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甜菜CDDP-PCR扩增体系的建立及优化 总被引：3，自引：2，他引：1
为了建立最优甜菜的来源保守DNA序列多态(conserved DNA-derived polymorphism,CDDP)分子标记扩增体系,以期利用CDDP分子标记技术进行甜菜品种指纹图谱的构建、核心种质构建及分子标记辅助育种。本实验利用单因素变量的方法对甜菜CDDP体系进行优化;最终确定了甜菜最适CDDP体系,体系总体积为20μL,其中包括10μL MIX,0.5μL引物,0.5μL DNA模板。利用优化的体系对8个甜菜二倍体品系进行扩增,结果表明所有材料都能扩增出清晰稳定的条带,并且多态性丰富,由此可以说明本研究对CDDP进行优化的体系非常适合甜菜CDDP-PCR分析。 相似文献
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直接扩增甜瓜小卫星DNA指纹图谱 总被引：4，自引：0，他引：4
以小卫星DNA YNZ22核心序列为引物,甜瓜DNA为模板,在甜瓜上研究了直接扩增小卫星DNA(DAMD)的优化反应体系,结果表明:在20μL的反应体系中,5种主要成分Taq DNA聚合酶、Mg2 、引物、模板DNA和dNTPs的最适浓度分别为1U,2.5 mmol/L,0.5 mmol/L,30 ng,5 mmol/L。在优化的DAMD-PCR反应体系下,利用该引物在28个甜瓜品种上构建了直接扩增小卫星DNA(DAMD)的指纹图谱,分析结果表明,该引物在28个甜瓜品种上共扩增出13位点,其中9位点具有多态性,多态性条带比率为69%,可一次性从28个甜瓜品种中鉴别出其中的21个,鉴别率高达75%。 相似文献
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甜菜SCoT-PCR反应体系的建立及优化 总被引：2，自引：2，他引：0
旨在利用SCoT分子标记技术为甜菜指纹图谱构建、遗传多样性分析以及其他分子标记辅助育种提供技术支持。本研究利用单因素实验优化了甜菜SCoT-PCR反应体系。结果表明,在20 μL反应体系中,甜菜SCoT-PCR最优反应体系包含2.0 μL的10×PCR buffer（含Mg2 ）、10 ng的DNA、0.5 U的Taq DNA聚合酶、10 μmol/L的引物2 μL以及0.1 μL的dNTPs (2.5 mmol/L each)。利用优化后的程序对12份糖甜菜品种进行扩增,结果表明,该体系扩增结果稳定、条带清晰,可用于甜菜品种指纹图谱的构建以及其他分子生物学领域的研究。 相似文献
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甜菜SCoT核心引物的筛选 总被引：2，自引：2，他引：0
【研究目的】为了筛选出适合甜菜品种遗传多样性分析的SCoT引物,为SCoT引物得以在甜菜中进行深入应用奠定基础,本研究甜菜以8个来自不同国家的甜菜品种为材料对80条SCoT引物进行扩增【方法】扩增方法采用SCoT-PCR最优反应体系包含2.0 μL的10×PCR buffer（含Mg2+）、10 ng的DNA、0.5 U的Taq DNA聚合酶、10 μmol/L的引物2 μL以及0.1 μL的dNTPs (2.5 mmol/L each)。【结果】结果从80条SCoT引物中筛选出20条多态性高的引物,这20条引物最多扩增出16条多态性条带,最少扩增出2条多态性条带,扩增总条带155条,其中多态性条带为134条,多态性条带的百分比为86.5%。【结论】通过对核心引物的有效性验证,表明筛选出的20个核心引物非常适合用于甜菜指纹图谱的构建。 相似文献
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适合于甜菜品种鉴定的ISSR核心引物的筛选 总被引：2，自引：2，他引：0
探寻适合甜菜品种鉴定的ISSR引物,用以构建甜菜品种的指纹图谱。利用一个品种对全部100条ISSR引物进行退火梯度实验,然后利用16个进口甜菜品种在每个引物的最佳退火温度下对全部引物进行扩增,筛选适合甜菜品种纯度鉴定的ISSR引物。结果从100条ISSR引物中筛选出多态性高、扩增条带清晰、重复性好的引物16条,这16条ISSR引物总共扩增100条多态性条带,引物的PIC值均大于0.6,从理论上讲,这些核心引物完全可以实现对现有甜菜品种的鉴定。 相似文献
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以糖用甜菜为材料,利用单因素实验探讨甜菜TRAP-PCR反应体系中dNTPs、引物、模板以及DNA聚合酶等4个因素的浓度变化对扩增结果的影响,最终建立糖用甜菜的最佳TRAP-PCR反应体系。结果表明,在20 μL反应体系中,甜菜TRAP-PCR最优反应体系包含2.0 μL的10×PCR buffer（含Mg2+）、10 ng的模板DNA、0.75 U的Taqase、10 μmol/L固定引物及随机引物各0.8 μL以及0.5 μL的dNTPs (2.5 mmol/L each)。并建立了一种快速开发甜菜TRAP-PCR引物的方法,利用优化后的程序对15份糖甜菜品种进行扩增。结果表明,该体系扩增结果稳定、条带清晰,部分引物多态性丰富,可用于糖用甜菜品种指纹图谱的构建以及其他分子生物学领域的研究。 相似文献
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为获得沙棘SCoT-PCR最佳反应体系并筛选出适用引物,本研究采用正交试验设计与单因素试验设计的方法对其反应体系进行优化,并在此基础上对设计的80条引物进行筛选。试验结果表明:沙棘SCoT-PCR最佳反应体系(20μL)为:2×Taq PCR预混试剂Ⅱ用量9.8μL,模板DNA用量25 ng,引物浓度0.9μmol/L;从设计的80条SCoT引物中筛选出24条扩增条带清晰、多态性较高的引物。本研究结果可为沙棘遗传多样性、遗传图谱构建、品种指纹图谱的构建等研究提供相关依据。 相似文献
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为了筛选适宜于甜菜品种纯度鉴定的DAMD引物,笔者利用12 个不同的甜菜品种分别对26 条DAMD引物进行扩增,并分别采用6%聚丙烯酰胺凝胶电泳和2%的琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行检测。结果表明,从26 条DAMD引物中筛选出16 条扩增清晰的引物,这16 条引物共扩增出139 条带,其中多态性条带为122 条,多态性百分比为87.7%,这16 条引物可以作为甜菜品种纯度和真实性鉴定的核心引物,同时发现聚丙烯酰胺凝胶电泳与琼脂糖凝胶电泳的检测结果差异不大,而琼脂糖凝胶具有制作方便、检测简单以及不使用任何有毒药剂等优点,推荐甜菜DAMD扩增产物的检测使用琼脂糖凝胶电泳。 相似文献
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为了根据遗传背景快速区分和鉴定甜菜品种的真实性和特异性,补充和打破形态学鉴定法的短板和局限,以96份甜菜登记品种为试材,采用DAMD分子标记技术构建了甜菜品种的分子身份证。结果显示,有7条扩增条带清晰、多态性较好的DAMD引物可用于鉴别甜菜品种,这7条引物共检测出103条带,其中多态性条带101条,多态性98.1%;96个品种间的最小遗传距离为0.039,最大为0.485,平均遗传距离0.237。通过聚类分析,96个甜菜品种被分为两类群,类群I仅有54号品种,类群II包含其余95个品种,类群II进一步又分两个亚群。仅利用URP1F、URP17R和URP2R这3条引物组合将96个供试甜菜品种完全区分。利用DAMD引物构建甜菜品种的分子身份证,为快速、高效地鉴定甜菜品种提供了一种新的途径,也为保护育种家和农民的利益提供了保障。 相似文献
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国产糖甜菜品种SSR指纹图谱的构建 总被引：7，自引：7，他引：0
为了构建14份国产甜菜品种的指纹图谱,利用6个差异较大的甜菜品系对50对SSR引物进行筛选,共选出7对多态性高、带型清晰、重复性好的SSR引物。利用这7对SSR引物对国产14份糖甜菜品种进行扩增,共获得40条谱带,其中多态性位点28个,多态性比率达75%;每对引物产生的等位基因数为5-8个,平均6.6个。利用其中三对引物S6,S13和BVGTT6构建了14份国产甜菜品种的DNA指纹图谱,结果表明,每个甜菜品种有唯一的数字指纹区别于其它品种,说明SSR标记适用于甜菜品种纯度和真实性的鉴定,同时甜菜品种指纹图谱库的构建也为将来可能出现的甜菜品种纠纷打下坚实的技术基础。 相似文献
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玉米弯孢菌叶斑病菌致病性分化的RAPD鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
从60条随机引物中选择12对组合,对玉米弯孢叶斑病菌基因组DNA进行随机扩增,共扩增出128条遗传标记.根据这些标记使用Statistic统计软件对菌株之间相互关系进行聚类分析,结果表明:菌株间最高相似系数是为87%,最低为47%.22个供试菌株在连锁距离0.4范围内全部聚在一起,树状图上的菌株可分成5～6组.a组包括:98-36、98-25、98-17、98-07、98-01和98-28 6个菌株,是遗传基础最接近的一组. 相似文献
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摘要：为了提高小麦蛋白质含量,采用离子束介导法将大豆（Glycine max）豫豆23号的基因组DNA导入小麦（Triticum aestivum L.）品种中育5号和淮阴9628。获得T1代高蛋白含量（>15%）单株114株,蛋白质含量最高达21.44%,显著提高了小麦蛋白质含量。从T1到T3代连续单株选择,获得了16个遗传上基本稳定的T3代株系。结果表明,离子束介导的大豆基因组导入是小麦高蛋白含量改良的可行途径。 相似文献
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jinfenwen@yahoo.com.cn 《中国农学通报》2006,22(5):264-264
（1昆明理工大学现代农业工程学院,昆明 650224;2云南农业大学园林园艺学院,650201;
3湖南农业大学理学院,长沙 410128） 相似文献
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选择一种快速、简便、经济的从马血液中提取基因组DNA的方法。分别采用了常规酚—氯仿抽提法、简易酚—氯仿快速抽提法和V—gene Biotechnology Limited试剂盒三种方法从马血中提取DNA,并利用琼脂糖凝胶电泳技术和紫外分光光度计,比较各方法提出DNA的浓度和纯度,且利用PCR扩增技术检测DNA的实用性。结果表明,常规酚—氯仿抽提法适合从马血中大量提取DNA。 相似文献
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亚洲栽培稻的核DNA、线粒体DNA和叶绿体DNA籼粳分化的比较研究 总被引：8，自引：2，他引：6
本研究对来自１２个国家的７４份亚洲栽培稻进行了核ＤＮＡ,线粒体ＤＮＡ的ＲＦＬＰ分析和叶绿体ＤＮＡ的ＯＲＦ１００的ＰＣＲ分析结果表明参试的７４个栽培稻品种,除ＣＲ１４７的线粒体基因组的类型较为特殊外,其它７３个品种的细胞核基因组,线粒体基因组,叶绿体基因组均可分为籼粳两种类型,可见籼粳分化是栽培稻核ＤＮＡ,ｍｅｔ ＤＮＡ和ｃｐＤＮＡ遗传分化的主流,同一品种３个ＤＮＡ的籼粳属性即有一致的,又有不一致的 相似文献