猪原代肝细胞的分离及体外培养模型的建立     

郑鑫  梁海涛  杨连玉  李家奎  杨文艳  王哲 《中国兽医学报》2004,24(6):584-586

采用剪切消化法 ,对猪肝细胞进行了分离和原代培养。结果显示 :分离的肝细胞即时存活率为 93.4 % ,培养存活率为 87.6 % ,并观测了肝细胞体外的生长形态和增殖规律 ,摸索了建立猪原代肝细胞体外培养模型的条件 ,为在细胞水平研究猪的营养代谢提供了方法和技术保障  相似文献   

大鼠肝细胞与kupffer细胞的分离与鉴定     

李婉雁  相雪莲  曹楠  陈文斌  潘建秋  江丹莉  田允波  黄运茂  许丹宁 《广东畜牧兽医科技》2021,46(2):46-49,52

本研究旨在建立一种简单有效的分离大鼠肝细胞和kupffer细胞的方法。大鼠体外肝脏灌流,采用percoll密度梯度分离法分离肝细胞与kupffer细胞,糖原染色鉴定肝细胞,墨汁吞噬实验鉴定kupffer细胞。结果表明,此方法分离的肝细胞和kupffer细胞活性都在95%以上,新分离的肝细胞鹅卵石样,贴壁能力不是特别强,24 h可分化出不同形态。Kupffer细胞具有较强的吞噬能力和贴壁能力,可看到墨汁被细胞吞噬。结论:本实验建立的分离培养方法较稳定,为开展肝细胞和kuffer细胞的相关研究提供方法依据,也为建立各种体外细胞分离培养方法提供借鉴。  相似文献   

原代牛肝细胞分离和培养方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

吴显实  卫程武  黄克和 《中国兽医学报》2009,29(2)

采用胶原酶灌注消化法,对来自新生小牛血清制备厂的牛肝脏尾状突材料进行肝细胞分离,用台盼蓝拒染法测定总细胞数和肝细胞即时存活率,以每孔1×106个肝细胞的量接种于牛尾胶原包被的6孔细胞培养板,进行单层培养细胞形态学观察和培养基上清液LDH活性测定.结果显示,每头小牛肝脏尾状突分离获得的细胞产量为(3.558±0.096)×108个,肝细胞即时存活率为(84.46±3.56)%,培养24～72 h的肝细胞生长状态最好,适合用于有关肝细胞代谢、中毒、基因表达的研究.  相似文献   

鸡原代肝细胞的分离及培养     

牟彦双  王丹  王宇祥  石慧  李辉 《畜牧与兽医》2013,45(4)

选用18日龄肉仔鸡作为试验动物,应用半原位酶消化法分离鸡肝细胞。在获取鸡肝细胞过程中,先用灌流液在原位对肝脏进行灌流,然后取下肝脏用Ⅳ型胶原酶对肝脏进行灌流消化,200目筛网、300 g离心5 min可获得大量的、纯度均一、活力较高的细胞。细胞经形态学动态观察、电镜观察内部结构及对脂类相关基因表达的检测,证明肝细胞具有功能活性。本研究建立了鸡肝细胞原代培养方法,为研究鸡肝细胞脂类代谢的生物学过程提供技术平台。  相似文献   

半原位灌流法分离成年鸡肝细胞及原代培养     

《畜牧与兽医》2015,(6):115-118

采用半原位灌流法,对40~50日龄的海蓝公鸡进行肝细胞分离,采用台盼蓝拒染法测定细胞总数并计算肝细胞实时存活率,肝细胞以5×105m L的密度接种于6孔细胞培养板,每孔3 m L。在CO2培养箱中培养,观察细胞形态,测定不同培养阶段细胞培养上清液中LDH活力。结果显示每只鸡肝脏分离获得的细胞产量为(4.1±0.2)×108个,肝细胞实时存活率为(95±1)%,培养48 h至144h,细胞上清液中LDH活力在低水平下保持稳定,细胞可维持良好的生长状态达7 d以上。显示该方法可用于分离培养成年鸡肝细胞,分离培养的鸡肝脏细胞可用于研究细胞代谢、基因表达和肝细胞毒性。  相似文献   

蛋鸡肝细胞分离及制备方法的优化     

周筱丹  董晓芳  佟建明  徐鹏 《中国兽医杂志》2012,48(3):24-26

本试验旨在为蛋鸡肝脏细胞分离和制备方法进行优化。以结扎肠系膜后静脉远心端,不结扎输卵管静脉和胰十二指肠静脉的成年鸡肝细胞培养灌流法为对照组;以本试验建立的同时结扎该3条静脉的灌流方法为处理组,进行蛋鸡肝细胞培养,分别记录肝脏灌流的成功率、肝细胞数量和细胞活率。同时,分别于试验第4、24、48、144、168小时测定肝细胞培养基上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力。结果显示,优化后的方法可使蛋鸡肝脏灌流的成功率提高至100%,肝细胞数量显著增加至(1.09±0.21)×109个(P<0.05),细胞活率也显著提升至(95.3±1.3)%(P<0.05)。两种方法培养的肝细胞培养基上清液LDH活力无显著差异(P>0.05)。本试验建立的肝细胞分离和制备方法比原有方法,更适用于产蛋家禽肝细胞的分离和制备。  相似文献   

鹅肝细胞的分离培养及其三酰甘油合成功能检测     

刘容  韩春春  王继文  周力  温万雪  宋奇 《中国家禽》2012,34(22)

本文旨在探讨鹅肝细胞的分离与原代培养方法,并对分离的肝细胞三酰甘油(TG)合成功能进行检测.采用改进的Seglen二步法分离纯化来自10日龄仔鹅肝脏的肝细胞,并进行原代培养.在倒置显微镜下观察肝细胞形态变化,MTT比色法测定细胞活性,用脂肪酸培养肝细胞并检测其形态、活性和细胞内TG含量的变化.结果显示,分离出的肝细胞形态完整、贴壁良好、活性高,细胞活性曲线与理论“S”型细胞生长曲线基本符合.另外,脂肪酸能增加肝细胞体积、活性和TG含量.结果表明,本研究成功分离了鹅肝细胞并进行了原代培养,肝细胞生酯功能正常.  相似文献   

成年鸡原代肝细胞两种分离方法的比较     

刘静  刘传敦  丁雪莹  唐兆新 《中国兽医杂志》2012,48(6):34-38

为获得数量多及活力好的原代肝细胞,本试验分别采用原位二步法与半原位法分离鸡的肝细胞.应用MTT法比较了两种分离方法的细胞活力,应用电镜观察了分离细胞的超微结构,并分别在体外培养的第1、3、5天和第7天检测肝细胞上清液的AST、ALT、ALB和GGT,以鉴定鸡原代肝细胞的生化功能.结果显示,采用半原位法分离的鸡肝细胞与原位二步法相比,细胞数量多、活力高、结构完整,可在体外持续培养7d并稳定地保持肝细胞的形态与功能.  相似文献   

镉对原代培养大鼠肝细胞的损伤作用   总被引：7，自引：1，他引：6  

王捍东  邢华  卞建春  刘学忠  任建新  王宗元 《中国兽医学报》2000,20(6):580-583

用活体肝脏灌注、胶原酶消化法分离大鼠肝细胞并作原代培养,以CdCl2(0～250或500umol/L）处理,测定培养上清液中LDH、ALT、ARG和细胞内GSH-Px、GSH、MDA等的含量,探讨镉对肝细胞的损伤作用和脂质过氧化状况。结果当Cd≥10和5umol/L时,细胞内LDH、ARG泄漏分别明显增加,GSH-Px活力显著受到抑制,GSH含量和MDA产生随着镉的剂量增大而增加（Cd≥50 umol/L）。认为镉对肝细胞的损伤和对细胞膜完整性的破坏,与脂质过氧化有关;镉处理后细胞中GSH增加可能与镉抑制了还原型谷胱甘肽向氧化型谷胱甘肽的转化有关。镉可直接抑制ALT本身的活性,因而认为以细胞内ALT泄漏作为镉诱导细胞损伤的评价指标时要予以注意。  相似文献   

骨骼肌卫星细胞的分离和培养   总被引：1，自引：0，他引：1  

张臻  钟Hong 《动物医学进展》1999,20(4):8-10

骨骼肌卫星细胞是骨骼肌中位于肌细胞膜和基膜之间的具有增殖分化潜力的肌源性干细胞,负责骨骼肌的生长和骨骼肌的损伤修复。本文对分离和体外骨骼肌降临细胞的方法进行了综述,展望卫星细胞分离和培养方法的改进及应用前景。用适当的方法将卫星细胞从骨骼肌中分离出来进行体外培养,不仅能直接观察其增殖分化的特性,而且可以在排除体内其它类型细胞影响的条件下,对卫星细胞的生理和生化特点进行研究。  相似文献