectly diagnosed using the neutralization peroxidase linked assay (NPLA), which is the golden standard for antibody detection. This might hamper the diagnosis of CSF in herds with a high BVD prevalence. 相似文献