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1.
3种中药单体成分对猪孤雌激活胚胎体外发育效果的影响 总被引：2，自引：2，他引：0
为了建立良好的猪胚胎体外培养体系,以体外成熟培养的卵母细胞为材料,研究中药单体成分川芎嗪（Lig）、小檗碱（BR）和淫羊藿苷（Ica）对猪孤雌激活胚胎体外培养效果的影响。以NCSU-23基础培养液为对照组,采用同一种孤雌激活方案,在培养液NCSU-23中分别添加中药单体成分川芎嗪、小檗碱和淫羊藿苷的小、中、大剂量（Lig1、Lig2、Lig3;BR1、 BR2、BR3;Ica1、Ica2、Ica3）为3个试验组,比较了各组猪孤雌激活早期胚胎的发育效果,从而进行中药单体成分最佳浓度的筛选。结果显示：①孤雌激活胚胎体外发育至48 h的卵裂率和第7天的囊胚发育率, Lig1组与对照组和Lig2组之间差异显著（P< 0.05）,与Lig3组差异极显著（P<0.01）。②BR2组的卵裂率与对照组和BR3组之间差异显著（P<0.05）,与BR1组无显著差异（P>0.05）。第7天囊胚发育率BR2组显著高于其他各组（P<0.05）,其他各组之间无显著差异（P>0.05）。③Ica2组胚胎发育至48 h的卵裂率和第7天的囊胚发育率均显著高于其他各组（P<0.05）,而其他各组之间无显著差异（P>0.05）。由此可见,在NCSU-23基础液中添加3种中药单体成分最佳浓度均能显著提高猪孤雌胚体外发育效果。 相似文献
2.
试验旨在探讨卵丘细胞包裹层数、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)对兔卵母细胞体外成熟培养的影响。分别采用切割法和针刺挤压法取母兔卵巢表面的卵丘卵母细胞复合体(cumulus oocyte complexes,COCS),将获取的COCS在基础培养液中添加不同浓度表皮生长因子(0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、30ng/mL)及不同浓度的谷胱甘肽(0μmol/mL、0.5μmol/mL、1.0μmol/mL、1.5μmol/mL、2.0μmol/mL)进行体外成熟培养并观察第一极体排出率。结果表明:①手术刀切割法和针刺挤压法平均回收卵母细胞率分别为(22.83、39.29)枚,针刺挤压法显著高于手术刀切割法(P<0.05)。②3层以上卵丘细胞包裹的卵母细胞体外成熟率为81.27%,显著高于1~3层卵丘细胞包裹的体外成熟率63.75%和裸卵细胞体外成熟率23.45%(P<0.05)。③添加20ng/mL的EGF对兔卵母细胞体外成熟培养后成熟率为82.14%,效果最好,且显著高于对照组10ng/mL和30ng/mL EGF组(P<0.05)。④添加不同浓度的谷胱甘肽可以促进和提高兔卵母细胞体外成熟率,其中添加1.0μmol/mL的谷胱甘肽时,卵母细胞成熟率为71.44%,与添加1.5μmol/mL组的相比差异不显著(P>0.05),但显著高于其他组(P<0.05)。结论为添加20ng/mL的EGF和1.0μmol/mL谷胱甘肽,对用针刺挤压法获得3层以上卵丘细胞包裹的兔卵母细胞体外培养效果最佳。 相似文献
3.
将收集的猪COCs置于添加不同浓度(0.0,0.3,0.6,1.2μmol/L)甘草酸单铵盐(monoammonium glycyrrhizinate, MAG)的卵母细胞体外成熟培养液中培养46 h,统计成熟率，通过免疫荧光染色检测成熟卵母细胞ROS表达水平；对成熟卵母细胞体外受精，于胚胎培养液内体外培养48,120 h,分别统计体外受精胚胎卵裂率、囊胚率，并用Hochest荧光染色检测囊胚总细胞数；结合成熟率及IVF胚胎发育囊胚率选定最佳添加浓度，在体外成熟培养液中添加最适浓度MAG,以0μmol/L MAG为对照组，体外培养46 h后，利用免疫荧光染色检测猪成熟卵母细胞的线粒体膜电位水平和细胞凋亡水平。结果显示，与对照组相比，不同浓度MAG处理组猪卵母细胞体外成熟率均有所提高，但差异均不显著(P>0.05);不同浓度MAG添加均可降低猪卵母细胞ROS水平，与对照组相比，0.3,0.6μmol/L组差异显著(P<0.05),1.2μmol/L组差异极显著(P<0.01)。0.3μmol/L添加组显著提高了猪体外受精囊胚率(P<0.05),但不同MAG添加组对... 相似文献
4.
为研究表皮生长因子(EGF)、β-巯基乙醇(β-ME)、亚硫磺酸(HTAU)对牛卵母细胞体外成熟(IVM)及孤雌激活胚胎体外发育(IVC)效果的影响,实验采集牛卵巢采用切割法收集卵丘-卵母细胞复合体(COCs)随机处于不同浓度EGF、β-ME培养液成熟培养24 h后孤雌激活,研究其在不同胚胎培养液中的后续发育,以期筛选出最好的牛卵母细胞IVM-IVC条件。结果表明:添加25、50、100 ng/mL EGF组的成熟率、卵裂率均高于对照组,其中50 ng/mL EGF组的成熟率、卵裂率与对照组差异显著(P<0.05);50、100、500μmol/L的β-ME对牛卵母细胞体外成熟没有促进作用;50 ng/mL EGF与50、100μmol/Lβ-ME组合并无协同作用;胚胎培养基中添加不同浓度EGF对早期胚胎的体外发育无显著影响;而添加100μmol/Lβ-ME组的囊胚率、囊胚细胞数均极显著高于对照组(P<0.01);在成熟液中添加50 ng/mL EGF和100μmol/Lβ-ME、胚胎培养液中添加0.5 mmol/L HTAU孤雌胚发育最好。 相似文献
5.
EGF和IGF-1对山羊卵母细胞体外成熟的影响 总被引：3，自引：0，他引：3
研究了在培养液中添加不同浓度的EGF、IGF-1以及EGF联合IGF-1对山羊有腔卵母细胞体外成熟的影响。结果表明: (1)10, 20, 30μg/LEGF对山羊卵母细胞体外成熟无显著影响(P>0.05)。(2) 10μg/L的IGF-1对山羊卵母细胞体外成熟无显著影响(P>0.05); 20, 30μg/L的IGF-1能显著提高山羊卵母细胞体外成熟率 (P<0.05)。(3)添加 10μg/LEGF+20μg/LIGF-1组卵母细胞体外成熟率显著高于添加 20μg/L的IGF-1组(P<0.05),极显著高于添加 10μg/LEGF组和对照组(P<0.01)。可见,EGF和IGF-1对山羊卵母细胞体外成熟有协同作用。 相似文献
6.
本实验旨在探究甲基-β-环糊精载胆固醇(CLC)对GV期猪卵母细胞冻融后体外成熟培养后成熟率、凋亡蛋白表达、透明带硬化时间及精-卵结合能力的影响。采用0(对照)、0.5、5、10 mg/mL CLC进行处理,共4组,采用Western blot方法分析GV期猪卵母细胞冻融体外成熟培养后凋亡蛋白的表达量。通过Hoechst染色方法检测不同组别的精卵结合能力。结果表明:5 mg/mL CLC处理组GV期冻融的猪卵母细胞体外成熟率高于对照组和0.5 mg/mL CLC处理组(P<0.05),但与10 mg/mL CLC处理组相比差异不显著;与对照组和0.5 mg/mL处理组相比,5 mg/mL CLC处理组显著降低了GV期冻融的猪卵母细胞体外成熟培养后Cleaved Caspase-3蛋白表达量(P<0.05),但与10 mg/mL CLC处理组差异不显著;与对照组和0.5、10 mg/mL CLC处理组相比,5 mg/mL CLC处理组减少了GV期冻融的猪卵母细胞体外成熟培养后透明带硬化时间(P<0.05);与对照组和0.5、10 mg/mL处理组相比,5 mg/mL CLC处理组提高了GV期冻融的猪卵母细胞体外成熟培养后精-卵结合能力(P<0.05)。综上表明,在玻璃化冷冻液中添加5 mg/mL CLC可显著减少GV期猪卵母细胞在冷冻保存过程中受到的低温损伤。 相似文献
7.
本研究探讨了生长激素(STH)和胰岛素对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活后卵裂的影响。结果表明:在mNCSU-23液中,添加0.15μg/mLSTH组的成熟率(73.83%)和卵裂率(64.76%)显著高于对照组和添加0.01、0.05、0.1、0.2μg/mLSTH组(P<0.05);添加5μg/mL和8μg/mL胰岛素组的成熟率(66.25%、60.64%)显著高于添加0、0.5、2μg/mL及10μg/mL组(P<0.05);添加5μg/mL胰岛素组的卵裂率(61.63%)显著高于添加0、0.5、2、8、10μg/mL组(P<0.05);最佳的联合添加组为0.15μg/mLSTH+2μg/mL胰岛素,其体外成熟率为79.37%、卵裂率为72.31%。 相似文献
8.
试验旨在研究不同卵母细胞收集方法及添加半胱氨酸、肝素钠对黄牛卵母细胞体外成熟及体外受精的影响。以黄牛为研究对象,采用两种方法（抽卵法和割卵法）抽取卵泡中的卵母细胞,比较两种方法获取的卵母细胞成熟率,结果发现,抽卵法获得的卵母细胞成熟率显著高于割卵法（P<0.05）。将获取的卵母细胞分为4组：A组（对照组,只添加基础成熟培养液）、B组（基础成熟培养液+200 μmol/L半胱氨酸）、C组（基础成熟培养液+20 μg/mL肝素钠）、D组（基础成熟培养液+200 μmol/L半胱氨酸+20 μg/mL肝素钠）,结果发现,D组的卵母细胞成熟率显著高于A、B、C组（P<0.05）,B、C组间卵母细胞成熟率无显著差异（P>0.05）,但两组卵母细胞成熟率均显著高于A组（P<0.05）;A组卵母细胞卵裂率均显著低于B、C、D组（P<0.05）,B、C、D组间卵母细胞卵裂率无显著差异（P>0.05）;D组囊胚率显著高于其他3组（P<0.05）。结果表明,抽卵法获得卵母细胞效率显著高于割卵法,肝素钠及半胱氨酸对黄牛卵母细胞体外成熟和体外受精都有促进作用,且同时添加两种物质对体外成熟的效果更佳。 相似文献
9.
3种中药有效成分对小鼠胚胎体外发育的影响 总被引：4，自引：0，他引：4
以mCZB添加抗生素为对照组,以分别添加0.1 mg/L小檗碱(berberine,BR)、0.5 mg/L川芎嗪(ligustrazine,Lig)和4 mg/L黄芩苷(baicalin,Bai)为试验组,比较各组胚胎孵化率、微滴中一氧化氮(Nitric oxide,NO)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及孵化胚胎的细胞数量,从而探讨中药有效成分对小鼠早期胚胎体外发育的影响。结果显示,Bai组(80.2%,81.3%)、Lig组(78.9%,77.6%)及BR组(76.7%,71.6%)胚胎孵化率极显著高于对照组(50.7%、47.8%)(P<0.01)。各组间NO含量,72 h较24 h均有减少,而120 h又均有增加且最高。各组间MDA含量,72 h和120 h与24 h比较呈现增加趋势,除Bai组120 h外,对照组均高于试验组。孵化胚胎细胞计数结果显示,BR组(87.2±8.6)、Lig组(83.9±7.7)和Bai组(81.9±6.2)与对照组(77.4±5.6)差异极显著(P<0.01)。结果表明:3种中药有效成分均能促进小鼠早期胚胎的体外发育及胚胎细胞增殖,并对NO和MDA含量有一定影响。 相似文献
10.
试验旨在研究不同卵母细胞收集方法及添加半胱氨酸、肝素钠对黄牛卵母细胞体外成熟及体外受精的影响。以黄牛为研究对象,采用两种方法(抽卵法和割卵法)抽取卵泡中的卵母细胞,比较两种方法获取的卵母细胞成熟率,结果发现,抽卵法获得的卵母细胞成熟率显著高于割卵法(P0.05)。将获取的卵母细胞分为4组:A组(对照组,只添加基础成熟培养液)、B组(基础成熟培养液+200μmol/L半胱氨酸)、C组(基础成熟培养液+20μg/mL肝素钠)、D组(基础成熟培养液+200μmol/L半胱氨酸+20μg/mL肝素钠),结果发现,D组的卵母细胞成熟率显著高于A、B、C组(P0.05),B、C组间卵母细胞成熟率无显著差异(P0.05),但两组卵母细胞成熟率均显著高于A组(P0.05);A组卵母细胞卵裂率均显著低于B、C、D组(P0.05),B、C、D组间卵母细胞卵裂率无显著差异(P0.05);D组囊胚率显著高于其他3组(P0.05)。结果表明,抽卵法获得卵母细胞效率显著高于割卵法,肝素钠及半胱氨酸对黄牛卵母细胞体外成熟和体外受精都有促进作用,且同时添加两种物质对体外成熟的效果更佳。 相似文献
11.
生长激素对体外培养猪COCs影响的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
研究了生长激素对猪COCs体外成熟过程中卵丘细胞扩展、卵丘细胞凋亡、卵母成熟及孤雌激活后卵裂的影响。结果表明:生长激素(STH)能够促进卵丘细胞扩展,抑制卵丘细胞凋亡,对卵母细胞的成熟和激活后卵裂呈现双重效应。在猪COCs培养液中添加0.15μg/mL STH成熟率(73.83%±1.80%)和卵裂率(64.76%±2.84%)显著高于对照组(mNCSU-23+PMSG(10IU/mL)+hCG(10 IU/mL))及添加0.01、0.05、0.1、2μg/mL STH组(P<0.05),在本实验中为猪卵母细胞体外成熟的最佳条件。 相似文献
12.
This study was aimed to examine the effects of UCHL1 inhibition on porcine oocyte maturation in vitro, zona pellucida (ZP) ubiquitination and polyspermy. DAPI staining, Hoechst staining and SDS-PAGE methods were used to detect the matuation rate of porcine oocytes in vitro, the level of ubiquitination of zona pellucida (ZP) and polyspermy. The results showed that after different concentrations UCHL1 inhibitor (10, 20, 25 and 30 μmol/L, DMSO and control group) were added into maturation medium for culturing 46 h in vitro, the mature rate of control group was 86.22%, while the maturation rate of 30 μmol/L group was 15.30%, and the maturation rate of every treatment group had significant difference (P<0.05). Western blotting result showed that every group generated ubiquitin markers of ZP were about 61, 80 and 106 ku in different degree. According to the analysis of gray value, the result had significant difference (P<0.05). Conducting fertilization in vitro, the number of sperm adhered on oocyte ZP in control group was the most, the number of sperm running into oocyte was fewer, the number of sperm adhered on oocyte ZP with 30 μmol/L UCHL1 inhibitor was the fewest, and there was almost no sperm running into the oocyte. The results showed that UCHL1 inhibitor had an impact on maturation of porcine oocytes in vitro. With the higher concentration of UCHL1, the lower degree of ZP protein ubiquitinated, UCHL1 could regulate sperm attachment and polyspermy. 相似文献
13.
在卵母细胞体外成熟培养过程中,培养基中添加激素与否及其激素添加的先后顺序是影响猪卵母细胞核成熟和质成熟的一个重要因素.本试验将猪卵母细胞分别在FSH→不含激素、FSH→LH、FSH LH不含激素中培养48 h(培养第20～22 h后换液),并于成熟培养的第24 h(未换液)、48 h将卵母细胞进行荧光染色,观察其生发泡内染色质构型及卵母细胞核成熟情况.实验表明:(1)在IVM的前24 h,添加FSH LH组的GVIV期卵母细胞比例低于只添加FSH组,但差异不显著(8.99%比17.19%,P＞0.05);(2)在FSH存在的情况下,IVM的前期和后期添加LH能促进卵母细胞发生GVBD;(3)FSH LH培养24 h后转入不含激素培养基组,卵母细胞的核成熟比率显著高于添加FSH组和先添加FSH培养24 h后转入添加LH组(P＜0.05). 相似文献
14.
试验旨在研究抑制泛素羧基末端水解酶-1（UCHL1）对猪卵母细胞体外成熟、透明带泛素化及多精入卵的影响。利用DAPI染色、Hoechst染色及SDS-PAGE等方法检测猪卵母细胞体外成熟率、透明带泛素化水平及多精入卵等情况。结果表明,添加不同浓度UCHL1抑制剂（10、20、25、30 μmol/L,二甲基亚砜（DMSO）及对照组）体外培养猪卵母细胞46 h后,对照组成熟率为86.22%,而30 μmol/L UCHL1抑制剂组的成熟率为15.30%,且各处理组间成熟率差异显著（P<0.05）;经Western blotting检测,各处理组的透明带在约61、80、106 ku处均发生不同程度的泛素标记,通过灰度值分析差异显著（P<0.05）;进行体外受精试验后,发现对照组透明带精子黏附数最多,精子入卵数较少,添加30 μmol/L UCHL1抑制剂组的透明带精子黏附数最少,几乎没有精子入卵。结果显示,UCHL1抑制剂对猪卵母细胞的体外成熟有一定影响,随着UCHL1抑制剂浓度的增加,透明带发生泛素化的程度逐渐降低,且UCHL1可调节透明带精子黏附及多精入卵。 相似文献
15.
The purpose of this study was to determine the effect of LDL addition on oocyte developmental rate,mitochondrial membrane potential and ZP protein ubiquitination level in MⅡ oocytes from vitrified-warmed GV oocytes.Mitochondrial membrane potentials were labeled with specific probe JC-1,and ZP protein samples of different treatment groups in MⅡ oocytes were analyzed by SDS-PAGE and Western blotting methods. The results showed that normal rate and in vitro maturation of MⅡ oocytes in the 10 mg/mL LDL group (71.92% and 69.86%) were significantly higher than those in control group (58.26% and 54.55%)(P<0.05),that were nearest to non-vitrified group.The mitochondrial membrane potential of MⅡ oocytes in the 10 mg/mL LDL group was significantly higher than those in control group and 1,20 mg/mL LDL groups (P<0.05).The ubiquitinated ZP1,ZP2 and ZP3 of MⅡ oocytes in non-vitrified group and LDL treated groups were labeled at 61,80 and 106 ku,respectively.The ubiquitinated ZPs (ZP1,ZP2 and ZP3) level of MⅡ oocytes in the 10 mg/mL LDL group was significantly higher than those in 1 and 20 mg/mL LDL groups (P<0.05),while significantly lower than that of non-vitrified group (P<0.05). In conlusion, LDL could improve the maturation rate, mitochondrial membrane potential and ubiquitinated ZPs level of MⅡ oocytes from vitrified-warmed GV oocytes. 相似文献
16.
为探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)的添加浓度及脱卵丘细胞时间对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育的影响.试验通过在体外成熟液中添加不同浓度(0、10、15、20、30、40 ng/mL)的EGF来研究其对培养44 h的卵母细胞成熟率以及孤雌胚胎发育的影响;在培养开始后的不同时间(18、24、38、44 h)进行脱卵丘细胞处理来研究不同时间脱卵丘处理对培养44 h的卵母细胞成熟率以及孤雌胚胎发育的影响.结果表明,成熟培养基中添加10 ng/mL EGF能显著提高卵母细胞的卵裂率和囊胚率(P <0.05).共培组和独培组卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞成熟率均低于44 h,但差异不显著(P >0.05);共培组卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞的卵裂率和囊胚率显著高于培养44 h(P <0.05);独培组卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞的卵裂率与44 h无显著差异(P >0.05),但囊胚率显著高于培养44 h后脱卵丘细胞(P <0.05).添加10 ng/mL EGF对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育较好;卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞可提高孤雌胚胎早期发育能力. 相似文献
17.
本研究旨在调查活性氧过氧化氢（hydrogen peroxide,H2O2）对猪卵母细胞体外成熟（in vitro maturation,IVM）过程中蛋白质类泛素SUMO-1表达及精-卵结合能力的影响。试验分为0（control）、10、50、75和100 μg/mL H2O2处理组。利用Western blotting、流式细胞术、实时荧光定量PCR、Hoechst染色等方法检测猪卵母细胞体外成熟、蛋白质类泛素SUMO-1含量、细胞活力、凋亡基因mRNA表达、透明带（zona pellucid,ZP）溶解度和精子-卵母细胞结合的表达。结果表明,75 μg/mL H2O2组与对照组、10和50 μg/mL H2O2组比较卵母细胞体外成熟率及细胞活力显著降低;75 μg/mL H2O2组与其他H2O2组相比ZP溶解时间显著延长,并减少了精子黏附在成熟卵母细胞透明带上的数量（P<0.05）。在77和18 ku处出现SUMO-1蛋白标记,75 μg/mL H2O2组与对照组、10和50 μg/mL H2O2组比较SUMO-1蛋白含量显著降低（P<0.05）。75 μg/mL H2O2与对照组、10和50 μg/mL H2O2组比较显著下调了Bcl-2基因,而Caspase-3基因表达与对照组和10 μg/mL H2O2组比较显著升高（P<0.05）,50 μg/mL H2O2与对照组和10 μg/mL H2O2组相比显著上调了Bax基因水平（P<0.05）。综上所述,H2O2能调控猪卵母细胞体外成熟过程中类泛素化水平以及精-卵结合能力。 相似文献
18.
试验旨在探究玻璃化冷冻及培养过程中添加甘氨酸（glycine，Gly）对水貂GV期卵母细胞冷冻解冻后存活率、核发育、线粒体和皮质颗粒分布的影响。试验分为3组：对照组（没有进行冷冻处理）、冷冻组和Gly添加处理组（1 mmol/L Gly）。对玻璃化冷冻解冻后的水貂GV期卵母细胞分别进行平衡恢复3 h和体外成熟培养，采用免疫荧光标记法检测各组GV期卵母细胞线粒体分布的差异及MⅡ期皮质颗粒分布的变化。结果显示，Gly添加处理组卵母细胞在解冻后3 h的存活率与冷冻组相比差异不显著（P>0.05），但显著低于对照组（P<0.05）；Gly添加处理组卵母细胞的减数分裂恢复率显著高于冷冻组（P<0.05），但与对照组相比差异不显著（P>0.05）。免疫荧光结果显示，Gly添加处理组的GV期卵母细胞线粒体正常分布率显著高于冷冻组（P<0.05），但Gly添加处理组和冷冻组的GV期卵母细胞线粒体正常分布率均显著低于对照组（P<0.05）。皮质颗粒分布结果显示，水貂GV期卵母细胞在冷冻后体外成熟培养至MⅡ期时，Gly添加处理组皮质颗粒的正常皮质区分布比例显著高于冷冻组（P<0.05），但Gly添加处理组与冷冻组的正常皮质区分布比例均显著低于对照组（P<0.05）。结果表明，添加Gly可以提高冻融后水貂卵母细胞的减数分裂恢复率，降低冷冻对其线粒体及皮质颗粒的损失。 相似文献