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1.
‘津田’芜菁消减cDNA文库的构建及分析 总被引：4，自引：1，他引：3
以‘津田’芜菁红色块根和白色块根为材料, 利用SSH技术成功构建了消减cDNA文库并富集相关基因片段。从消减文库中筛选到960个阳性克隆, PCR鉴定插入片段长度主要分布于300～800 bp之间。克隆测序后与GenBank中的同源序列进行比较, 特异基因片段为302个, 其中99个与数据库中的序列具有相似区域且功能已知, 与数据库中序列没有显著同源性及功能未知的序列为203条。 相似文献
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利用SSH分离TDZ诱导金钗石斛成花相关基因 总被引：1，自引：0，他引：1
以金钗石斛（Dendrobium nobile Lindl.）腋芽为材料,利用抑制消减杂交（SSH）技术构建了TDZ处理后金钗石斛腋芽的正向和反向SSH文库。通过PCR和反向Northern杂交验证后,得到的正向文库的314个阳性克隆和反向文库的59个克隆测序后经过聚类,最终得到39条受TDZ正向调控的EST序列,以及21条受其反向调控的EST序列。对其中某些差异基因进行半定量RT-PCR,结果显示这些基因的表达受TDZ的影响。利用Blastn和Blastx进行比对分析,其中20个没有同源序列,属于未知功能基因。其余序列的同源基因编码的产物参与包括光合作用、合成代谢、转录调控等多种生物学过程。在反向文库中分离到1个MADS-box基因的同源序列和1个Sos同源基因,而正向文库中存在多个反转录转座子,这些结果表明TDZ可以影响开花过程中的某些转录因子和信号基因的表达,进而促进金钗石斛开花。 相似文献
3.
基于RACE技术,以铁皮石斛叶片总RNA为起始材料,通过逆转录和末端转移构建出两端含有特定序列的cDNA。然后以连接有特定序列的引物进行cDNA的PCR扩增,从而构建出mRNA的cDNA PCR文库。结果表明:cDNA PCR文库的PCR效果明显高于逆转录产物的PCR效果,该方法构建的cDNA PCR文库能使cDNA放大100倍以上;以5pg的总RNA为起始材料构建cDNA PCR文库仍可得到良好的PCR扩增效果;该研究的cDNA PCR文库构建方法费用较低,操作简单,为克隆微量表达的基因提供了技术基础。 相似文献
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应用抑制性消减杂交分离板栗短雄花序芽变相关基因 总被引：3，自引：0，他引：3
利用抑制性消减杂交技术分离了板栗正常花序与芽变花序之间表达的差异cDNA片段。以芽变板栗雄花序cDNA为试验方(tester),以对照板栗雄花序cDNA为驱动方(driver),构建了一个板栗芽变花序消减文库。菌落PCR显示插入片段主要在100～1000 bp,文库质量良好。通过对文库阳性克隆随机测序共得到了30个有效EST序列。利用Blast同源性比较,其中一些EST可能与板栗雄花序发育中变短的生物学形态形成密切相关,为后续板栗短雄花序芽变相关基因的研究奠定了基础。 相似文献
6.
以资阳香橙根RNA为材料,采用SMART技术构建了cDNA全长文库,并对其质量进行鉴定.结果显示,该文库的库容量为4.8×105pfu/mL,重组率为93%,文库插入片段大小主要集中在0.5～1.0kb.从文库中随机挑取450个克隆进行5′端单向测序,去除载体序列及低质量的序列后,共获得有效长度大于150 bp的高质量ESTs(expressed sequence tags)序列438条,利用BioEdit软件对有效ESTs序列进行片段重叠群分析和拼接后,获得251个独立基因(Unigenes),其中包括87个片段重叠群(Contigs)和164个独立的ESTs(Singlets);通过与NCBI的非冗余核酸数据库进行tBLASTx比对,初步确定已知功能基因146个,未知功能基因91个,另有14个unigene未与数据库中序列匹配.该研究为进一步分离克隆资阳香橙根部功能基因奠定了基础. 相似文献
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以铁高效基因型植物———苹果属小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et J iang) 为材料, 利用抑制性消减杂交( SSH) 方法, 成功构建了小金海棠缺铁条件下的消减cDNA文库。该文库包含1 152个克隆, 通过PCR检测插入片段大小在300～1 000 bp之间。对构建的消减cDNA文库进行差异筛选, 得到差异表达片段( ESTs) 105个。GenBank上BLAST结果如下: 50个ESTs与其它物种同源性较高, 视为已知基因, 并根据其功能分为9个组; 32个ESTs在GenBank中无法查到对应的同源序列, 可能代表了新基因;另外23个是与已知ESTs重复的基因片段。 相似文献
8.
为了分离和克隆辣椒中疫霉菌诱导基因,以接种辣椒疫霉菌的叶片为材料,利用SMART技术构建辣椒疫霉菌与辣椒互作的双杂交c DNA文库。结果表明:该文库容量为3.6×106cfu,重组率88%左右,插入片段集中在300~2000bp之间,平均长度约为800bp,表明获得的文库质量较高,该文库将为分子育种提供重要的基因资源。 相似文献
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结球甘蓝cDNA文库的构建和鉴定 总被引：4，自引：0，他引：4
构建了结球甘蓝cDNA 文库。文库的宿主菌为E. coli XL1-lue。对文库的部分特性进行研究,滴度为2 ×108～4 ×108 pfu/ mL , 插入片段的大小均在500 bp 以上, 以1kb 以上的片段占大多数, 重组体的重组率为95 % , 用抗病基因片段作探针进行噬菌体原位杂交, 杂交信号明显。对文库进行了扩增、保存。 相似文献
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通过同源克隆从低温春化处理的金钗石斛腋芽中分离到1个SEP3-like基因的全长cDNA。该cDNA含有长度为684 bp的开放阅读框,可编码由227个氨基酸组成的蛋白质。同源搜索和系统进化分析表明,该蛋白与拟南芥AtSEP3同源,并同属于MADS-BOX 家族的SEP亚家族中的SEP3分支,故将该基因暂定名为DnSEP3-like。与其它的石斛属的SEP3蛋白类似,DnSEP3-like蛋白缺失C–末端的部分基序。DnSEP3-like基因的表达受春化作用的影响,其转录产物随春化时间延长逐渐积累,在春化20 d时达到峰值,暗示该基因可能参与春化调控开花的生物学过程。 相似文献
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苹果MxIrt1基因的克隆与原核表达 总被引：3，自引：0，他引：3
根据植物IRT(Iron Regulated Transporter)家族的功能保守区设计引物,通过RACE法从缺铁胁迫处理的小金海棠根系cDNA文库中克隆得到了Fe2+转运蛋白基因cDNA全长,将其命名为MxIrt1(Malus xiaojinensis Iron regulated transporter 1)。将MxIrt1 cDNA片段与pET30a构建原核表达载体pEIrt,转化大肠杆菌BL21。SDS-PAGE电泳检测结果表明,以30℃、0.5mmol·L-1 IPTG诱导该基因表达效果最好,诱导产物为一个40kD的蛋白。为进一步纯化和鉴定目的蛋白提供了试验基础。 相似文献
14.
The forward and reverse suppression subtractive cDNA libraries were constructed in petals of Eustoma grandiflorum at bud stage (stage 1) and anthesis (stage 7). Approximately 1000 clones were isolated from stage 1- (S1) and stage 7-specific (S7) libraries. The clones were sequenced and assembled, which yielded 98 contigs and 444 singletons. BLAST search was conducted on these assembled sequences. Generally, probes isolated from the S7 library exhibited higher expression at stage 7 by microarray analysis, as did those of the S1 library at stage 1. A clone set from the S7 library contained genes from later steps of anthocyanin biosynthesis pathway, terpene synthases, GAST (gibberellic acid-stimulated) family proteins, xyloglucan endotransglucosylase/hydrolase, glycosidases, and stress- and senescence-related proteins. In contrast, the S1 library contained genes associated with flavonol biosynthesis, phenylpropanoid metabolism, terpenoid metabolism, and floral organ development. Gene expression profiling for flavonoid biosynthesis was in accordance with preferential accumulation of flavonols at bud stages and anthocyanins at anthesis. 相似文献
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辣椒离体植株再生及其变异的SSR检测 总被引：1，自引：0，他引：1
采用6个不同基因型辣椒（Capsicum annuum L.）的子叶、下胚轴、去除生长点并带下胚轴和各切去一半的两片子叶、去除生长点并带下胚轴和半片子叶为外植体，分别培养在附加不同激素和 AgNO3 的MB5和MS培养基上，研究不同基因型、外植体、激素配比和AgNO3等对外植体不定芽诱导和芽伸长的影响。结果表明，不定芽诱导以MB5+2.0 mg·L-1 TDZ+1.0 mg·L-1 IAA+4 mg·L-1 AgNO3培养基最佳，诱导率最高可达100 %。而芽伸长的最佳培养基为MB5+3.0 mg·L-1 6-BA+0.5 mg·L-1 IAA+5.0 mg·L-1 AgNO3+2.0 mg·L-1 GA3，最高伸长率可达87.5 %。生根培养基为MS+0.2 mg·L-1 IAA+0.1 mg·L-1 NAA，生根率均达100 %。不同的外植体类型具有不同的不定芽诱导和芽伸长的能力，以去除生长点并带下胚轴和各切除一半的两片子叶作外植体时的诱导效果最好。用50对SSR引物检测再生植株，其中86株伏地尖的再生植株和对照植株间均没有扩增出差异条带，而茄门再生植株的SSR检测结果有12对引物表现多样性。 相似文献
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以‘国光’苹果（S1S2）花粉为材料,成功构建了酵母pGADT7-cDNA文库,转化效率约为1.2 × 106 · μg-1,插入片段大小在300 ~ 2 000 bp之间。通过酵母双杂交方法,用苹果S2-RNase的C2HVC3区筛选文库获得一个长505 bp的cDNA片段,经分析发现该cDNA序列上有一个261 bp的开放阅读框（ORF）,该ORF编码一个具N端信号肽的多肽,该成熟多肽由64个氨基酸组成,富含带正电荷的赖氨酸和精氨酸,其C端有8个半胱氨酸和一个γ–硫堇功能域,结构预测显示其具有一个α螺旋,3个β折叠,4个二硫键,由此,推断其为苹果γ–硫堇,命名为MdD1。RT-PCR分析发现：MdD1基因在‘国光’苹果叶片、萼片、花瓣、子房、花药和花柱等组织中都有表达,但花药中表达量最高。酵母双杂交结果表明MdD1除了与苹果S2-RNase的C2HVC3区互作外,还与S1-RNase的C2HVC3区,S1、S2-RNase的成熟多肽区存在互作。初步认为：苹果γ–硫堇可能通过与S-RNase非特异性互作,作为花粉非S因子参与自交不亲和反应。 相似文献
18.
强光胁迫下外源NO对霍山石斛叶绿素荧光和抗氧化系统的影响 总被引：5，自引：1，他引：4
以兼性景天酸代谢(CAM)植物霍山石斛为材料,研究强光胁迫条件下,外源NO对其叶绿素荧光和抗氧化系统的影响。结果表明： 0. 1 mmol·L-1硝普钠(SNP)处理提高了石斛光合系统Ⅱ(PSⅡ)的光能转换效率和潜在活性,增加了过剩光能的非光化学耗散,缓解了光抑制的发生,同时通过增强抗氧化系统的活性氧清除能力,有效保护了光合机构免受强光胁迫的伤害,PSⅡ反应中心得以较快恢复。而经0.5 mmol·L-1SNP处理后,霍山石斛的光能转换系统未能通过有效的光能转换和非光化学反应耗散过剩的光能,降低了抗氧化系统中SOD、POD和CAT的活性,加剧了PSⅡ反应中心光抑制的发生。 相似文献